藕節(jié)“炒炭存性”標(biāo)準(zhǔn)的研究

連曉曉， 胡昌江， 余凌英， 張 然， 帥小翠， 雒換鋒

(成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，四川成都611137)

藕節(jié)為睡蓮科植物蓮 Nelumbo nucifera Gaertn.的干燥根莖節(jié)部［1］。始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品。生品味甘澀，性平，具有止血的功效，炒炭后收澀止血作用增強(qiáng)。炒炭歷來(lái)要求“存性”，其內(nèi)容包含兩個(gè)方面:其一所謂“存性”是指藥性的概念，即保存該藥在炒炭后應(yīng)有的性能;其二表現(xiàn)在制炭藥的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)方面，即工藝過(guò)程中藥物的炭化程度，達(dá)到炭化而不灰化的質(zhì)量要求。火候是影響“炒炭存性”的關(guān)鍵因素，目前藕節(jié)炭還沒(méi)有統(tǒng)一、規(guī)范的炮制工藝，其火候掌握多憑主觀經(jīng)驗(yàn)判斷，因人因地差異較大，導(dǎo)致臨床療效的不穩(wěn)定，因此對(duì)藕節(jié)“炒炭存性”的標(biāo)準(zhǔn)研究具有十分重要的意義。

目前“炒炭存性”的標(biāo)準(zhǔn)研究主要集中在以下幾個(gè)方面:① pH值測(cè)定法［2］;② 吸附力的測(cè)定［3］;③ 薄層鑒別［4］;④ 顯微鑒別［5］;⑤ 電導(dǎo)法測(cè)定電導(dǎo)率值［6］;⑥ 滴定法測(cè)定酸性成分的含量［7］。但這些方法都局限于某一方面，過(guò)于單一，不能全面評(píng)價(jià)某種炭藥是否“炒炭存性”。因此，我們分別對(duì)不同炒炭程度的藕節(jié)炭及生品進(jìn)行了薄層鑒別和吸附力的測(cè)定，并用對(duì)小鼠的凝血時(shí)間來(lái)驗(yàn)證，采用多指標(biāo)綜合評(píng)價(jià)藕節(jié)“炒炭存性”的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1 儀器、試藥與試驗(yàn)動(dòng)物及供試液的制備

1.1 儀器

BP211D AG電子天平(德國(guó)Sartorius);正德牌遠(yuǎn)紅外可控溫電爐(功率45～2 000W);紅外測(cè)溫儀(smart儀器有限公司)、炒鍋，秒表，載玻片。

1.2 試劑與試藥

甲醇、乙酸乙酯、檸檬酸、檸檬黃均為分析純，水為蒸餾水，生理鹽水，云南白藥膠囊(批號(hào)20070901，云南白藥集團(tuán))。

藕節(jié)藥材購(gòu)自四川荷花池藥材市場(chǎng)，經(jīng)本校中藥鑒定教研室盧先明教授鑒定為為睡蓮科植物蓮Nelumbo nucifera Gaertn.的干燥根莖節(jié)部。藕節(jié)炭由實(shí)驗(yàn)室自制。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康昆明種小鼠由成都中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物研究中心提供，動(dòng)物質(zhì)量合格證:SCXK(川)2008－11號(hào)。

1.4 供試液的制備

取不同工藝炮制的藕節(jié)炭及生藕節(jié)各20 g，加10倍量的水，浸泡20 min，煎煮30 min，再加10倍量水，煎煮25 min，合并濾液，濃縮到40 mL，制成0.5 g/mL藥液。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 藕節(jié)的炮制

取生藕節(jié)，洗凈，除去雜質(zhì)，即為生品;選直徑在1～2 cm凈制后的生藕節(jié)，武火(鍋底溫度350℃，藥物溫度140℃，用紅外測(cè)溫儀測(cè)定鍋溫及藥溫)炒15 min，即為輕炭;武火炒29 min，即為標(biāo)準(zhǔn)炭;武火炒45 min，即為重炭。

表1 樣品的收率及成品性狀

2.2 薄層鑒別

樣品的制備方法:取生品、輕炭、標(biāo)準(zhǔn)炭和重炭粉末各5 g，加50%甲醇100 mL水浴加熱40 min，濾過(guò)，濾液回收溶劑至干，再分別用150 mL的乙酸乙酯水浴加熱提取20 min，過(guò)濾，回收乙酸乙酯，殘?jiān)ㄈ葜? mL，作為供試品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取供試品溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以氯仿－乙酸乙酯－甲酸(8∶8∶0.5)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，于紫外燈365 nm下檢視。見(jiàn)圖1:

從薄層鑒別結(jié)果看，炒炭后，A點(diǎn)是生品和炒炭品共有的點(diǎn)，炒制時(shí)間和炒制溫度對(duì)其穩(wěn)定性影響不大。炒重炭沒(méi)有B點(diǎn)熒光，可能是炒制時(shí)間太長(zhǎng)被破壞，在A、B兩點(diǎn)之間，炒重炭隱約可見(jiàn)一個(gè)熒光，但又與B點(diǎn)不在同一Rf值上，可能是破環(huán)產(chǎn)生的成分。因此保持炒炭存性，必須要有B點(diǎn)。

圖1 不同溫度炮制的藕節(jié)炭薄層鑒別圖

2.3 吸附力的測(cè)定

2.3.1 檸檬黃標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制:精密稱取檸檬黃0.028 89 g，用檸檬酸標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋至250 mL。

