花果山“糯米茶”和“糯米花茶”中有效成分提取與測定

胡喜蘭，姜 琴，尹福軍，劉 濤

(淮海工學(xué)院化學(xué)工程學(xué)院，江蘇 連云港 222005)

花果山“糯米茶”和“糯米花茶”中有效成分提取與測定

胡喜蘭，姜 琴，尹福軍，劉 濤

(淮海工學(xué)院化學(xué)工程學(xué)院，江蘇 連云港 222005)

利用超聲提取法對花果山“糯米茶”、“糯米花茶”有效成分進(jìn)行提取，采用酒石酸亞鐵比色法、紫外-可見光光度法、苯酚-硫酸比色法以及原子吸收分光光度法分別對樣品中的多酚、黃酮、多糖以及礦物元素的含量進(jìn)行測定。結(jié)果顯示“糯米茶”和“糯米花茶”的多酚含量分別為301.7mg/g和227.0mg/g；黃酮含量分別為47.925mg/g和62.025mg/g；多糖含量分別為64.674mg/g和71.341mg/g；“糯米茶”和“糯米花茶”富含礦物元素，尤其Ca、Mg含量較高分別為：4165.7、329.75μg/g和6193.50、344.50μg/g，“糯米茶”中多酚含量明顯高于“糯米花茶”，因此“糯米茶”可能是更好地抗衰老、抗氧化的保健茶。

糯米茶；有效成分；提??；測定

流蘇為木蘭植物門木蘭綱(Magnoliopsida)菊亞綱(Asteridae)玄參目(Scrophulariales)木犀科(Oleaceae)流蘇樹屬(Chionanthus)植物。流蘇樹(Chionanthus retusus Lindl. et paxt.)俗名茶葉樹，烏金子、牛筋子、蘿卜絲花，其高大優(yōu)美，枝葉茂盛，初夏滿樹白花，如覆霜蓋雪，清麗宜人，適宜植于建筑物四周，或公園中池畔和行道旁。也可選取老樁進(jìn)行盆栽，制作樁景，是國家二級保護(hù)植物。據(jù)《植物名實圖考》記載“流蘇樹，葉如盡青大小，疏密無定，春深開花，一枝數(shù)朵，長筒長瓣似李光而色白。雪柳之名，或以此。炭栗樹生云南荒山。高七八尺，葉似橘葉而闊短，柔滑嫩潤。春開四長瓣白花，細(xì)如翦紙、類紙末花而稀疏”?！吨袊?jīng)濟(jì)植物志》中記載，取木樨科植物流蘇樹的芽、葉6～12g，水煎，內(nèi)服，具有消暑止渴功效，主治中暑，其主要分布于黃河中下游及其以南地區(qū)[1-2]。

糯米茶即流蘇，春天采其嫩葉，陰干，制成茶稱為“糯米茶”，用其花制茶稱為“糯米花茶”，清香爽口，別具一番風(fēng)味。目前國內(nèi)對其有效成分的研究尚未見報道，本實驗選擇連云港特有的“糯米茶”進(jìn)行研究，測定其礦物元素、多酚、黃酮和多糖的含量，旨在充分開發(fā)利用本地區(qū)寶貴的天然資源，尋找一些高效的新的天然活性物質(zhì)，為其綜合應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

“糯米茶”和“糯米花茶”產(chǎn)自江蘇連云港花果山，由江蘇連云港康緣藥業(yè)有限公司中藥師吳舟提供。用前將其置于烘箱中，55℃條件下干燥質(zhì)量恒定后粉碎，過40目篩，保存于磨口瓶中并置于干燥避光處，備用。

蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品 南京替斯艾么中藥研究所；槲皮素、山奈酚標(biāo)準(zhǔn)品 中國藥品生物制品鑒定所出品；異鼠李素標(biāo)準(zhǔn)品 美國Biochemika公司；無水甲醇(色譜純)、無水乙醇、石油醚、乙酸乙酯、無水甲醇、酒石酸鉀鈉、硫酸亞鐵、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉等(均為分析純)。

1.2 儀器與設(shè)備

WFZ-2000型紫外-可見分光光度計 尤尼柯儀器有限公司；SK-1快速混勻器 常州國華電器有限公司；KS-150D超聲波清洗器 寧波科生儀器廠；UV-2550紫外分光光度計 日本島津公司；DZF-6050真空干燥箱 鄄城華魯儀器有限公司；RE52CS旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 浙江舟山市定海區(qū)海源儀器廠；電子分析天平、容量瓶、錐形瓶、三口燒瓶、具塞試管、酒精計、索氏提取器等。

1.3 方法

1.3.1 礦物元素提取及測定[3-4]

