高效液相色譜法測定養(yǎng)陰明目顆粒中馬錢苷含量

馬 玲，葉 磊

(1.安徽省藥物研究所·安徽省中藥研究與開發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，安徽 合肥 230022；

2.安徽中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，安徽 合肥 230031)

高效液相色譜法測定養(yǎng)陰明目顆粒中馬錢苷含量

馬 玲1，葉 磊2

(1.安徽省藥物研究所·安徽省中藥研究與開發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，安徽 合肥 230022；

2.安徽中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，安徽 合肥 230031)

目的建立測定養(yǎng)陰明目顆粒中馬錢苷含量的高效液相色譜法。方法色譜柱為Promosil C18柱（250 mm×4.6 mm，5!m），流動(dòng)相為乙腈－水（15∶85），流速1.0 mL/min，檢測波長為240 nm。結(jié)果馬錢苷進(jìn)樣量在0.084～0.84!g范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系（r=0.999 9），平均回收率為98.67%，RSD=0.67%（n=6）。結(jié)論高效液相色譜法簡便可行、專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好，可較好地控制養(yǎng)陰明目顆粒的質(zhì)量。

養(yǎng)陰明目顆粒；高效液相色譜法；馬錢苷

養(yǎng)陰明目顆粒是由山茱萸、枸杞子、沙苑子、三七、五味子、大薊炭等16味中藥組成的復(fù)方制劑，具有滋補(bǔ)肝腎、止血化瘀、清熱明目的功效，用于治療脾腎兩虛、肝郁火旺等所致黃斑變性及其他眼底退行性病變。為有效控制該制劑質(zhì)量，筆者選擇方中君藥山茱萸的有效成分馬錢苷作為含量控制的指標(biāo)成分，采用高效液相色譜法測定，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

LC－10AVP型高效液相色譜儀（日本島津），包括單元泵、紫外檢測器、浙大N2000色譜工作站；AS3120B型超聲提取器。馬錢苷對(duì)照品（含量測定用，中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)為111640－200503）；養(yǎng)陰明目顆粒及缺山茱萸的陰性樣品（自制）；乙腈為色譜純，水為重蒸餾水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Promosil C18柱（250 mm×4.6 mm,5!m）；流動(dòng)相：乙腈 －水（15 ∶85）；檢測波長 240 nm；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：10!L。理論板數(shù)按馬錢苷計(jì)算應(yīng)不低于3 000。

2.2 溶液制備

精密稱取常溫減壓干燥12 h的馬錢苷對(duì)照品適量，加80%甲醇制成每1 mL含42!g的溶液，搖勻，即得對(duì)照品溶液。取樣品顆粒約1 g,精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入80%甲醇25 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理30 min,放冷，再稱定質(zhì)量，用80%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液10 mL,加在中性氧化鋁柱（200～300目，5 g，內(nèi)徑1 cm）上,用40%甲醇40 mL洗脫，收集流出液和洗脫液，蒸干，殘?jiān)?0%甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，用50%甲醇定容至刻度，搖勻，0.45!m微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。取缺山茱萸的陰性樣品適量，按供試品溶液制備方法操作，制成陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

陰性干擾試驗(yàn)：精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照品溶液適量，按上述色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖（圖1）。結(jié)果表明馬錢苷色譜峰分離良好，且本品中其他藥材對(duì)馬錢苷的測定無干擾。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察：精密吸取對(duì)照品溶液（0.084 g/L）1，2，4，6，8，10 mL，置10 mL量瓶中，用80%甲醇稀釋至刻度，按上述色譜條件注入液相色譜儀，記錄馬錢苷峰面積，以對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 Y=11 948 X－11.837,r=0.999 9（n=6）。結(jié)果表明，馬錢苷進(jìn)樣量在0.084～0.84!g范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn)：精密吸取同一對(duì)照品溶液10!L共6次，分別注入液相色譜儀，測定峰面積。結(jié)果的 RSD=1.17%（n=6），表明儀器精密度較好。

重現(xiàn)性試驗(yàn)：取同一批樣品6份，按供試品溶液制備方法操作，各進(jìn)樣10!L，按上述色譜條件注入液相色譜儀，依法測定。結(jié)果馬錢苷平均含量為0.908 mg/g，RSD=1.96%(n=6），表明方法重現(xiàn)性較好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：將同一供試品溶液放置0,1,2,4,6,8 h后分別測定。結(jié)果的 RSD=1.47%（n=6），表明供試品溶液在8 h內(nèi)較穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn)：取已知含量（0.908 mg/g）的樣品各6份，每份約0.45 g,精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別加入馬錢苷對(duì)照品溶液（42!g/mL）5，10，15 mL各2份，按供試品溶液制備方法操作并測定，結(jié)果見表1。

2.4 樣品含量測定

取3批樣品，照供試品溶液制備方法制成溶液，分別精密量取供試品溶液和對(duì)照品溶液各10 μL，按色譜條件注入液相色譜儀，用外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量。結(jié)果批號(hào)為080904，080907，080910的樣品中馬錢苷含量分別為0.924，0.866，0.903 mg/g。

表1 馬錢苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6）

3 討論

本品為含16味藥的復(fù)方制劑,且馬錢苷極性較強(qiáng)，參照《中國藥典》[1]選用80%甲醇進(jìn)行超聲處理，進(jìn)樣后雜質(zhì)峰干擾太大，故參照相關(guān)文獻(xiàn)[2－3]，將80%甲醇處理后的樣品過中性氧化鋁柱，40%甲醇洗脫，最后以50%甲醇溶解，效果較理想。本試驗(yàn)再次表明，高效液相色譜法方法可靠，靈敏、快速，專屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性好，可作為養(yǎng)陰明目顆粒的定量分析方法。

[1]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：20.

[2]譚秋紅.RP－HPLC法測定六味地黃丸中馬錢苷的含量[J].中國醫(yī)學(xué)工程，2007，15（7）：601 － 602.

[3]王玉峰，劉敏彥，李向軍，等.高效液相色譜法測定耳聾左慈丸中馬錢苷含量[J]. 中國藥業(yè)，2009，18（10）：42 － 43.

Determination of Loganin in Yangying Mingmu Granules by HPLC

Ma Ling1,Ye Lei2
(1.Anhui Provincial Institute of Pharmaceutical Research,Anhui Provincial Research& Development Key Laboratory of Chinese Materia Medica,Hefei,Anhui,China 230022; 2.College of Pharmacy,Anhui College of Traditional Chinese Medicine,Hefei,Anhui,China 230031)

ObjectiveTo establish the external standard HPLC method for the determination of loganin in Yangying Mingmu Granules.Methods The Promosil C18column(250 mm×4.6 mm,5!m)was used.The mobile phase consisted of acetonitrile－water(15∶85).The flow rate was 1.0 mL/min.The UV detection wavelength was at 240 nm.Results The linear range for loganin was 0.084－0.84!g,r=0.999 9.The average recovery rate was 98.67%,RSD was 0.67%(n=6).Conclusion The method is proved to be simple with strong specificity and good reproducibility,which can be used to control the quality of the preparation.

Yangying Mingmu Granules;HPLC;loganin

R284.1；R286.0

A

1006－4931(2010)05－0032－02

馬玲,女,副研究員,主要從事中藥研究與開發(fā)工作，（電話）0551 － 3669425（電子信箱）lingma518@soh9.com。

2009－03－03；

2009－06－20)