83例原發性肝癌患者自身抗體檢測結果分析①

趙海琳 閆惠平 張海萍 （首都醫科大學附屬北京佑安醫院感染與免疫研究中心,北京 100069）

83例原發性肝癌患者自身抗體檢測結果分析①

趙海琳②閆惠平 張海萍 （首都醫科大學附屬北京佑安醫院感染與免疫研究中心,北京 100069）

目的:探討原發性肝癌患者自身抗體產生的規律及臨床意義。方法:以臨床診斷為原發性肝癌患者83例作為研究對象,采用間接免疫熒光法及免疫印跡法檢測患者血清中自身抗體。結果:83例肝癌患者自身抗體檢出率為37.3%（31/83）,其中HBV感染患者檢出率35.9%（23/64）,HCV感染者檢出率50.0%（8/16）,二者差異無統計學意義（P＞0.05）。能檢測到一種、兩種及三種自身抗體的患者分別為24.1%、12.1%和1.2%。抗核抗體（ANA）、抗細胞骨架抗體（CS）、抗平滑肌抗體（SMA）和抗線粒體抗體（AMA）的檢出率分別為24.1%、13.3%、9.6%和4.8%?？购丝贵w譜分析有Ro-52、CENP-B（著絲點B抗原）等自身抗體陽性。AFP（甲胎蛋白）異常及AFP正常的患者自身抗體檢出率分別為36.8%和22.2%,差異無統計學意義（P＞0.05）。HBV-DNA陽性與HBV-DNA陰性患者自身抗體檢出率分別為40.5%和27.3%,差異無統計學意義。女性患者自身抗體檢出率明顯高于男性,差異有統計學意義。結論:37.3%的原發性肝癌患者能檢測到非器官特異性的自身抗體:ANA、CS、SMA和AMA,大多患者以檢出其中一種抗體為主,部分患者能檢出二至三種自身抗體。ANA、CS、SMA和AMA四種自身抗體中檢出率最高的是ANA,其次是CS和SMA,檢出率最低的是AMA。各抗體均以低滴度為主。ANA熒光模型以顆粒型為主。血清AFP含量的高低與自身抗體檢出率之間未見明顯相關性。HBV-DNA陽性患者與HBV-DNA陰性患者自身抗體檢出率差異無統計學意義。女性患者自身抗體檢出率明顯高于男性。

原發性肝癌;自身抗體;檢測

近年來,關于病毒性肝炎、自身免疫性肝炎、肝硬化、肝癌等患者體內能檢測到自身抗體的報道越來越多[1-9]。本文通過對83例原發性肝癌患者血清抗核抗體（ANA）、抗平滑肌抗體（SMA）、抗線粒體抗體（AMA）及抗細胞骨架抗體（CS）等自身抗體的檢測結果進行分析,探討原發性肝癌患者自身抗體產生的特點,分析自身抗體與AFP、DNA及年齡、性別之間的關系及其臨床意義,現報道如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象 本組83例均為北京佑安醫院2008年1～12月臨床診斷為原發性肝癌的住院患者。其中男58例,女25例。年齡29～89歲,其中≤30歲者2例,31～39歲3例,40～49歲18例,50～59歲27例,60～69歲18例,70～79歲14例,80～89歲1例。

HBV表面抗原陽性者（乙肝肝癌組,A組）64例（77.1%）,男51例、女13例;HCV抗體陽性者（丙肝肝癌組,B組）16例（19.3%）,男4例、女12例;HBV表面抗原及HCV抗體陰性者（非乙非丙組,C組）3例（3.6%）,均為男性。

1.2 檢測試劑及方法 本組患者自身抗體檢測均采用德國歐蒙（Euroimmuno）公司產品,采用間接免疫熒光法（IIF）檢測抗核抗體（ANA）、抗線粒體抗體（AMA）、抗平滑肌抗體（SMA）、抗細胞骨架（CS）、抗肝腎微粒體（LKM）等自身抗體。血清自1∶100起稀釋,選擇的抗原基質有Hep-2細胞,猴肝和心肌組織,大鼠肝、腎和胃組織。操作步驟按歐蒙公司生物薄片馬賽克TM技術試劑盒說明書進行,封片后用熒光顯微鏡觀察結果,組織或細胞內出現特征性綠色熒光,血清稀釋度≥1∶100為陽性。歐蒙免疫印跡法進行抗核抗體譜檢測,檢測膜條包被抗原有:nRNP/Sm 、Sm 、SS-A 、Ro-52、SS-B 、Scl-70 、Jo-1 、CENP-B 、dsDNA 、Nukleosomen 、Histone 、Rib.p-Rrot,操作按說明書進行。AFP采用美國雅培試劑盒微粒子酶免疫法（MEIA）進行檢測,AFP＞10.9 ng/ml為異常。HBVDNA檢測采用熒光定量PCR法,檢測下限為500 copies/ml,＞500 copies/ml為陽性。

