針刺上巨虛穴緩解慢性內臟痛敏的作用及機理

高志雄，王 威*，呂恩基，趙金茹

(1．遼寧中醫藥大學針灸推拿學院，遼寧沈陽110032;2．遼寧中醫藥大學實驗中心，遼寧沈陽110032)

腸易激綜合征 (Irritable bowel syndrome，簡稱IBS)，是以慢性或反復出現的腹痛并伴隨腹瀉、排便習慣和大便性狀異常為主要癥狀而又缺乏胃腸道結構和生化異常的綜合征[1,2]．近年來認為內臟敏感性增高是IBS的病理生理特征，是IBS患者癥狀產生的重要基礎和癥狀多樣化的原因，甚至被學者視為IBS患者的生物學標識[3]，其具有臨床上常見多發，但治療方法有限，且療效不理想的特點[4]．

針刺治療內臟性疾患具有確切的療效[5]，然而，國內又很少開展單純針刺治療IBS的基礎研究報道，加強這方面工作，將有助于臨床針刺治療IBS工作的推廣應用．P物質(SP)、血管活性腸肽(VIP)作為胃腸運動調節中一對重要的興奮性和抑制性胃腸肽，在胃腸道有廣泛的分布;為此，本實驗應用免疫組織化學方法觀察了針刺上巨虛穴對IBS大鼠模型胃腸道SP、VIP分布的影響，研究針刺的作用規律，為臨床治療提供科學依據．

1 材料和方法

1.1 實驗動物

雄性3周齡SD大鼠100只(北京維通利華實驗動物技術有限公司提供),清潔級．

1.2 主要試劑

兔抗鼠SP、VIP抗體，武漢博士德生物工程有限公司提供．

1.3 自制結腸擴張 (colorectal distention，CRD)刺激球囊

球囊擴張器選用安全套頭端3 cm，用4號手術絲線與加工后的一次性輸液器采液端導管扎緊(氣囊長度25 mm，直徑2．0 mm)．距球囊頭端6 cm處扎絲線作為插入時的深度標記．其外側開口端接一輸液用三通管(規格:CONNECTAPLUS3 White瑞典BD公司)，分別與10 mL注射器和XJ11D臺式血壓計相連．

2 實驗方法

2.1 動物分組

將100只SD大鼠隨機分為五組:空白組、模型組、多次電針組、單次電針組、單次針刺組,每組20只．

2.2 IBS造模方法

選用AL－Chaer內臟敏感動物模型為基礎，稍改進．使用自制的刺激球囊，蘸少許醫用石蠟油，自大鼠肛門輕柔插入4～5 cm，大致達到大鼠的降結腸部位．每次氣囊打氣，維持腸道壓力60 mmHg，保留l min，然后撤氣．每次刺激之前，檢查球囊的密閉性;給予擴張刺激前，可預先刺激大鼠肛門部，使其排盡大便，以減少糞團對擴張程度的影響．一天內給予操作一次，總共持續刺激2周．正常對照組大鼠不作任何處理．

2.3 治療方法

2．3．1 單次電針

電針時取大鼠雙側“上巨虛 (ST37)”，通過G6805－1A型電針治療儀，采用疏密波，密波100 Hz/3s，疏波4 Hz/3s交替，刺激強度1 mA，以大鼠后肢輕輕抖動但不產生嘶叫為度，持續30 min．單次針刺組大鼠給予同樣操作，毫針刺入穴位但不進行通電刺激．次日采集標本．

2．3．2 隔日多次電針

電針方法同上，隔日給予一次，持續給予4次，治療結束次日采集標本．

2.4 標本采集

標本采集前大鼠禁食不禁水12 h．大鼠給予腹腔注射20%烏拉坦0．35 mL/100g麻醉，動物深昏迷狀態下打開腹腔，取距肛門6 cm處結腸1～2 cm，矢狀剖開，鹽水清洗，平鋪于濾紙上，10%甲醛固定，冰箱4℃保存．

2.5 結腸SP、VIP免疫組化染色

按 SABC(stret avidin－biotin complex)法進行．

2.6 結腸SP、VIP、免疫組化染色圖像分析

應用BI－2000圖像分析系統，進行灰度值分析．

2.7 統計學處理

3 結果

3.1 對鼠結腸SP表達的影響

免疫組化染色圖像分析表明:與多次電針組相比，模型組大鼠SP表達有明顯增強 (P＜0．01);單次電針組、單次針刺組大鼠SP表達明顯增多 (P＜0．01)．單次電針較單次針刺組大鼠SP表達無顯著性差異(P＞0．05)．見表 1．

3.2 大鼠結腸VIP表達的影響

免疫組化染色圖像分析表明:與多次電針組相比，模型組大鼠 VIP表達明顯降低(P＜0．01);單次電針組、單次針刺組大鼠VIP表達明顯降低(P＜0．01)．單次電針較單次針刺組大鼠VIP表達無顯著性差異(P＞0．05)．

