急性腦梗死患者內(nèi)皮祖細(xì)胞增殖能力和衰老研究

苗 旺 劉恒方 郭偉新 楊期東 鮑 娟 羅紅波

1)鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科 鄭州 450052 2)鄭州大學(xué)第五附屬醫(yī)院 鄭州 450052 3)中南大學(xué)湘雅醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科 長沙 410008

我們測定急性腦梗死患者外周血來源的內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPCs)增殖能力和衰老情況,并與其年齡和基礎(chǔ)疾病相匹配的對照組相對比,以探討急性腦梗死對患者EPCs增殖能力和衰老的影響,從而為腦血管損傷修復(fù)和再生研究提供理論基礎(chǔ)。

1 資料和方法

1.1一般資料收集湘雅醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科經(jīng)頭顱MRI確診為急性腦梗死住院患者16例,發(fā)病 1 d內(nèi),年齡 60～75歲,平均(64.5±7.4)歲,其基礎(chǔ)疾病為高血壓。對照組患者為門診高血壓16例患者,年齡 59～75歲,平均(63.8±8.4)歲。2組年齡和高血壓史、程度差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。排除其他可能影響EPCs動員和功能的因素、疾病和藥物應(yīng)用史。征得患者及家屬知情同意。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞的分離、培養(yǎng):抽取空腹上肢靜脈血10 mL。按文獻(xiàn)所述方法進(jìn)行 EPCs分離和培養(yǎng)[1]。細(xì)胞接種密度為2×106個/mL。

1.2.2 內(nèi)皮祖細(xì)胞增殖能力、集落和細(xì)胞計數(shù),衰老細(xì)胞檢測:內(nèi)皮祖細(xì)胞增殖能力、集落和細(xì)胞計數(shù)于培養(yǎng)第7天進(jìn)行,具體方法參考相關(guān)文獻(xiàn)[2]。取培養(yǎng) 2周 EPCs,采用細(xì)胞衰老β-半乳糖苷酶染色試劑盒檢測衰老情況,隨機(jī)選取5個高倍視野(×200),每個視野計數(shù)細(xì)胞總數(shù)100個,統(tǒng)計其中的衰老細(xì)胞數(shù),取其平均值。

1.3統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS 11.5統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析,數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差±s)表示,2組之間比較采用t檢驗(yàn),以α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。

2 結(jié)果

ACI組EPCs增殖能力為 0.245±0.066,對照組為0.185±0.050,2組相比ACI組明顯增強(qiáng),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);EPCs計數(shù) ACI組為69.74±6.34,對照組為57.10±9.28,2組相比 ACI組相對增多,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);ACI組EPCs集落數(shù)目為 3.02±0.68,較對照組的1.90±0.41明顯增加,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。培養(yǎng)2周時EPCs衰老細(xì)胞計數(shù)急性腦梗死組為44.76±6.78,與對照組的 46.85±5.06相比,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

3 討論

腦梗死發(fā)生在血管損傷基礎(chǔ)上,研究表明在急性血管損傷時,外周血中內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)目迅速增加[3-4],以滿足血管損傷修復(fù)需要。新近研究表明,腦梗死急性期外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞增加[5],EPCs參與損傷血管的修復(fù),不僅與從骨髓動員入外周血中的數(shù)目有關(guān),而且與外周血中EPCs的增殖能力、是否易于衰老關(guān)系密切[6-7]。我們的結(jié)果顯示,急性腦梗死血管損傷將使EPCs增殖能力明顯增強(qiáng),從而使得細(xì)胞集落計數(shù)、細(xì)胞計數(shù)也較對照組顯著提高。說明在急性腦梗死時不僅EPCs動員增加,而且 EPCs的增殖能力增強(qiáng),以便機(jī)體應(yīng)對血管損傷的嚴(yán)重事件。急性腦梗死EPCs數(shù)目增多、功能增強(qiáng)的機(jī)制可能與下列因素有關(guān)。組織缺血是動員骨髓EPCs釋放到外周血中的一種很強(qiáng)的刺激因素[8]。急性缺血時可以上調(diào)VEGF[9]和SDF-1[10]的表達(dá)。通過MM P-9依賴機(jī)制來誘導(dǎo)祖細(xì)胞從骨髓中動員[11],還可以增強(qiáng)EPCs的功能[12]。腦梗死時腦組織損傷,組織缺氧,因此可以反應(yīng)性分泌釋放一些細(xì)胞因子來動員EPCs并增加其功能,從而應(yīng)對血管損傷應(yīng)激需要。

EPCs是具有譜系定形的祖細(xì)胞,將通過復(fù)制衰老而使其具有一定的壽命限制。Imanishi[13]研究顯示體外EPCs細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)一段時間后細(xì)胞發(fā)生衰老,功能下降。我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,雖然在急性腦梗死時EPCs的增殖能力增強(qiáng),但衰老細(xì)胞計數(shù)和對照組差異無統(tǒng)計學(xué)意義,說明急性腦出血應(yīng)激并不能延緩培養(yǎng)一段時間后EPCs的衰老。衰老的EPCs功能下降,將影響在損傷血管的修復(fù)和再生中的作用。為了使EPCs能夠在腦出血的血管再生或防治血管病變的進(jìn)一步發(fā)展中發(fā)揮更重要的作用,就需要尋找某些方法或措施來延緩細(xì)胞的衰老。

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