分別準(zhǔn)確稱取樣品1.0g，置于凱氏燒瓶中進(jìn)行消解，加入10mL濃硝酸和2mL濃高氯酸，靜置過夜。第2天用酒精燈加熱，由低溫向高溫逐漸升溫至微沸并保持，待繼棕色煙霧后的白煙散盡，樣品發(fā)白近干后加入2mL濃硝酸和2.5mL蒸餾水來溶解，完全轉(zhuǎn)移至25mL容量瓶中，用原子吸收分光光度法進(jìn)行礦物元素含量測定。

1.3.2 有效成分提取[5]

分別稱取樣品約3.0g，用濾紙把藥品包扎好放入索氏提取器的玻璃筒內(nèi)，倒入適量無水乙醚進(jìn)行加熱回流去脂，去脂之后，將藥品干燥，待用。

各稱取樣品1.0g于錐形瓶中放入10mL 80%乙醇溶液進(jìn)行超聲提取30min，減壓過濾收集醇提取液并重復(fù)提取三次，濾液定容于50mL容量瓶中，并分別注明醇提取液1、2，待測。

各稱取樣品1.0g于錐形瓶中放入20mL蒸餾水進(jìn)行超聲提取50min，減壓過濾收集水提取液并重復(fù)提取兩次，濾液定容于50mL容量瓶中，并分別注明水提取物1、2，待測。

1.3.3 多酚含量測定[6-7]

采用酒石酸亞鐵比色法測定多酚含量，分別取醇提取液1.0mL放入25mL容量瓶中，加水4.0mL，加酒石酸亞鐵溶液5.0mL，搖勻，再加入pH7. 5的磷酸緩沖液稀釋至刻度，以80%乙醇代替供試液加入同樣試劑作空白，以1cm比色皿，在540nm處測吸光度(A)。

式中：1.957為上述操作條件下，當(dāng)吸光度等于0.5時，每毫升供試液中多酚類的毫克數(shù)。

1.3.4 黃酮含量測定[8-10]

用微量移液器分別醇提取液100μL定容于5mL比色管中，取4mL 440μg/mL的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液于50mL容量瓶中，搖勻，制成35.2μg/mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液，10min后，以1cm石英比色皿，在波長360nm處測吸光度(A)。按下述公式計算黃酮類物質(zhì)含量：

式中：A樣、A標(biāo)分別表示樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度；c樣、c標(biāo)分別表示樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)量濃度；C為經(jīng)紫外-可見光光度法的單組分定量法所得濃度/mg。

1.3.5 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

吸取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL置于10mL容量瓶中，分別加蒸餾水1mL，再加5%苯酚溶液1.6mL，于快速混勻器上充分混合，然后加濃硫酸7mL，再于快速混勻器上充分混合，放置10min，加蒸餾水至刻度，混勻，置沸水浴恒溫15min。取出冷卻至室溫。另取10mL容量瓶加蒸餾水1mL，5g/100mL苯酚溶液1.6mL，濃硫酸7mL作空白對照品，在波長為490nm處測定吸光度，并制備葡萄糖濃度-吸光度工作曲線。

1.3.6 多糖含量測定[11-13]

采用苯酚-硫酸比色法測定多糖含量。分別取水提取液0.5mL按標(biāo)準(zhǔn)曲線下方法操作測定樣液吸光度(A)。由標(biāo)準(zhǔn)曲線查得樣液中葡萄糖含量。

式中：m為樣品質(zhì)量/g；ρ為樣品液葡萄糖質(zhì)量濃度/(μg/mL)；V為樣液體積/mL。

2 結(jié)果與分析

2.1 樣品中礦物元素的含量

表1 樣品中礦物元素含量Table 1 Contents of seven macro-mineral elements in Chinese fringe tree young leaf tea and flower tea

由表1可知，“糯米茶”和“糯米花茶”中含有多種無機(jī)微量元素，其中Ca、Mg、Fe、Zn的含量分別為6193.50、344.50、136.00、43.85μg/g，及4165.75、329.75、218.225、49.60μg/g。相比較來看，“糯米茶”中Fe含量較高，“糯米花茶”中Mg、Ca含量較高，尤其是Ca含量比“糯米茶”高出許多。

2.2 樣品中茶多酚的含量

表2 樣品中茶多酚含量Table 2 Polyphenol contents in Chinese fringe tree young leaf tea and flower tea

由表2可知，“糯米茶”和“糯米花茶”的茶多酚含量分別為301.7、227.0mg/g，其中“糯米茶”的茶多酚含量相對較高。

2.3 樣品中黃酮的含量

圖1 蘆丁、樣品的紫外吸收光譜Fig.1 UV absorption spectra of rutin standard and the ethanol extracts from Chinese fringe tree young leaf tea and flower tea