1.3 統計學處理 統計版本為SPSS17.0,數據處理采用 χ2檢驗。

2 結果

2.1 自身抗體檢測結果

2.1.1 自身抗體檢出率 83例原發性肝癌患者中,共有31例患者檢出自身抗體陽性,總陽性率為37.3%（31/83）。檢出的自身抗體包括抗核抗體（ANA）、抗細胞骨架抗體（CS）、抗平滑肌抗體（SMA）和抗線粒體抗體（AMA）。ANA、CS、SMA及AMA的檢出率分別為 24.1%（20/83）、13.3%（11/83）、9.6%（8/83）和4.8%（4/83）。見表1。

20例（24.1%）患者僅檢出一種自身抗體陽性,分別為:ANA 9 例、CS 5例 、SMA 5例 、AMA 1 例;10例（12.1%）同時檢出兩種自身抗體陽性,分別為:（ANA+AMA）4 例 、（ANA+CS）3 例 、（ANA+SMA）2例、（SMA+CS）1例;同時檢出三種自身抗體的1例（1.2%）,為（ANA+SMA+CS）。

A組（乙肝肝癌組）自身抗體檢出率為35.9%,B組（丙肝肝癌組）為50.0%,兩組自身抗體檢出率的差異無統計學意義（χ2=1.07,P＞0.05）。見表1。

2.1.2 自身抗體滴度分布 20例ANA陽性患者中 ,12例（60%）滴度為 1∶100,7例（35%）1∶320,1例（5%）1∶1 000;11例CS陽性患者中,8例（73%）滴度為1∶100,2例（18%）1∶320,1例（9%）出現了1∶1 000高滴度;8例SMA 陽性患者中,4例1∶100,4例1∶320;4例AMA陽性患者的滴度全部為1∶100。

2.1.3 ANA譜 8例ANA滴度≥320的患者采用歐蒙免疫印跡法進行了ANA譜檢測,結果顯示:一例（男63歲乙肝肝癌）Ro-52陽性,一例（女49歲丙肝肝癌）CENP-B陽性,一例（男61歲乙肝肝癌）抗組蛋白及抗dsDNA陽性,一例（女62歲乙肝肝癌合并類風濕關節炎）SS-A陽性。

2.1.4 ANA熒光模型 20例ANA陽性患者的熒光模型分別為:顆粒型10例,均質型4例,核仁型2例,核膜型1例,著絲點型1例,核仁+顆粒1例,核膜+核點1例。

2.2 自身抗體檢出率與血清甲胎蛋白（AFP）含量的關系 83例原發性肝癌患者中75例進行了血清AFP檢測,分析血清AFP含量與自身抗體檢出率的關系,結果顯示,AFP異常（AFP＞10.9 ng/m l）的患者與AFP正常的患者自身抗體檢出率分別為36.8%（21/57）和22.2%（4/18）,二者差異無統計學意義。另外,AFP含量在10～500 ng/m l的患者與AFP大于1 000 ng/m l的患者自身抗體檢出率很接近（38.2%及37.5%）,而AFP含量在500～1 000 ng/m l的患者自身抗體檢出率稍低（28.6%）。但經 χ2檢驗,各組之間自身抗體檢出率的差異無統計學意義。見表2。

表1 83例原發性肝癌患者自身抗體檢測結果[例（%）]Tab.1 The detective Results of autoantibodies in 83 patients with HCC[n（%）]

表2 75例原發性肝癌患者血清AFP與自身抗體檢出率的關系[例（%）]Tab.2 The association between AFP and autoantibodies in 75 patientswith HCC[n（%）]

表3 乙肝肝癌患者自身抗體檢出率與HBV-DNA的關系[例（%）]Tab.3 The association between autoantibodies and HBV-DNA[n（%）]

2.3 乙肝肝癌組自身抗體檢出率與DNA的關系乙肝肝癌組42例DNA陽性患者中17例（40.5%）自身抗體檢測陽性;22例DNA陰性組中6例（27.3%）自身抗體陽性。兩組自身抗體檢出率進行比較,差異無統計學意義（χ2=1.09,P＞0.05）,見表3。

