定點突變重組ING4腺病毒基因轉染系統的載體構建及鑒定

[摘要] 目的 重組構建hING4(人ING4)氨基酸序列。方法 運用定點突變技術，在鼠ING4的基礎上，設計兩對突變引物P1、P2和P3、P4及全長ING4上下游引物P5、P6，通過四輪PCR，將mING4基因序列進行人源化改造，獲得了編碼hING4氨基酸的基因序列。將獲得酶切目的基因片段，連接到轉移載體pAdTrack-CMV上，形成重組轉移載體pAdTrack -CMV-ING4。重組轉移載體經PmeI酶切后與pAdEasy-1腺病毒載體在BJ5183大腸桿菌中同源重組，得到重組腺病毒載體pAdeasy-1-pAdTrack-CMV-ING4，經PacI酶切后脂質體轉染QBI-293A包裝細胞，獲得重組腺病毒Ad-ING4。結果 測序和RT-PCR結果表明hING4基因構建成功。結論 hING4基因重組腺病毒載體構建成功。

[關鍵詞] ING4基因;點突變;腺病毒;載體;基因治療

[中圖分類號] R34[文獻標識碼] A[文章編號] 1673-9701(2009)32-18-03