2.3.2 線性范圍測(cè)定:精密吸取檸檬黃標(biāo)準(zhǔn)溶液1.00、3.00、5.00、7.00、9.00 mL，分別置 50 mL 量瓶中，用檸檬酸溶液稀釋至刻度，搖勻。按分光光度法在428 nm處測(cè)定吸收度，以檸檬黃的量為橫坐標(biāo)，以吸收度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。回歸方程:C=1.055A－0.022 6，檸檬黃的含量在 0.115 6～1.040 4 mg內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3.3 供試品吸附力的測(cè)定:分別取生品、輕炭、標(biāo)準(zhǔn)炭、重炭樣品0.1 g各兩份，置于50 mL量瓶中，一份加入檸檬酸溶液，振搖15 min，過(guò)濾，濾液作為空白溶液;一份加入5 mL檸檬黃標(biāo)準(zhǔn)溶液，用檸檬酸溶液稀釋到刻度，振搖15 min，過(guò)濾，濾液作為供試品溶液，以檸檬酸溶液為空白對(duì)照，于428 nm下測(cè)定吸光度。

樣品的吸附力計(jì)算方法為:

未被吸附的檸檬黃的吸光度=供試品溶液的吸光度－空白溶液的吸光度，

吸附力=(加入檸檬黃的量－未被吸附的量)/樣品量

由表2可知:炒炭后，藕節(jié)炭的吸附力先降后升，達(dá)到最大值，并高于生品，然后開(kāi)始下降，說(shuō)明藕節(jié)炒炭至一定程度時(shí)其吸附力增強(qiáng)，“不及”或“太過(guò)”可使吸附力相對(duì)降低，此方法考查某種藥物炒炭后是否“存性”具有一定合理性，所以，我們認(rèn)為藕節(jié)炒炭后“存性”，其吸附力不得低于2.50。

表2 供試品的吸附力

2.4 凝血時(shí)間的測(cè)定

取體重18～20 g健康小鼠60只，♀♂各半，按體重隨機(jī)分為6組，每組10只，即生理鹽水組、陽(yáng)性組，生品組、輕炭組、標(biāo)準(zhǔn)炭組、重炭組，實(shí)驗(yàn)前12 h禁食不禁水。每天早上灌胃，連續(xù)3 d，于末次給藥后1 h(室溫19℃)進(jìn)行玻片法［8］測(cè)定凝血時(shí)間，即動(dòng)物末次給藥1 h后，眼球取血，在干凈的玻片兩端分別滴兩滴血液，每隔30 s用大頭針由里向外輕挑，直到有血絲出現(xiàn)即為凝血時(shí)間，并用另外一滴血驗(yàn)證，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 凝血時(shí)間結(jié)果

與生理鹽水組相比，生品與重炭均有顯著性差異(P＜0.05)，輕炭與標(biāo)準(zhǔn)炭均有極顯著差異(P＜0.01)。組間比較，生品與輕炭組、標(biāo)準(zhǔn)炭組、重炭組均無(wú)顯著性差異，但從凝血時(shí)間的均值來(lái)看，藕節(jié)炒炭后，對(duì)小鼠的凝血時(shí)間是有縮短的趨勢(shì)。

由上表可知:生藕節(jié)和藕節(jié)炭對(duì)小鼠的凝血時(shí)間均比空白組要短，且炒炭后優(yōu)于生品;標(biāo)準(zhǔn)炭的凝血時(shí)間最短，重炭組的凝血時(shí)間最長(zhǎng)，這也證實(shí)了古人炒炭時(shí)強(qiáng)調(diào)“火候”標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)防止“太過(guò)或不及”的道理。

3 結(jié)論與討論

3.1 古人在炒炭時(shí)強(qiáng)調(diào)炒炭存性，并防止“太過(guò)或不及，即不及則功效難求，太過(guò)則氣味反失”，藕節(jié)炭與生品的薄層鑒別比較，炒制時(shí)間和炒制溫度對(duì)B點(diǎn)成分影響較大，炒重炭中B點(diǎn)熒光消失，因此要保證藕節(jié)炒炭存性，可以以B點(diǎn)為判斷依據(jù)。從吸附力的測(cè)定結(jié)果可知炒炭后的吸附力先降后升，并且標(biāo)準(zhǔn)炭的吸附力最大，超過(guò)生品;從凝血時(shí)間的測(cè)定結(jié)果可知:藕節(jié)炒炭后，對(duì)小鼠的凝血時(shí)間均有明顯縮短，其中凝血作用最好的是標(biāo)準(zhǔn)炭組;四個(gè)樣品的凝血時(shí)間也是呈現(xiàn)拋物線趨勢(shì)，這同吸附力和薄層鑒別的趨勢(shì)一致，可認(rèn)為將藥物炒至一定程度的炭后，有的成分被破壞，也有新成分的生成，生成的新成分是否是增強(qiáng)止血的物質(zhì)，我們正在進(jìn)一步深入研究求證，同時(shí)可初步闡明古人“不及則功效難求，太過(guò)則氣味反失”的科學(xué)內(nèi)涵。

3.2 目前藕節(jié)炭還沒(méi)有統(tǒng)一、規(guī)范的炮制工藝和標(biāo)準(zhǔn)，這就導(dǎo)致各地炒炭存性程度不同，甚至還有炒炭太過(guò)，導(dǎo)致其原有的有機(jī)物大部灰化，影響臨床療效。因此本課題從炒炭存性的角度出發(fā)，綜合了薄層鑒別、吸附力的測(cè)定及凝血時(shí)間的藥效學(xué)指標(biāo)，建立了藕節(jié)“炒炭存性”的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果證明該標(biāo)準(zhǔn)切合實(shí)際，簡(jiǎn)單可行，能夠較好的控制炒炭程度，從而在原有的經(jīng)驗(yàn)評(píng)價(jià)的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步完善標(biāo)準(zhǔn)，為更好地控制藕節(jié)炭的質(zhì)量打下一定的基礎(chǔ)。

［1］中國(guó)藥典［S］.一部.2005:141.

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