大蒜素對(duì)弓形蟲(chóng)感染小鼠體液免疫的影響①

苑文英 東風(fēng)蘭 李英豪 朱勁松 葉 紅 劉新霞 楊 慧

（河北大學(xué)醫(yī)學(xué)部寄生蟲(chóng)學(xué)教研室,保定 071000）

大蒜素對(duì)弓形蟲(chóng)感染小鼠體液免疫的影響①

苑文英 東風(fēng)蘭 李英豪 朱勁松 葉 紅 劉新霞 楊 慧

（河北大學(xué)醫(yī)學(xué)部寄生蟲(chóng)學(xué)教研室,保定 071000）

剛地弓形蟲(chóng)（Toxoplasmagondii）是一種人畜共患的寄生蟲(chóng)病病原體,在宿主免疫功能低下時(shí)可造成嚴(yán)重后果,屬機(jī)會(huì)性致病原蟲(chóng)。弓形蟲(chóng)的侵襲作用與蟲(chóng)體毒力及宿主的免疫狀態(tài)有密切關(guān)系[1],它有卵囊、裂殖體、包囊、假包囊、滋養(yǎng)體等存在形式,滋養(yǎng)體（速殖子）是弓形蟲(chóng)的主要致病階段,在有核細(xì)胞內(nèi)增殖破壞宿主細(xì)胞,刺激淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞浸潤(rùn),導(dǎo)致組織的急性炎癥和壞死,弓形蟲(chóng)為細(xì)胞內(nèi)寄生原蟲(chóng),因此細(xì)胞介導(dǎo)的免疫是控制弓形蟲(chóng)感染的主要機(jī)制[2],其T淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、NK細(xì)胞等介導(dǎo)的免疫反應(yīng)起主導(dǎo)作用。同時(shí),弓形蟲(chóng)感染后也能激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生特異性抗體,有研究表明,特異抗體與速殖子結(jié)合后在補(bǔ)體參與下可使蟲(chóng)體溶解,或促進(jìn)其被巨噬細(xì)胞吞噬[3]。為研究抗體在弓形蟲(chóng)感染中的作用,進(jìn)行了此項(xiàng)實(shí)驗(yàn)。

1 材料與方法

1.1 弓形蟲(chóng)RH株購(gòu)自天津醫(yī)科大學(xué)寄生蟲(chóng)學(xué)教研室,由河北大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)中心保種。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)BALB/c小鼠購(gòu)自河北醫(yī)科大學(xué),由河北大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)中心動(dòng)物室繁殖,8周齡。顆粒飼料喂養(yǎng),自然光照、自由進(jìn)食飲水。

1.3 藥物 大蒜素,針劑,30mg/支,上海禾豐制藥有限公司,批號(hào):070802。

1.4 IgA、IgG ELISA檢測(cè)試劑盒購(gòu)自福建三名博峰生物科技有限公司,批號(hào)20071026。

1.5 實(shí)驗(yàn)分組 126只BALB/c小鼠,隨機(jī)分成感染組、治療組和對(duì)照組,每組42只。RH株弓形蟲(chóng)速殖子5×104個(gè)/只經(jīng)口感染小鼠,治療組感染當(dāng)天給大蒜素,80μg/只,經(jīng)口灌服,每天1次,連續(xù)14天,對(duì)照組灌服生理鹽水替代。分別于治療的第0、2、4、6、8、10、12周尾靜脈取血 。每組6只 。

1.6 實(shí)驗(yàn)儀器 自動(dòng)板式酶標(biāo)儀,ZS-2,北京航宇浪琴醫(yī)療設(shè)備有限公司,液氮罐美國(guó)C.B.S.公司,超低溫冰箱Thermo公司。

1.7 實(shí)驗(yàn)指標(biāo)及測(cè)定方法 小鼠尾靜脈取血約1m l,室溫靜置30分鐘后,2 500 r/min離心10分鐘,靜置2小時(shí),吸出上層澄清的血清,-20℃保存?zhèn)溆?。ELISA法測(cè)定血清中的IgG、IgA抗體含量。