2.4 自身抗體與年齡及性別的關系 本次研究中對患者進行了年齡段的劃分,結果顯示自身抗體檢出率最高的是60～69歲年齡組（66.7%）,＜70歲患者隨年齡增長,自身抗體檢出率呈現逐步上升的趨勢,之后又呈下降趨勢。80歲以上患者總共只有1例,為自身抗體陽性。

83例肝癌患者中男性58例,自身抗體檢出率29.3%（17/58）;女性25例,自身抗體檢出率56%（14/25）,男女患者自身抗體檢出率差異有統計學意義（χ2=5.32,P＜0.05）。

3 討論

83例肝癌患者血清中主要檢出了ANA、CS、SMA和AMA四種自身抗體,總陽性率為37.3%（31/83）,未檢出LKM（肝腎微粒體抗體）和LSP（肝特異性蛋白）抗體。檢出率最高的是ANA,最低的是AMA,各抗體均以低滴度為主,這一結果與大多文獻報道相一致[4-7]。資料顯示病毒性肝炎及其相關疾病患者可產生LSP抗體,但這次研究中未檢出,可能與研究病例少有關。

本次研究中對部分患者進行了抗核抗體譜分析,從檢測結果顯示肝癌患者抗核抗體靶抗原有Ro-52、CENP-B 、dsDNA、SS-A（出現 SS-A 陽性的患者同時伴有類風濕關節炎,所以此抗體的出現也可能與類風濕關節炎相關）等,這似乎提示肝癌患者的抗核抗體可以有多種靶抗原,或許還有某一特定靶抗原尚未發現,但本次研究中檢測例數相對少,希望通過以后進一步增加研究對象加以證實,同時也期待著包被有更多抗原分子的檢測膜條或其它更先進檢測手段的出現,從而為各種自身抗體靶抗原特征研究創造條件,并進一步闡明它們與疾病發生發展的關系。通過對ANA熒光模型的觀察發現,肝癌患者ANA雖可出現多種熒光模型,但仍以顆粒型為主。

ANA、CS、SMA和AMA都是非器官特異性自身抗體,它們可能不直接參與肝細胞的損傷,但可能以免疫復合物的形式加重肝臟損傷并引發肝外相關疾病,所以對于肝病患者如何調整機體免疫狀態很重要,既要提高抗病毒抗腫瘤免疫力又要控制自身免疫反應,這也是免疫學領域的一大難題。本次研究中雖然丙肝肝癌例數少,但其自身抗體檢出率（50.0%）高于乙肝肝癌（35.9%）這一結果卻與文獻報道[8,9]相符,即丙肝比乙肝患者更易出現自身免疫紊亂現象,所以,臨床上對于丙肝的干擾素抗病毒治療應該比乙肝更為謹慎。研究結果顯示SMA在丙肝肝癌患者體內的檢出頻率高于乙肝,SMA是否是丙肝患者特征性自身抗體有待于進一步研究。

AFP是診斷原發性肝癌比較可靠的指標之一,在這次研究的83例患者中,有75例都進行了AFP的檢測。為了了解AFP與原發性肝癌患者體內自身抗體之間的關系,本文對75例患者血清AFP含量與自身抗體檢出率進行了分析,結果顯示AFP異常的患者自身抗體檢出率高于AFP正常的患者,另外,AFP含量10～500 ng/ml及＞1 000 ng/m l的患者自身抗體檢出率很接近（38.2%及37.5%）,且均高于AFP含量 500～1 000 ng/m l的患者（28.6%）,這是不是提示我們,AFP含量處于中間水平時自身免疫反應弱,而過高或過低時自身免疫反應增強。檢測結果顯示肝癌患者自身免疫反應的強弱似乎體現在AFP含量的變化上,但就個案看,有五例患者AFP值一度超過35 350 ng/ml,但他們的自身抗體檢出率為零,而18例AFP低于正常值的患者中卻有4例檢出自身抗體。血清AFP含量的高低與自身抗體檢出率之間的關系還有待進一步探討。

在我國,HBV及HCV的慢性感染是導致原發性肝癌最常見的原因。在本次研究中,83例原發性肝癌患者中64例都存在HBV慢性感染,占77.1%;16例有HCV慢性感染,占19.3%。這一結果符合我國乙肝高發的特點。另有三例既無HCV感染史（HCV IgG、IgM及HCV RNA陰性）,也沒有HBV的現癥感染情況（HBV DNA小于500 copies/m l,HBsAg陰性）,但這三例患者都有HBV既往感染史（三位患者都出現了HBV一至三種抗體陽性）,所以這三例患者仍不排除存在HBV的隱匿性感染現象,也就是說這三例患者肝癌的發生可能仍與HBV感染有著密切的關系。因此,從導致原發性肝癌的原因看,預防HBV及HCV感染就等于預防了90%以上肝癌的發生,所以預防接種及避免醫源性病毒感染仍是我國避免肝癌發生的重要手段。

1 閆惠平,Winfried Stocker,賀立香.肝病患者自身抗體特征性的研究[J].中國免疫學雜志,2003;19（4）:278-281.

