γ干擾素體外誘導大鼠脾臟樹突狀細胞ＩＤＯ表達的實驗研究

[摘要] 目的 探討γ干擾素（IFN-γ）誘導大鼠脾臟樹突狀細胞（DC）的吲哚胺2，3-雙加氧酶（IDO）的表達情況。方法 大鼠脾臟分離培養DC，進行形態特征觀察，流式細胞術檢測DC的表型及確定其純度。分別用不同濃度的IFN-γ誘導作用DC后，熒光定量RT-PCR測定IDO mRNA的相對表達水平。結果 大鼠脾臟分離培養的DC純度可達80%以上，培養10d的DC具有典型的樹枝狀突起，CD80、CD86的陽性表達分別達75%、90%以上。IDO mRNA的表達水平隨IFN-γ的濃度的增大逐漸增加。結論 IFN-γ在體外能誘導大鼠脾臟DC的IDO表達。

[關鍵詞] 樹突狀細胞；吲哚胺-2，3-雙加氧酶；γ干擾素

[中圖分類號] R322.1 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701（2009）12-48-03

Study of γ-interferon-induced Expression of Indoleamine 2，3-Dioxygenase of Rat Spleen-derived Dendritic Cells in Vitro

ZHANG Jing1XU Jun2

1.Shanxi Medicine University；2. General Surgery of Shanxi Province People's Hospital，Taiyuan 030012

[Abstract] Objective To study the effect of γ-interferon（IFN-γ） on the indoleamine 2，3-dioxygenase（IDO） expression in rat spleen-derived dendritic cells（DC）. Methods DC were isolated and cultured from spleen in rat. The morphology of DC observed by microphotograph. The purity and phenotype were analyzed with flow cytometry. Separately with different concentrations of IFN-γ induced DC，relative expression of IDO mRNA were detectec by fluorescence quantitative RT-PCR. Results The purity of cultured DCs above 80%.DCs cultured at 10 days with typical dendritic morphogy. The positive expression of CD80 and CD86 were more than 75% and 90%.Expressions of IDO mRNA with the concentration of IFN-γ increased gradually increase. Conclusion IFN-γ could induce the expression of IDO of rat spleen-derived DC in vitro.

[Key Words] Dendritic cells； Indoleamine 2，3-dioxygenase； γ-interferon

樹突狀細胞（DC）是機體內功能最強的抗原提呈細胞，不僅參與對外來抗原的免疫反應，而且在誘導免疫耐受中也起著重要的作用。DC可通過多種機制誘導免疫耐受。最近有研究表明，DC還可能通過產生吲哚胺-2，3-雙加氧酶（IDO）來降低T淋巴細胞活性、抑制T淋巴細胞增殖[1-2]，誘導免疫耐受。因此，上調DC細胞的IDO表達可能為誘導移植后免疫耐受的新策略。本研究觀察在γ干擾素（IFN-γ）作用下DC的IDO表達情況，為今后IDO應用于防止移植免疫排斥反應提供一定的實驗基礎。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1主要試劑RPMI1640培養液、胎牛血清購自美國Hyclone公司，重組大鼠粒細胞集落刺激因子（rmGM-CSF）、重組大鼠白細胞介素4（rmIL-4）、重組大鼠干擾素γ（IFN-γ）購自美國Pepro Tech公司，脂多糖（LPS）購自美國Sigma公司，PE標記的抗大鼠OX62購自英國AbD serotec公司，PE標記的抗大鼠CD80、FITC標記的抗大鼠CD86購自美國eBioscience公司。反轉錄試劑盒購自Fermentas公司，IDO與β-actin引物和TaqMan探針由上海基康生物技術有限公司設計。……