草莓組織培養與快速繁殖技術

摘 要:介紹了草莓脫毒與快繁的技術措施，篩選出了草莓組織培養的最佳培養基及培養條件，并介紹了脫毒草莓苗圃繁殖要點，為草莓無毒苗快繁體系的建立提供了依據。

關鍵詞:草莓;組織培養;脫毒;快繁

中圖分類號:S668.4 文獻標識號:A 文章編號:1001-4942(2010)03-0109-02

草莓是一種營養豐富的高檔水果，通常采用匍匐莖繁殖，由于繁殖系數小和新莖分枝繁殖苗苗質差，影響產量和品質;采用種子繁殖，由于草莓屬異花授粉作物，實生苗之間個體變異較大，很難保持原品種的優良性狀。目前無病毒苗繁殖體系建立尚不完善，農民自繁自育，反復留種，致使種苗退化，病害滋生蔓延。盲目引種又會造成品種雜亂。采用草莓脫毒、快繁技術，提高草莓的繁殖系數，建立無病毒苗快繁體系，是提高草莓產量和品質，促進草莓產業化的有效途徑。草莓脫毒苗既可確保原品種的種質純度，又可提高品種的抗逆性，脫毒苗生長速度快，長勢強，產量可增加30%以上。

1 脫毒的理論依據

病毒是一種純寄生的無胞型微生物，它寄生在植物體內引發病害，直接影響植物體的生長和代謝。莖尖是植物頂端的原生分生組織，細胞分裂旺盛，生命力強。莖尖分生組織培養之所以能除去病毒，是由于病毒在感染植物體內不均勻分布，老葉及成熟的組織和器官中病毒含量較高，而幼嫩及未成熟的組織和器官中病毒含量較低，生長點(0.1～1.0 mm區域)則幾乎不含或含病毒很少，是因為病毒繁殖運轉速度與莖尖分化區細胞生長速度不同，病毒向上運輸速度慢，而分生組織細胞增殖快，這就使莖尖分生組織區域的細胞不含病毒。經離體培養的再生無病毒植株就是脫毒苗。

2 組織快繁

即通過植物體的莖、葉等組織進行增殖擴繁，其生長周期短，一般為25～28 d，繁殖系數大，一年內一個生長點頂端細胞可培養出600～800萬與母體生理特征完全一致，且不帶病毒、類病毒、細菌、真菌的植株，同時苗木生長速度快，產量高。

2.1 無菌材料的獲得

從正在生長的植株中，選擇生長健壯﹑無病蟲﹑長勢強﹑具有本品種特征的匍匐莖尖或單株心莖，去掉可見葉，用10%洗潔凈泡8～10 min，在流動的自來水中沖洗20～30 min，吸干水分。在無菌室內的超凈工作臺上，用75%酒精處理20～30 s，0.1%升汞和吐溫1～2滴滅菌8～12 min，再用無菌水沖洗5～7次，然后借助于 80～100倍雙目解剖鏡剝取生長點 0.1～0.3 mm，含有1～2個葉原基，快速接種到誘導與分化培養基中，封口后轉到培養室進行培養。同時做好標記(品種、接種時間、接種次數)，以便觀察與記載。

2.2 組織培養條件

基本培養基為MS;①誘導與分化培養基MS+6-BA 0.5～1.0 mg/L +2，4-D 0.05～0.2 mg/L + GA3 0.5～1.5 mg/L;② 繼代與增殖培養基MS+6-BA 1.5～2.5 mg/L+IAA 0.5～1.0 mg/L+IBA 0.5～1.0 mg/L+GA3 1.0～1.5 mg/L;③壯苗培養基MS+6-BA 1.0～2.0 mg/L+IAA 0.1～1.5 mg/L+IBA 1.0 mg/L+GA3 1.0～1.5 mg/L;④生根培養基1/2MS+6-BA 0.1～0.5 mg/L或1/2MS(15～20 g/L蔗糖)，附加蔗糖30 g/L，瓊脂6 g/L，pH 5.6～5.8。培養溫度(24±2)℃，相對濕度為65%～70%，光照強度1 800～2 200 lx，光照時間12～14 h/d。

2.3 分化與增殖培養

快速接種到誘導與分化培養基中的生長點， 30～40 d后有芽萌動， 50～60 d即可分化出叢生芽，待芽高3～5 cm時，可將叢生芽分開或單芽轉入繼代與增殖培養基中進行增殖培養。10～15 d有叢生芽長出，35 d左右叢生芽生長高度達3～5 cm，當每個生長點分化出20～30株小苗時即可進行生物學病毒檢測，經檢測后，不符合標準的全部淘汰，無毒苗在繼代與增殖培養基中加速繁殖，繼代周期為25～28 d。循環往復，增殖倍數一般為8倍，最高可達15倍以上。

2.4 壯苗與生根選取生長勢好的芽苗轉入壯苗培養基中，經過25 d左右培養的小苗生長健壯，可轉入生根培養基中，進行生根培養，15 d后，芽的基部有白色隆起，25 d左右，有95%以上的植株長出3～5條2～3 cm長的根，待植株生長28～35 d時，有3～5片展開葉，苗高2～3 cm即可備苗移栽。

2.5 煉苗與移栽

煉苗前揭開培養瓶的封口膜，練苗5～7 d，然后小心取出，用自來水沖去苗基部的培養基，移栽到滅菌的腐殖質與碎爐渣(3∶2)的混合基質中，前期適當遮蔭并保持相對濕度85%～95%，逐步降至70%，定期噴灑40%多菌靈800倍液殺菌，每7～10 d一次，15 d后生長加快。

移栽前應設隔離空間，用80目的防蟲網，嚴防傳毒昆蟲進入;揭開培養瓶的封口膜煉苗5～7 d，使其適應自然環境生長，用鑷子小心把草莓苗取出，再用自來水洗去基部的培養基，以防感染，然后用多菌靈800倍液浸5～10 min備用;將脫毒苗移栽至滅菌的腐殖質和草木灰與珍珠巖(2∶1∶1)混配的基質中;加塑料罩保水，半月后去掉，前5～7 d適當遮蔭并保持85%～90%的相對濕度，以后相對濕度保持65%左右，溫度15～25℃，定期(5～7 d)噴灑多菌靈800倍液殺菌2～3次，成活率可達90%以上。

3 脫毒草莓苗圃繁殖要點

3.1 加強田間管理，合理運籌肥水

脫毒草莓苗定植后澆透水，苗期保持土壤濕潤，保持田間持水量在75%左右。小苗生長15~20 d后每666.7m2追施氮磷鉀復合肥15～20 kg，8月份停施氮肥，只施磷鉀肥。生長發育期間要結合中耕除草保持土壤疏松，嚴防板結。

3.2 認真進行除蕾、摘心

脫毒草莓苗現蕾后及時摘去花序。匍匐莖發生后應在母株四周均勻擺布，并在著生苗節位前3～4 cm處壓蔓，促進子苗生根。定植起苗前1個月對匍匐莖摘心，并摘除過密的弱小幼苗，以保證子苗健壯生長，提高育苗質量。

3.3 草莓的壯苗標準

無公害脫毒草莓苗生長健壯、長勢強，展開葉5～6片，根莖粗1.0 cm以上，苗全株重30～35 g，根重占其1/3，花芽分化早，發育充實飽滿。