3種方法檢測孕婦體內(nèi)免疫性抗體的對比研究

李永乾 龍志芳 姚瑤 郝建英

檢測孕婦體內(nèi)免疫性抗體效價是協(xié)助早期診斷新生兒溶血病(HDN)的可靠指標之一。以往均采用經(jīng)典試管法測定孕婦體內(nèi)免疫性抗體。但在實際工作中，經(jīng)典試管法檢測孕婦體內(nèi)的免疫性抗體程序繁瑣且穩(wěn)定性差。微柱凝膠試驗技術(shù)(MGT)是一種新的改良抗球蛋白試驗技術(shù)，在國外輸血領(lǐng)域已逐漸作為常規(guī)應(yīng)用［1］，國內(nèi)也有報道［2－4］。筆者自 2006 年以來在血液免疫學(xué)診斷方面進行了MGT、凝聚胺法(MPT)和試管法抗人球蛋白試驗技術(shù)(tube anti-person globulin experiment technique，TAT)的研究，將微柱凝膠技術(shù)和凝聚胺技術(shù)應(yīng)用到夫婦免疫性抗體的檢測工作中，三種方法進行了對比研究，探討了3種方法的可靠性。

1 材料與方法

1．1 標本來源 1 152例2006年6月至2009年6月夫婦ABO血型不合的標本。孕婦為O型，丈夫為A、B、或AB型。

1．2 試劑 微柱凝膠抗體篩查卡由長春博訊生物技術(shù)有限責(zé)任公司提供，試管法抗人球蛋白、2-巰基乙醇等試劑由上海血液生物醫(yī)藥有限公司提供，凝聚胺試劑有臺灣Baso試劑公司提供。

1．3 方法 微柱凝膠技術(shù)按產(chǎn)品的說明書，嚴格控制紅細胞的濃度、加樣量、孵育溫度和時間。傳統(tǒng)試管法試驗按《全國臨床檢驗操作規(guī)程》操作。同時設(shè)陰陽性對照。

1．4 統(tǒng)計學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 13．0統(tǒng)計軟件，計數(shù)資料采用χ2檢驗，P ＜0．05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 O型孕婦免疫性抗-A或抗-B效價 對我院門診和住院孕婦檢測的1 152份O型孕婦免疫性抗-A或抗-B效價進行統(tǒng)計學(xué)處理，以1∶128為界值，配偶為A型陽性檢出率為29．63%(168/567)，配偶B型者陽性檢出率為29．74%(174/585)，組間檢出率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0．05)。

2．2 Rh免疫性抗D抗體檢出率 在1 152例孕婦中檢出RhD陰性18例，在18例 RhD陰性孕婦中檢出抗D抗體12例(66．7%)，抗 D 效價≥1∶32孕婦 5 例(41．7%)，抗 D 效價≥1∶64孕婦 5 例(41．7%)，抗 D 效價≥1∶128 孕婦 2 例(16．7%)。

2．3 MGT法與MPT、TAT對IgG抗-A(B)抗體的撿出率 在1 152例夫婦血型不合的孕婦血清中，MGT法檢出抗-A(B)抗體效價≥1∶64以上者643例(55．8%)，MPT法撿出624例(54．2%)，TAT法撿出615 例(53．4%)，三者比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P ＞0．05)。見表2。

