血管內皮生長因子Ｃ及Ｐｏｄｏｐｌａｎｉｎ在人食管癌組織中的表達

[摘要] 目的 研究血管內皮生長因子C（VEGF-C）及Podoplanin在食管癌組織中的表達及意義。方法 取臨床手術切除的50例食管癌組織，用免疫組化方法檢測食管癌中VEGF-C及Podoplanin的表達情況。結果 在食管癌的癌細胞中可見VEGF-C陽性表達，陽性顆粒主要定位于腫瘤細胞胞漿內，并且進展期食管癌中VEGF-C表達明顯高于早期，VEGF-C的表達與患者的性別、年齡無關（P＞0.05），而與有無淋巴結轉移密切相關（P＜0.01）。Podoplanin只表達于淋巴管內皮細胞，進展期食管癌組織微淋巴管密度（LMVD）明顯高于早期食管癌組織（P＜0.01）。結論食管癌癌細胞VEGF-C的表達與腫瘤進展呈正相關，提示VEGF-C可促進食管癌組織淋巴管生成，從而引起癌細胞經淋巴道轉移。Podoplanin可作為淋巴管的特異性標記物之一。

[關鍵詞] VEGF-C；Podoplanin；食管鱗癌

[中圖分類號] R735.1 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701（2009）12-05-02

VEGF-C and Podoplanin in Expressing of Esophageal Carcinoma Organization

JI Liang1 SHA Feng1 MA Wenhao2 XU Hao1 ZHANG Peng1YAO Lije1LI Yulan3JI Haibo3△HUANG Wei4△

1. Qiqihar Medical University Anthropology Institute，Heilongjiang 161006； 2. The First Stomatological Hospital of Qiqihar City，Heilongjiang 161006； 3. Haerbin Medical University Anthropology Institute， Haerbin 150086； 4. Qiqihar Medical University Grade-06，Heilongjiang 161006

[Abstract] Objective To Study the expression and clinical significance of VEGF-C and Podoplanin in esophageal carcinoma organizations. Methods Taking 50 examples esophageal carcinoma organizations of clinical surgery，and making use of immunohistochemistry measures to detect VEGF-C and podoplanin of esophageal carcinoma. Results Positive expression of VEGF-C can be found in cancer cell of esophageal carcinoma，positive particles lies mainly in ndochylema of tumour cell，further expression of VEGF-C obviously top the nonage in advanced esophageal carcinoma， expression of VEGF-C have nothing to do with gender and age（P＞0.05）， but was closely related to have the lymph node metastasis or not（P＜0.01）. Podoplanin is expressed only in lymph-vessel bast cell， the advanced time cancer of the esophagus progressing organizes obvious tiny lymph-vessel density（LMVD） cancer of the esophagus higher than early phase organization（P＜0.01）. Conclusion The expression of VEGF-C in the esophagus cancer cell and tumour developing have positive relevance，that shows VEGF-C can promote the lymph-vessel generation in cancer of the esophagus organizes，so to bring cancer cell metastasis through the lymph-vessel.Podoplanin may be one of the lymphatic peculiarity markers.

[Key Words] VEGF-C；Podoplanin；Esophageal squamous cell carcinomas

食管癌是常見的消化道惡性腫瘤之一，其最重要的轉移途徑是淋巴道轉移，但是淋巴道轉移的機制尚未完全清楚。因此，本文對食管癌組織中血管內皮生長因子C（Vascular endothelial growth factor-C，VEGF-C）及Podoplanin的表達進行研究，為防治食管癌淋巴道轉移提供科學的理論基礎，從而使其具有很高的實用價值。

1 材料與方法

1.1實驗材料與試劑

取齊齊哈爾市第一醫院2006~2008年經手術切除并證實為食管鱗癌的標本50例，其中早期22例，進展期28例；有淋巴結轉移31例，無淋巴結轉移19例；男性41例，女性9例；年齡最小35歲，最大82歲。

兔抗人VEGF-C多克隆抗體，兔抗人Podoplanin單克隆抗體，PV9000二步法免疫組化試劑盒均購自武漢博士得生物工程有限公司。

1.2實驗方法

將食管癌標本在癌周邊區取材，經4%多聚甲醛固定，石蠟包埋，石蠟切片機連續4μm厚度切片，免疫組化染色，DAB顯色，蘇木素復染，光學顯微鏡觀察。

1.3統計學處理

采用SPSS13.0統計軟件進行數據分析與整理。

2結果

2.1VEGF-C的表達

在早期食管癌組織中VEGF-C表達于癌細胞胞漿，呈散在的棕黃色顆粒狀，陽性率為22.73%（5/22）。在進展期食管癌中，VEGF-C也表達在癌細胞胞漿，其表達明顯增強，呈片狀棕黃色顆粒狀（封三圖1），陽性率為67.86%（19/28），明顯強于早期食管癌。同時，經χ2檢驗證實，VEGF-C的表達與患者的性別、年齡無明顯關系（P＞0.05），與淋巴結轉移密切相關（P＜0.01）。在淋巴結轉移組中，VEGF-C的表達高于無淋巴結轉移組。見表1。