由1.3.4節(jié)方法及圖1可計算得“糯米茶”和“糯米花茶”的黃酮含量分別為47.925mg/g、62.025mg/g，其糯米花茶黃酮含量相對較多。紫外光譜的主要吸收峰為峰帶Ⅱ(220～280nm)，峰帶Ⅰ(300～400nm)較弱，初步判斷花和芽中黃酮可能為異黃酮、二氫黃酮或二氫黃酮醇，且圖1中峰帶Ⅱ較蘆丁有明顯的紅移，說明在7-位及4＇-位引入CH3等助色團(tuán)的可能性較大，結(jié)構(gòu)的表征和活性研究正在進(jìn)行中。

2.4 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線及樣品中多糖含量計算

圖2 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.2 Standard curve for polysaccharide quantification

測定結(jié)果，“糯米茶”和“糯米花茶”的多糖含量分別為64.674、71.341mg/g，“糯米花茶”中的多糖含量較高。

3 結(jié) 論

本實驗以超聲波提取為主要提取方法，對“糯米茶”和“糯米花茶”的有效成分含量進(jìn)行研究，結(jié)果表明“糯米茶”和“糯米花茶”的多酚含量分別為301.7、227.0mg/g，多酚有活潑的羥基氧，能夠在多酚氧化酶作用下，起到清除自由基和消除自由基毒性的作用，具有抗脂質(zhì)氧化、延緩機(jī)體衰老、預(yù)防心血管疾病、防癌、抗輻射等生物活性功能[6]，其中黃酮含量分別為47.925、62.025mg/g，黃酮類化合物具有抗過敏、降血壓、抗炎、抗菌、抗腫瘤、抗病毒、保肝和降血脂等活性，在食品和醫(yī)學(xué)上得到廣泛應(yīng)用，是一種很有發(fā)展前景的天然抗氧化劑原料[15]，其進(jìn)一步的分離純化和活性研究正在進(jìn)行中。

“糯米茶”和“糯米花茶”的多糖含量分別為64.674、71.341mg/g，尤其“糯米花茶”的粗多糖含量較高。多糖是茶葉中極具開發(fā)價值的一種生理活性物質(zhì)?，F(xiàn)代藥理研究證實，多糖具有降血糖、降血脂、降血壓及減慢心率、耐缺氧的作用，同時多糖在抗凝血、防血栓形成、保護(hù)血相和增強(qiáng)人體非特異性免疫功能方面均有明顯效果[15-16]。

“糯米茶”和“糯米花茶”中含有多種礦物元素，其中Ca、Mg、Fe、Zn的含量分別為6193.50、344.50、136.00、43.85μg/g及4165.75、329.75、

218.225、49.60μg/g。相比較來看，“糯米茶”中Fe含量較高，“糯米花茶”中Mg、Ca含量較高，尤其是Ca的含量比“糯米茶”高出許多。從兩種樣品測得的數(shù)據(jù)來看，“糯米茶”和“糯米花茶”可以為人體補(bǔ)充這幾種元素的不足。

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Extraction and Determination of Mineral Elements and Bioactive Components in Chinese Fringe Tree Young Leaf Tea and Flower Tea

HU Xi-lan，JIANG Qin，YIN Fu-jun，LIU Tao
(School of Chemical Engineering, Huaihai Institute of Technology, Lianyungang 222005, China)

Ultrasonic was applied to the extraction of bioactive components in Chinese fringe tree young leaf tea and flower tea, including polyphenols, flavooids and ploysacchrides. The contents of these components and seven macro-mineral elements including Cu, Fe, Pb and so on in the two tea samples were determined using ferrous tartrate colorimetric, UV/VIS spectrophotometric, phenol-sulfuric acid cololrimetric or atomic absorption spectrophotometric methods. Chinese fringe tree young leaf tea and flower tea had polyphenol contents of 301.7 mg/g and 227.0 mg/g, flavonoid contents of 47.925 mg/g and 62.025 mg/g and polysaccharide contents of 64.674 mg/g and 71.341 mg/g, respectively. The two types of tea were both rich in mineral elements, especially Ca and Mg, of which the contents were 4165.7μg/g and 329.75μg/g in the young leaf tea and 6193.50μg/g and 344.50μg/g in the flower tea, respectively. The polyphenol content of the young leaf tea was even higher than that of the flower tea. Therefore, Chinese fringe tree young leaf tea may be a tea that has superior anti-aging benefits for human body.

Chinese fringe tree；bioactive components；extraction；determination

R284

A

1002-6630(2010)18-0112-04

2010-06-24

連云港市自然科學(xué)基金項目(CG0806)；淮海工學(xué)院引進(jìn)人才啟動基金項目(KK01060)

胡喜蘭(1961—)，女，教授，學(xué)士，研究方向為配位化學(xué)和天然藥物化學(xué)的提取及應(yīng)用。E-mail：huxilan@hhit.edu.cn