2 張海萍,閆惠平,馮 霞etal.乙肝病毒感染者血清抗核抗體特征及其臨床相關性[J].首都醫科大學學報,2007;28（2）:154-157.

3 李 穎,徐 鑫,劉 沛etal.慢性丙型肝炎患者自身抗體檢測的臨床意義[J].肝臟,2007;12（1）:17-19.

4 馮 灝,殷國慶.抗核抗體在乙肝患者中的表現及意義[J].臨床肝膽病雜志,2010;26（2）:189-193.

5 張利方,付麗萍,徐 娟etal.自身抗體在肝病患者診斷中的意義[J].現代檢驗醫學雜志,2006;21（2）:70-71.

6 Squadrito G,PrevitiM,Lenzi Metal.High prevalence of non-organ-specific autoantibodies in Hepatitis C virus infected cirrhotic patients from southern Italy[J].Dig Dis Sci,2003;48:349-353.

7 周 力,王長嘉,路洪艷etal.慢性乙肝患者血清自身抗體檢測的臨床意義[J].中國衛生檢驗雜志,2007;17（9）:1662-1663.

8 吳赤紅,徐小元,田庚善etal.慢性丙型肝炎患者自身抗體檢測的研究[J].中華醫學雜志,2006;86（6）:390-393.

9 周厚清,董 敏.丙型肝炎患者血清自身抗體檢測的臨床研究[J].中國衛生檢驗雜志,2009;19（1）:131-132.

[收稿2010-06-17 修回2010-07-13]

（編輯 倪 鵬）

Analysis of autoantibodies in 83 patientswith primary hepatic carcinnoma

ZHAOHai-Lin,YANHui-Ping,ZHANGHai-Ping.InfectionandImmunologyResearchCenter,BeijingYou′anHospital,CapitalMedicalUniversity,Beijing100069,China

Objective:To study the characteristics of autoantibodies in patientswith primary hepatocellular carcinoma（HCC）.Methods:83 patients with primary hepatocellular carcinoma（HCC）were studied.Different autoantibodies were detected by indirect immunofluorescent assay（IIF,Euroimmuno,Germany）.Results:31 of 83 caseswere found autoantibodies（37.3%）,in whom 64 patientswere in HBV infection,with 23 autoantibodies positive（35.9%）.8were autoantibody-positive in 16 patientswith HCV infection（50.0%）.Therewas no significant differences between the two groups（P＞0.05）.24.1%（20/83）or12.1%（10/83）or 1.2%（1/83）patientswere positive forone,two or three kinds of autoantibodies respectively.Anti-nuclear antibody（ANA）was themost popular（24.1%）than others.Anti-cytoskeleton（CS）was 13.3%,whereas anti-smoothmuscle antibody（SMA）was 9.6%and anti-m itochond ria antibody（AMA）4.8%respectively.Itwas shown thatanti-Ro-52 or anti-CENP-Bwas positiveby ANA analysis.Comparing AFP normalwith abnormal patients,antoantibody rate（22.2%vs 36.8%）had no significantdifference.There were no remarkable difference between autoantibodies positivegroup and autoantibodies negative group forHBV-DNA.Conclusion:Non-organ-specific autoantibodies—ANA,CS,SMA and AMA can be detected in 37.3%patientswith HCC.The highest detection rate is ANA,the next is CSand SMA,and the lowest is AMA.Allof detected autoantibodies are shown with low titer（1∶100）.Concentration of AFP and autoantibodies is not shown significant correlation.There is no remarkable difference in autoantibodies between HBV-DNA positive group and negative group.

Hepatocellular carcinoma;Autoantibodies;Detection

R735.7

A

1000-484X（2010）12-1127-04

10.3969/j.issn.1000-484X.2010.12.016

①本文為北京市自然科學基金資助項目（No.7092046）

②云南省曲靖醫學高等專科學校微生物與免疫教研室,曲靖 655000

趙海琳（1970年-）,女,碩士,副教授,主要從事微生物與免疫學教學工作;

及指導教師:閆惠平（1955年-）,女,研究員,主要從事自身免疫性肝病研究,E-mail:yhp503@vip.sina.com。