2.2Podoplanin的表達

在食管癌組織中，Podoplanin呈棕黃色線狀陽性表達，其陽性表達的管道具有典型毛細淋巴管的形態學特征：由單層內皮細胞構成、管壁較薄、形態不規則，并可見內皮細胞核突向腔內，可以判定Podoplanin主要表達于淋巴管內皮細胞的細胞膜上，這些陽性表達的淋巴管多位于癌組織周邊區的間質中（封三圖2）。Podoplanin在微血管中未見陽性表達。我們在低倍鏡下先選取早期食管癌組織和進展期食管癌組織中微脈管豐富的區域，然后在200倍視野下計數5個視野的Podoplanin標記為陽性淋巴管的數量，所有數據用均數±標準差（χ±s）表示，取均值作為微淋巴管密度（LMVD）。經統計學分析，進展期食管癌組織LMVD（5.92±1.04）明顯高于早期食管癌組織（2.28±0.67），兩者有統計學意義（P＜0.01）。

3討論

惡性腫瘤的淋巴道轉移是腫瘤轉移的一種重要方式。VEGF-C作為VEGF家族的重要因子由Joukov[1]等率先報道，Furodoi等[2]應用免疫組化檢測152例進展期大腸癌最深處組織的VEGF-C表達，多因素分析表明VEGF-C表達和淋巴結轉移是影響5年生存率的獨立因素。Jussila[3]認為VEGF-C表達的增多可引起淋巴管內皮細胞的異常分裂和增殖，從而誘導了癌周淋巴管的增生。Isaka等[4]將高表達VEGF-C的B16F10惡性黑色素瘤細胞接種到小鼠背部皮膚，發現瘤灶周邊形成新生淋巴管。有研究認為，在食管癌臨床病理因素中淋巴結轉移與VEGF表達有顯著關系[5]。本文將早期食管癌組織和進展期食管癌組織進行比較，發現兩者VEGF-C陽性表達率有顯著性差異，表明VEGF-C的表達隨著食管癌的發生和進展逐漸增強。本文還發現有淋巴結轉移的食管癌中VEGF-C的表達明顯高于無淋巴結轉移組，而淋巴道轉移是食管癌轉移的主要途徑。因此，以上提示VEGF-C表達增強可能導致食管癌組織內淋巴管數量的增加，進而VEGF-C的高表達促進癌細胞的淋巴道轉移。

Podoplanin是一種膜性粘蛋白，最初于腎小球足細胞表面被發現。牟江洪等[6]研究表明，大腸組織中Podoplanin與CD34沒有交叉反應，證實兩者分別具有極高的淋巴管和血管特異性；大腸癌邊緣區域Podoplanin陽性的脈管密度與腫瘤的淋巴結轉移和遠處轉移密切相關。周顯禮等[7]認為Podoplanin可作為獨立的癌淋巴管內皮特異性標記物使用。Veikkola等[8]研究發現VEGF-C能促進VEGFR-3過表達的內皮細胞的遷移，因此，VEGF-C也具有誘導淋巴管發生的作用。本研究中觀察到Podoplanin主要表達食管癌組織周邊區，陽性標記為棕黃色的管道，管壁較薄且不規則，其內無紅細胞，單層內皮細胞核大且向腔內突出，這符合毛細淋巴管的典型形態特征。而Podoplanin表達陰性的管道管壁較厚且規則，呈圓形或橢圓形，內含大量紅細胞，符合毛細血管的基本形態學特征。我們還觀察到進展期食管癌組織周邊微淋巴管密度明顯高于早期食管癌組織，差異有顯著性（P＜0.01），提示腫瘤邊緣增多的淋巴管是癌細胞經淋巴道轉移的主要通道。

綜上所述，VEGF-C在食管癌轉移過程中發揮重要作用，癌細胞產生的VEGF-C誘導腫瘤周邊區淋巴管數量增加，為癌細胞的淋巴道轉移提供必要條件。因此，尋找直接下調VEGF-C表達的方法來抑制腫瘤的淋巴系統轉移，為腫瘤治療提供了新的研究方向，因此Podoplanin可作為淋巴管的特異性標記物使用。

[參考文獻]

[1] Joukov V，Pajusola K，Kaipainen A，et al. A novel vascularendothelial growth factor，VEGF-C，is a ligand for the Flt-4（VEGFR-3） and KDR（VEGFR-2） recepter tyrosine kinases[J]. ENBOJ，1996，15（2）：290-298.

[2] Furodoi A，Tanaka S，Haruma K，et al. Clinical significance of vascular endothelial growth factor C expression and angiogenesis at the deepest invasive site of advanced colorectal carcinoma[J]. Oncology，2002，62（2）：157-166.

[3] Jussila L， Alitalo K. Vascular growth factors and lymphangiogenesis[J]. Physiol Rev，2002，82（3）：673-700.

[4] Isaka N，Padera TP，Hagendoom J，et al. Peritumor lymphatics induced by vascular endothelial growth factor-C exhibit abnormal function[J]. Cancer Res，2004，64（13）：4400-4404.

[5] 趙毅波，龐霞，張紅新，等. 食管癌組織中血管內皮生長因子的表達與臨床意義[J]. 河南預防醫學雜志，2005，5：257-258.

[6] 牟江洪，向德兵，肖華亮，等. 大腸癌VEGFR-3、podoplanin 和CD34 陽性脈管的特點及其與轉移的關系[J]. 解放軍醫學雜志，2006，31（1）：64-66.

[7] 周顯禮，李曉東，張衛東，等. 幾種淋巴管特異性標記物在人癌組織中的表達[J]. 中國臨床解剖學雜志，2006，24（2）：173-175.

[8] Veikkola T，Jussila L，Makinen T，et al. Signalling via vasealar endoshelial growst fuctor receptor-3 is sufficient for lym phangicgenesis in transgenic mice[J]. EMBO J，2001，20（6）：1223-1231.

（收稿日期：2009-01-14）