表1 IBS大鼠模型組、治療組和空白組結腸SP表達的比較(±s)

表1 IBS大鼠模型組、治療組和空白組結腸SP表達的比較(±s)

注:與模型組相比*P＜0．05，**P＜0．01;與單次針刺組相比☆P＜0．05，☆☆P＜0．01;與單次電針組相比△△P＜0．01;與空白組相比※P＜0．05，※※P＜0．01．

組 別 灰度值模 型 組 95．38±1．02☆※※單次針刺組 94．69±1．06※※單次電針組 93．82±1．13*※※多次電針組 84．17±1．48**△△☆☆※空 白 組 82．29±1．06**△△☆☆

表2 IBS大鼠模型組、治療組和空白組

4 結論

SP作為一種重要的胃腸肽廣泛地分布于腸神經系統和整個胃腸道[6]，既可以激素的形式亦可作為神經遞質參與胃腸運動的調控．在哺乳類動物腸道P物質主要定位于感覺神經纖維，具有參與感覺(特別是傷害性刺激)信息的傳遞、增加血管通透性和調節腸運動等十分重要的生物活性[7]．本實驗結果顯示，針刺后結腸SP免疫反應陽性神經、神經元含量明顯降低，且表現多次電針效果優于單次電針、單次針刺．結果提示結腸中SP的含量增加在IBS中可能起著重要的作用．以往實驗研究證明SP是胃腸運動調節中主要的興奮性神經遞質[8]，新生期持續腸道機械刺激導致含SP的肽能細神經纖維末稍(傷害性感受器)處于致敏狀態，同時其受體NK 1在各種靶細胞中表達增加．一旦再接受較低強度傷害刺激信息時，SP肽能神經纖維就能產生神經沖動，一方面向中樞部位傳遞，產生痛覺過敏，另一方面肽能感覺神經纖維又可通過軸索反射和神經節反射逆向釋放SP，與各種靶細胞結合發揮生物學效應，導致腸道動力紊亂、血管滲透性改變、腺上皮的分泌和肥大細胞的脫顆粒等，而肥大細胞脫顆粒產生的生物活性物質 (如組胺、5－羥色胺、前列腺素、淋巴因子等)反過來又可進一步引起肽能感覺神經末稍的去極化 (尤其正常情況下處于非功能狀態的傷害刺激感受器)，降低其感覺閾值，從而形成一種正反饋機制，造成腸道持續的感覺高敏感狀態和動力功能紊亂．本實驗顯示電針上巨虛穴能降低結腸中SP的陽性神經含量，提示電針上巨虛穴可能通過胃腸道局部SP來降低胃腸壁內神經元的興奮性，減輕腸道高敏狀態和動力功能紊亂，且表現多次電針效果優于單次電針、單次針刺．

本實驗中，我們還觀察到多次電針能顯著增加結腸中的VIP免疫反應陽性產物含量，且表現多次電針效果優于單次電針、單次針刺．VIP是ENS中具代表性和研究較深入的神經肽，也是重要的肽類神經遞質之一，許多研究已證明VIP在胃腸運動調節中主要起抑制效應．故此，上述結果表明電針上巨虛穴還可能通過增加VIP對胃腸道的抑制作用，降低胃腸運動．

綜上所述，本實驗結果表明電針上巨虛穴減輕內臟痛敏的作用與胃腸道SP的分布減少及VIP的分布增加存在著密切關系，且多次電針效果優于單次電針跟單次針刺．電針上巨虛是否對胃腸道其他胃腸激素和神經遞質也產生影響，還需作更深入的研究．

[1]呂愈敏．胃腸病學[M]．北京:人民衛生出版社，2000:730－735．

[2]張兵，張萬岱．現代消化病學[M]．北京:人民軍醫出版社，1999:860－862．

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[5]王威，白麗,高志雄,等．針刺天樞、上巨虛穴治療腹瀉型腸易激綜合征的臨床觀察[J]．中國誤診學雜志，2008，8(26):6335．

[6]Maake C， Kloas W， Szendefi－m，et al．Neurohormonal pep－tides， serotonin and nitric oxide synthase in the enteric nervous system and endocrine cells of the gastrointestinal tract of neotenic and thyroid hormone－treated axolotls[J]．Cell Tissue Res，1999，297(1):91－101．

[7]Ohtsuka M，Yoshioka K．Neurotransmitter functions of mammalian tachykinis[J]．Physiol Rev，1993，73(2):229－308．

[8]Wheatley I M，Hutson J M，Chow C W，et al．Slow－transit constipation in childhood[J]．J Pediatr Surg，1999，34(5):829－832．