花生RGA-SSCP實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化
2010-01-01 00:00:00漆燕李雙鈴袁美王輝任艷石延茂崔富華李加納禹山林
山東農(nóng)業(yè)科學(xué) 2010年6期
摘要：單鏈構(gòu)象多態(tài)性(SSCP)技術(shù)是一種簡便、靈敏的多態(tài)性檢測方法，近年在植物研究中得到了較多應(yīng)用。為了檢測花生品種間抗病基因同源序列(RGA)的單核苷酸差異，對影響花生RGA－SSCP的電泳溫度、電壓、膠濃度、交聯(lián)度、變性劑等因素進(jìn)行了優(yōu)化。結(jié)果表明，堿變性后的PCR產(chǎn)物(PCR產(chǎn)物與堿變性劑比例1:2)在不加甘油的8％非變性聚丙烯酰胺凝膠(交聯(lián)度為29:1)、1×TBE電泳緩沖液、恒溫4℃和600v條件下電泳5h為最佳優(yōu)化組合。用上述優(yōu)化方法分析了抗、感北方根結(jié)線蟲病的親本及F2群體部分單株，獲得了電泳條帶細(xì)而清晰的SSCP圖。該體系的建立對RGA－SSCP標(biāo)記用于花生基因定位、遺傳圖譜構(gòu)建、標(biāo)記輔助選擇等具有重要意義。
關(guān)鍵詞：花生；RGA－SSCP；優(yōu)化；分子標(biāo)記
中圖分類號：S565.2；Q503 文獻(xiàn)標(biāo)識號：A 文章編號：1001－4942(2010)06－0001－05
