紅果龍葵水提液與乙醇提取液的抑菌作用

古麗扎爾·阿布都克依木，阿不都拉·阿巴斯*

(新疆大學生命科學與技術學院，新疆 烏魯木齊 830046)

紅果龍葵水提液與乙醇提取液的抑菌作用

古麗扎爾·阿布都克依木，阿不都拉·阿巴斯*

(新疆大學生命科學與技術學院，新疆 烏魯木齊 830046)

使用無菌蒸餾水和70%乙醇從紅果龍葵果實中提取活性成分并探討其抑菌作用。結果表明，提取物對微生物有明顯的抑制作用。水提液的最低抑菌質量濃度分別為大腸桿菌2mg/mL、金黃色葡萄球菌1mg/mL、枯草桿菌0.5mg/mL、短小芽孢桿菌3mg/mL、產氣芽孢桿菌0.5mg/mL；乙醇提取液的最低抑菌質量濃度分別為大腸桿菌2mg/mL、金黃色葡萄球菌2mg/mL、枯草桿菌1mg/mL、短小芽孢桿菌5mg/mL、產氣芽孢桿菌1mg/mL。

紅果龍葵；水提取物；乙醇提取物；抑菌作用

我國植物資源豐富，紅果龍葵(Solanum alatum Moench.)俗名朱紅星星、紅葵，隸屬于被子植物門雙子葉、合瓣花亞綱、茄科、茄屬，一年生草本植物，我國新疆、河北(栽培)、山西、甘肅、青海有分布，歐洲各國也有[1]。由于其分布地區廣、應用范圍多、營養豐富、經濟價值高、開發潛力大、它是一種值得開發的重要野生植物資源。到目前為止，國內外對于紅果龍葵研究比較少，關于水提取液和乙醇提取液抑菌作用比較實驗尚未見報道。因此本實驗采用水和乙醇從紅果龍葵中提取有效的抗菌成分做抑菌實驗，旨在為紅果龍葵進一步開發利用提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 材料、菌種與試劑

紅果龍葵于2007年10月采自新疆大學農場，經阿不都拉·阿巴斯老師鑒定為紅果龍葵(Solanum alatum Moench.)。紅果龍葵果晾干、粉碎備用。

圖1 紅果龍葵果實Fig.1 Photograph of Solanum alatum Moench. fruits

供試菌種：大腸桿菌(Escherichia coli)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草桿菌(Bacillus subtilis)、短小芽孢桿菌(Bacillus pumilus)、產氣芽孢桿菌(Enterobacter aerogenes)，下文中分別簡稱為E.c、S.a、B.s、B.p、E.a。以上菌種由新疆維吾爾自治區藥檢所藥理實驗室和新疆大學生命科學與技術學院微生物教研室提供。

牛肉膏蛋白胨培養基[2]：牛肉膏、蛋白胨、瓊脂、NaCl、NaOH、HCl、乙醇、無菌蒸餾水。

1.2 儀器與設備

RE-52A型旋轉蒸發器、電子天平 北京賽多利斯天平有限公司； YXQ-SG46-2壓力蒸汽滅菌器 上海博訊實業有限公司醫療設備廠； KK22EOOTI西門子冰箱 安徽博西制冷有限公司；光照培養箱 上海恒科技有限工司；PYX-DHS電熱恒溫培養箱 上海躍進醫療器械廠。

1.3 方法

1.3.1 紅果龍葵水和乙醇提取液的制備流程

稱取樣品5g→加10倍樣量的相應提取溶劑50mL→分別采用90℃熱水提取3h和70%乙醇回流提取3h→分別過濾→濾渣分別加25mL相應溶劑同條件提取2.5h合并，旋轉蒸發濃縮至黏著狀→用水溶解并定容于10mL制成水懸濁液→分別獲得0.5g/mL的水提液、乙醇提取液[3-4]。