2 結(jié)果

2.1 血清中IgG抗體水平變化 見(jiàn)表1。

2.2 血清中的IgA抗體變化 見(jiàn)表2。

表1 小鼠血清中IgG含量（OD值）Tab.1 Titer of IgG in serum secretion of themice（OD value）

表2 小鼠血清中IgA含量（OD值）Tab.2 Titer of IgA in serum secretion of them ice（OD value）

3 討論

弓形蟲(chóng)病常常表現(xiàn)為隱性感染,當(dāng)免疫力低下時(shí)出現(xiàn)臨床表現(xiàn),如艾滋病、器官移植、妊娠等,傳統(tǒng)的化療藥物以乙胺嘧啶、磺胺類(lèi)為代表,毒副作用大,特別是不適宜治療妊娠期感染,易引起胚胎畸形,代表先進(jìn)技術(shù)的細(xì)胞因子、基因工程、核酸等是發(fā)展的亮點(diǎn),但由于技術(shù)的成熟性受到影響,產(chǎn)量低,不能廣泛應(yīng)用于臨床,尋找高效、低毒的抗弓形蟲(chóng)病治療藥物成為當(dāng)今寄生蟲(chóng)病研究的熱門(mén)課題。傳統(tǒng)中藥較好地解決了毒副作用與治療有效性的問(wèn)題,大蒜素集食療與藥療于一身,具有廣泛應(yīng)用價(jià)值。大蒜是百合科蔥屬植物蒜地下鱗莖,主要功效成分是蒜氨酸,具有廣譜抗菌消炎作用,對(duì)多種致病菌有很高的殺菌活性如葡萄球菌、鏈球菌、大腸桿菌及傷寒結(jié)核桿菌等都有明顯的抑制或殺滅作用,對(duì)青霉素、鏈霉素耐藥菌也很敏感,既有抗菌消炎殺蟲(chóng)等功效,又有降血脂、血糖、抗動(dòng)脈粥樣硬化、提高機(jī)體免疫功能等作用,兼有保健與治療雙重功效,是難得的選材。

體液免疫在弓形蟲(chóng)感染中起著重要作用,IgG、IgA具有代表性,IgG是體液免疫應(yīng)答產(chǎn)生的主要抗體,血清中含量最高,半衰期長(zhǎng),在機(jī)體防御機(jī)制中發(fā)揮抗感染、中和毒素及調(diào)理作用,且有保護(hù)粘膜的作用[4]。血清型IgA主要由腸系膜淋巴組織中的漿細(xì)胞產(chǎn)生,其含量雖然遠(yuǎn)低于IgG,但具有多種抗體活性,具有抗菌、抗毒素和抗病毒等作用[5-7],以分泌型IgA出現(xiàn)時(shí),對(duì)于粘膜的保護(hù)有至關(guān)重要的意義。

我們采用大蒜素經(jīng)口灌服小鼠,觀察體液中IgG、IgA抗體含量,判斷大蒜素對(duì)提高體液免疫功能的效應(yīng),結(jié)果治療后IgG三組間比較,4周（F=10.53,P＜0.01）、6周（F=25.57,P＜0.01）、8周（F=13.68,P＜0.01）,差異具有顯著性;IgA三組間比較,4周（F=18.11,P＜0.01）、6周（F=68.37,P＜0.01）、8周（F=21.14,P＜0.01）,差異具有顯著性。弓形蟲(chóng)速殖子經(jīng)口感染小鼠大蒜素治療后能誘導(dǎo)產(chǎn)生高水平的血清IgG,且持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)。本實(shí)驗(yàn)觀察到治療后小鼠血清IgG抗體水平逐漸升高,在治療后第6周達(dá)高峰,4、6、8周與對(duì)照組和感染組比較有顯著升高,至第12周時(shí)仍高于感染組和對(duì)照組。血清中IgA水平在治療后第4、6、8周也有明顯升高,說(shuō)明在體液免疫產(chǎn)生的保護(hù)性抗體中IgG和IgA都起作用[8],但I(xiàn)gG起作用大且持續(xù)時(shí)間長(zhǎng),是主要的保護(hù)性抗體。

1 高興政.醫(yī)學(xué)寄生蟲(chóng)學(xué)[M].北京:北京大學(xué)醫(yī)學(xué)出版社,2007:94-100.

2 Denkers E Y,Gazzinelli R T.Regulation and function of T-cellmediated immunity during Toxoplasma gondii infection[J].Clin Microbiol Rev,1998;11（4）:569-588.

3 Sayles PC,Gibson GW,Jonson LLetal.B cell are essential for vaccination-induced resistance to virulent Toxoplasmagondii[J].Infct Immun,2000;68（6）:1026-1033.

4 Kang H,Remington JS,Suzuki Yetal.Decreased resistance of B cell deficientmice to infectionwith Toxopiasma gondii despite unimpaired expression IFN-gamma,TNF-alpha and inducible nitric oxide synthase[J].J Immunol,2000;164:2629-2634.

5 Macpherson A J,Hunziker L,M cCoy Ketal.IgA responses in the intestinalmucosa againstpathogenicand non-pathogenicmicroorganisms[J].Microbes Infect,2001;3（12）:1021-1035.

6 Kasper L,CourretN,Darche Setal.Toxoplasma gondii andmucosal immunity[J].Int JParasitol,2004;34:401-409.

7 O'Hagan D T,ValianteN M.Recentadvances in the discovery and delivery of vaccine adjuvants[J].Nat Rev Drug Discov,2003;2:727-735.

8 GomezMarin JE,Pinon JM,Bonhomme Aetal.Does human Toxoplasma involve an imbalance in T1/T2 cytokines?[J].MedicalHypotheses（ENGLAND）,1997;38（2）:161-169.

[收稿2009-09-17]

（編輯 張曉舟）

R537.8

A

1000-484X（2010）01-0059-02

①本文為河北省科技廳科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目（No.09276102D-29）和河北省衛(wèi)生廳重點(diǎn)課題計(jì)劃項(xiàng)目（No.08167）

苑文英（1965年-）,女,碩士,副教授,主要從事寄生蟲(chóng)免疫學(xué)和分子寄生蟲(chóng)學(xué)方面的研究,E-mail:yuanwy7830@sina.com。