組織蛋白酶Ｅ氨基端催化性殘基的確定

[摘要]目的 驗(yàn)證組織蛋白酶E保守基序DTG中第98位天門(mén)冬氨酸殘基為組織蛋白酶E氨基端催化性殘基。方法通過(guò)基因定點(diǎn)突變技術(shù)將第98位天門(mén)冬氨酸殘基用丙氨酸替代，制成變異體D98A，并將野生型和變異型的大鼠組織蛋白酶E基因在人胚胎腎293T細(xì)胞中進(jìn)行異源表達(dá)。結(jié)果在細(xì)胞培養(yǎng)基和細(xì)胞提取物中都發(fā)現(xiàn)有野生型和變異型的大鼠組織蛋白酶E的酶原蛋白表達(dá)。突變體D98A酶原在酸性條件下不能轉(zhuǎn)變?yōu)槊福矝](méi)有酶活性。結(jié)論組織蛋白酶E第98位天門(mén)冬氨酸殘基是酶的催化性殘基，對(duì)酶的催化活性非常重要。

[關(guān)鍵詞]活性部位基序；天門(mén)冬氨酸蛋白酶；組織蛋白酶E；變異體解析

[中圖分類號(hào)]R34

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

[文章編號(hào)]1673-9701(2009)20-01-03