1.3.2 供試菌的活化

將各供試菌種接種于牛肉膏蛋白胨培養基斜面上(25mL的試管斜面)，在37℃培養箱中培養18h后，獲得活化的新菌種。

1.3.3 菌懸液的制備

分別用接種環挑取少許菌體置于裝有9mL無菌生理鹽水的試管中，振蕩搖勻，10倍稀釋法分別稀釋制成含菌量為106～108CFU/mL的菌懸液[5]。

1.3.4 含菌平板的制備

配制滅菌好的培養基冷卻至50～60℃，在無菌操作臺內趁熱倒入已滅菌好的培養皿中，每皿約15～20mL，待冷卻。再吸取0.2mL菌懸液均勻涂抹到平板上，制成含菌平板。

1.3.5 濾紙片擴散法測定抑菌圈直徑

將厚度1.3mm的優質定性濾紙用打孔機制成直徑為6mm的小圓片，將濾紙圓片浸泡在準備好的各提取液中(浸泡約0.5～1h)使它充分吸收樣品。將滅菌過的培養基制成平板，吸取0.2mL菌懸液均勻涂抹到平板上。用打孔器將濾紙打成6mm的紙片，高壓滅菌。用無菌鑷子將滅菌后的濾紙片放入紅果龍葵水提液和乙醇提取液中，浸泡0.5～1h，風干后，用無菌鑷子夾取濾紙片貼于已涂抹菌懸液的平板表面，并輕輕按壓使充分接觸，每皿等距離放3～4片，每個實驗平行3次，并用無菌水作空白對照，在37℃培養20～24h后測定抑菌圈直徑大小，取平均值[6]。

1.3.6 含不同濃度提取物培養基的制備

配制足夠量的牛肉膏蛋白胨液體培養基，按每管準確量取10mL分裝試管，121℃濕熱滅菌，置于0～4℃冷藏備用。以提取備用液作為100%原液，加水稀釋配成質量濃度為0.125、0.25、0.5、1、2、3、5mg/mL等系列的稀釋液，準確量取該溶液0.2mL加入到盛有10mL液體培養基的試管中，配成含不同質量濃度的紅果龍葵提取物的系列培養基[7-11]。

1.3.7 最低抑菌濃度(MIC)的測定

每一系列培養基接種一種菌種(0.2mL)，每個濃度做3個重復，另取一種已稀釋的系列培養基不接種任何菌做空白對照，置適宜溫度(36±1)℃培養24h，觀察實驗結果。以能抑制細菌生長的最低添加量為該提取物的MIC。因含提取液的培養液肉眼不宜辨明菌體的生長情況，可從各管取一環轉接于固體平板上，經適宜條件培養后觀察有無菌落生長。無菌生長的最低濃度即為提取物的MIC[12-13]。

1.3.8 最低殺菌濃度(MBC)的測定

將提取物濃度高于MIC(包括MIC)的各試管或培養皿繼續培養24h，觀察生長情況。以仍無菌生長的添加量為該提取液的MBC。為了更能確定MBC，將提取物的濃度高于最低抑菌濃度的各管中各吸取0.2mL涂布于合適的瓊脂培養基平板上，置適宜條件下繼續培養。平板上菌落數小于5個的最低樣品濃度即為該樣品的最低殺菌濃度。

2 結果與分析

2.1 紅果龍葵水提液和乙醇提取液對各供試菌的影響

圖2 紅果龍葵果水提液和乙醇提取液對受試菌的抑菌效果Fig.2 Inhibition zone diameters of water and ethanol extracts from Solanum alatum Moench. fruits against five common bacteria

由圖2可知，紅果龍葵果水提液、乙醇提取液(質量濃度為0.5g/mL)對5種細菌均有抑制作用。紅果龍葵果水提液和醇提液除了對短小芽孢桿菌的抗菌作用稍弱之外，對其余菌均具有比較強的抗菌作用。水提液對5種菌的抑菌敏感度比乙醇提取液抑菌敏感度更明顯。乙醇提取液對金黃色葡萄球菌、枯草桿菌、產氣芽孢桿菌抑菌敏感度差不多，對短小芽孢桿菌的抑菌敏感度較弱。

2.2 各提取物對供試菌的MIC值測定結果

表1、2顯示了紅果龍葵果實水提液和乙醇提取液對各受試細菌的抑菌效果，表明了最低抑菌濃度(MIC)