表2 MGT法與MPT法、TAT法檢測IgG抗A(B)抗體效價的比較

3 討論

新生兒溶血病(母子血型不合溶血病)是由于孕婦與胎兒血型不符，母體的抗體與胎兒的紅細胞發(fā)生反應(yīng)而引起的同種免疫溶血性疾病。研究表明，O型孕婦IgG抗-A(B)效價≥1∶64的檢出率遠遠高于A(B)型孕婦，這是因為幾乎所有的O型個體血清中都含有IgG抗-A(B)，而A(B)型人血清中主要是IgM抗-A(B)，IgG抗體極少的緣故。因此，本研究選擇的孕婦為O型，丈夫為A、B、AB型。ABO、RhD血型引起的HDN是由于母親血液中存在與胎兒不相合的IgG性質(zhì)血型抗體引起的同種被動免疫性疾病［5］。當孕婦血清中IgG抗-A(B)抗體效價≥1∶64或RhD陰性孕婦血液中產(chǎn)生針對胎兒RhD抗原的抗D抗體時，胎兒有受害的機會，可能發(fā)生HDN。因此通常以IgG抗-A(B)抗體效價≥1∶64作為臨界值，孕婦血清中IgG抗-A(B)抗體效價≥1∶128時，提示嬰兒很可能受害［6］。產(chǎn)前IgG抗-A(B)效價測定一般在妊娠第16周進行第1次檢測，以了解孕婦抗體基礎(chǔ)水平，然后，于28～30周作第2次檢查，結(jié)果高者，要定期檢測孕婦血清中IgG抗-A(B)抗體效價，并由婦科醫(yī)師給予治療。本組1 152例IgG抗-A(B)效價≥128的孕婦，經(jīng)治療有效率達到80%以上，很少發(fā)現(xiàn)明顯的ABO系統(tǒng)HDN，說明HDN只要產(chǎn)前積極預(yù)防治療，完全可以降低其發(fā)病率。血清中的抗-A、抗-B往往是IgG和IgM的混和物，其具有相同的特異性，因此須除IgM抗-A(B)的相互干擾。通常使用二疏基乙醇(2-Me)處理血清，破壞IgM抗體，使IgG抗體保持與相應(yīng)的紅細胞致敏的血清學(xué)特性。TAT法測抗體的效價需作大批試驗，孵育后需洗滌至少3次，再加抗人球離心觀察結(jié)果。MPT法也是一種快速檢測免疫性IgG血型抗體的方法，該方法縮短了抗原抗體的孵育時間，既不需反復(fù)洗滌紅細胞，又不需特殊儀器設(shè)備，檢測成本比MGT法低，操作方法簡便快速。MGT技術(shù)是一種半自動化檢測方法。微柱內(nèi)裝入細小凝膠粒，在柱內(nèi)使抗原抗體發(fā)生反應(yīng)并在IgG參與條件下，通過膠粒間篩網(wǎng)和離心等作用，使凝集的紅細胞留在柱子上部或在沿柱的不同位置停留，形成陽性結(jié)果。未凝集的紅細胞則不被阻止，到達柱的底部［1］。該技術(shù)基于生物化學(xué)凝膠過濾技術(shù)和免疫化學(xué)抗原抗體特異反應(yīng)技術(shù)原理，加之取樣標準化，自動孵育和離心后直接判讀結(jié)果，人為干擾因素小，是一種比MPT、TAT法更敏感、準確的檢測方法［1，2］。以往的實驗結(jié)果也證明，MPT法在檢測血型IgG抗體的靈敏度上與傳統(tǒng)試管法無明顯差異，并且與MGT法也有高度的相關(guān)性。雖然MGT法較敏感。但效價在≥1∶64時三種方法結(jié)果一致。而對于臨床來說，當抗體效價≥1∶64才有參考意義，因此高靈敏度不會使臨床結(jié)果有歧義。

我們的結(jié)論是MGT技術(shù)檢測孕婦中的IgG抗-A(B)抗體效價比MPT和TAT技術(shù)具有更高的靈敏度，檢出的特異性一致，結(jié)果判讀準確，是輔助診斷夫婦血清中IgG抗-A(B)抗體效價的可靠方法。

1 Labgston MM，Procter JL，Cipolone KM，et al．Evaluation of the gel system for AOB grouping and D typing．Transfusion，1999，39:300-301．

2 李勇，朱逢春，劉瑩，等．微柱凝膠Coombs實驗對人RhD血型檢測的實驗研究．中國輸血雜志，1998，11:24-25．

3 鄒煥榮，葉有玩．自身免疫性溶血性貧血的微柱凝集技術(shù)診斷應(yīng)用．江西醫(yī)學(xué)檢驗，2004，22:113-114．

4 董永，李延年，孫波，等．微柱凝集法篩檢不規(guī)則抗體的臨床應(yīng)用．中國輸血雜志，2003，16:326-327．

5 肖星甫主編．輸血技術(shù)手冊．第1版．成都:四川科學(xué)技術(shù)出版社，1992．156-159．

6 張和平，馮杏彬，申華．ABO血型抗體效價的檢測與母兒血型不合的療效觀察．中國優(yōu)生與遺傳雜志，2003，11:60-62．