和最低殺菌濃度(MBC)值。水提液的最低抑菌質量濃度分別為大腸桿菌2mg/mL、金黃色葡萄球菌1mg/mL、枯草桿菌0.5mg/mL、短小芽孢桿菌3mg/mL、產氣芽孢桿菌0.5mg/mL；乙醇提取液的最低抑菌質量濃度分別為大腸桿菌2mg/mL、金黃色葡萄球菌2mg/mL、枯草桿菌1mg/mL、短小芽孢桿菌5mg/mL、產氣芽孢桿菌1mg/mL。將提取液質量濃度高于最低抑菌濃度(包括最低抑菌濃度)的各試管繼續培養24h，觀察，結果表明：紅果龍葵果實水提取液和乙醇提取液對5種常見的細菌有最低抑菌濃度，除了紅果龍葵果實乙醇提取液對短小芽孢桿菌沒有最低殺菌濃度外，對其他菌均有殺菌作用濃度。

表1 紅果龍葵果實水提液對受試細菌的最低抑菌質量濃度和最低殺菌質量濃度Table 1 Minimum inhibitory concentrations and minimum bactericidal concentrations of the water extract against five common bacteria

表2 紅果龍葵果實乙醇提取液對受試細菌的最低抑菌質量濃度和最低殺菌質量濃度Table 2 Minimum inhibitory concentrations and minimum bactericidal concentrations of the ethanol extract against five common bacteria

3 討 論

3.1 一般檢測抑菌效果有兩種方法：濾紙片法和打孔法。本實驗采用了濾紙片法，因為打孔法的結果中很難測定抑菌圈直徑。

3.2 一定質量濃度的紅果龍葵果水提物和乙醇提取物對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、短小芽孢桿菌、枯草桿菌和產氣芽孢桿菌都顯示出一定的抑制作用。紅果龍葵果水提取液和乙醇提取液對受試菌的抑菌效果實驗中，用無菌蒸餾水作為對照物放到含菌平板上測抑菌圈，所有對照物沒有抑菌圈，不顯示抑菌效果。

3.3 不同質量濃度的紅果龍葵果水提液和乙醇提取液對受試細菌均有不同程度的抑制作用，可能是其抑菌機理不同，導致對不同菌的抑菌能力產生差異。

3.4 紅果龍葵果水提液對受試細菌的抑制作用比乙醇提取液的抑制作用更敏感。這可能是水提液中的水溶性化合物發揮作用，將紅果龍葵果實中有效抑菌物質提取出來。

3.5 從紅果龍葵果水提液和乙醇提取液的MIC和MBC結果來看，乙醇提取液除了對短小芽孢桿菌無殺菌作用以外，對其他的菌種都有最低抑菌和最低殺菌濃度；水提液對5個菌種都有最低抑菌和最低殺菌濃度。實驗證明紅果龍葵(Solanum alatum Moench.)果實各提取液對食品常見污染微生物有抗性，在以后的工作中可以考慮對提取物進行分離并對起抑菌作用的物質進行分析與鑒定。紅果龍葵具有食品天然防腐、醫用等開發潛力，值得進一步研究與探討。

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Antibacterial Activity of Water and Ethanol Extracts from Solanum alatum Moench. Fruits

Gulzar ABDUKEYUM，Abdulla ABB.A.S..*
(College of Life Science and Technology, Xinjiang University, Urumqi 830046, China)

To assess the antibacterial potency of Solanum alatum Moench. fruits, the water and ethanol extracts from Solanum alatum Moench. fruits were examined for their antibacterial activity against five common bacteria. It was found that both extracts had a notable inhibitory effect against the growth of all the bacteria tested. The minimum inhibitory concentrations of the water extract against Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Bacillus pumilus and Enterobacter aerogenes were 2, 1, 0.5, 3 mg/mL and 0.5 mg/mL, and those of the ethanol extract were 2, 2, 1, 5 mg/mL and 1 mg/mL, respectively.

Solanum alatum Moench.；water and ethanol extracts；antimicrobial activity

TS255.1

A

1002-6630(2010)17-0133-03

2010-03-01

古麗扎爾·阿布都克依木(1985—)，女，碩士研究生，研究方向為資源植物成分分析。E-mail：gulzargul@sina.com

*通信作者：阿不都拉·阿巴斯(1951—)，男，教授，研究方向為資源植物成分分析。E-mail：abs_abdl@163.com