p16蛋白和p27蛋白在惡性骨腫瘤臨床病理特征及預后關系①

王貴琴

(鄭州市骨科醫院 河南 鄭州 450052)

p16蛋白和p27蛋白在惡性骨腫瘤臨床病理特征及預后關系①

王貴琴

(鄭州市骨科醫院 河南 鄭州 450052)

目的 探討在臨床上應用中p16和p27蛋白表現在惡性骨腫瘤的病理特征及在腫瘤的產生、發展及預后過程中起到的作用。方法 對52例軟骨肉瘤、74例骨肉瘤,26例軟骨瘤運用免疫組織化學S-P法進行檢驗,對照檢驗結果,分別進行對比和研究分析p16蛋白在軟骨肉瘤及p27蛋白在骨肉瘤不同病理分級、臨床分段、預后分組中的表達。結果 相比軟骨瘤,體現在軟骨肉瘤組織上的p16蛋白高表達率,差異具統計學意義。相比軟骨肉瘤未復發組,其復發組體現的p16蛋白的高表達率,差異具統計學意義。瘤組織分化程度與p16蛋白高表達率有正比例關系,p16蛋白高表達率在軟骨肉瘤不同組織學分級中相比,差異提示具統計學意義。與軟骨瘤相比, p27蛋白體現在骨肉瘤組織的高表達率,差異具統計學意義。與骨肉瘤高生存組做比較,p27蛋白高表達率在低生存組體現的差異具統計學意義。p27表達與瘤組織分化程度有正比例關系,與臨床分期有負比例關系。結論 軟骨肉瘤發生、發展及不良預后的重要指標體現在p16蛋白減少或缺失,而骨肉瘤的發生、發展及不良預后的重要指標體現在p27蛋白減少或缺失,在臨床應用上有重要的影響作用。

p16蛋白 p27蛋白 免疫組化

新近發現的腫瘤抑制基因中p16、p27基因能對人類多種腫瘤及細胞系中有失活和突變作用,引起相應蛋白的表達缺失,導致腫瘤細胞的異常增殖。p16蛋白、p27蛋白的研究對于骨腫瘤的診斷、鑒別診斷和判斷預后具有廣闊的前景。在細胞周期中p16在多種腫瘤細胞周期增殖和細胞分化調控中有著突出作用,是非常重要的調節因子。p27可起到抑制細胞增殖的作用,是細胞周期的負性調節因子。我們采用免疫組織化學S-P法分別觀察在52例軟骨肉瘤和26例軟骨瘤組織中p16蛋白提示的表達情況,分析了p16蛋白與軟骨肉瘤的組織學分級及預后的相關性;在74例骨肉瘤和26例軟骨瘤組織中p27蛋白的表達情況,分析了p27蛋白與骨肉瘤的組織學分級、臨床分期及預后的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

52例普通型軟骨肉瘤及74例骨肉瘤選自2003年1月至2009年12月我院骨科存檔標本蠟塊,其中軟骨肉瘤男性30例,女性22例,男女比1.4∶1,年齡29～61歲,平均年齡41歲。骨肉瘤男性46例,女性28例,男女比例1.6∶1,年齡12～59歲,平均年齡21歲,最高峰是11～21歲41例。病理組織分級:參照Evans等組織學分級標準,軟骨肉瘤可分為3級。術后5年未復發者39例(75.0%),復發者13例(25.0% )。骨肉瘤參照Price分級法;參照Enneking標準劃分臨床分期,低生存組為<1年生存期的患者,共計13例(17.6%),>3年者為高生存組,29例(39.2%)。隨訪全部病例。對照研究組選用26例軟骨瘤。

表1 p16蛋白在軟骨肉瘤和軟骨瘤組織中的表達

表2 p16蛋白在軟骨肉瘤預后分組中的表達

1.2 實驗方法

運用免疫組織化學鏈霉素親和生物素蛋白—過氧化物酶法(S-P法)對標本切片(厚度4μm)染色,p16和p27蛋白試劑盒均按說明書使用。陰性對照是利用磷酸鹽緩沖液(PBS)取代一抗;陽性對照則里用已確診的結腸癌陽性切片。

表3 p27蛋白在骨肉瘤和軟骨瘤組織中的表達

1.3 結果評定

p16和p27蛋白免疫組織化學染色陽性反應為棕黃色和(或)棕褐色顆粒,p16蛋白定位于細胞核或(和)細胞漿上,p27蛋白主要定位于細胞核上,自每張切片選10個高倍視野(×400)觀察陽性細胞與細胞總數的比例關系,無表達為陰性(-);表達≤50%為陽性(+);>51%為強陽性(++)。

1.4 統計學處理

用Fishers精確概率計算法確定概率,用等級相關分析確認二者的相關性,數據處理則使用SPSS 10.0統計學軟件包。

2 結果

2.1 p16蛋白表達、軟骨瘤與軟骨肉瘤的關系及軟骨肉瘤組織學分級情況

軟骨肉瘤與軟骨瘤相比,p16高表達率差異具統計學意義(P<0.01),而p16高表達率與瘤組織分化程度呈正比例關系(P<0.1),不同組織學分級間p27高表達率相比(Ⅰ級與Ⅱ級、Ⅱ級與Ⅲ級、Ⅰ級與Ⅲ級)差異均有統計學意義(P<0.05),見表1。

2.2 p16蛋白與軟骨肉瘤預后關系的表達

p16蛋白強陽性率差異在復發組和未復發組比較上具統計學意義,見表2。p27蛋白體現在骨肉瘤的高表達率與骨軟骨瘤比較的差異體現統計學意義,而p27表達與瘤組織分化程度有正比例關系,與臨床分期有負比例關系,見表3。

3 討論

對細胞G1/S期轉換有關鍵調控作用的基因p16蛋白,可抑制細胞周期蛋白依賴性激酶(CDK)4和6[1]。p16蛋白的失活引起G1期縮短,細胞周期加速,特別是DNA在沒有修復前過早地進入S期,已經是細胞惡性轉化的關鍵[2]。與腫瘤細胞分化及預后有關的p16,在研究結果中顯示,軟骨肉瘤p16蛋白高表達率明顯低于軟骨瘤(P<0.01),由此推斷p16蛋白的減少或缺失與軟骨肉瘤發生有關。軟骨肉瘤p16高表達率與瘤組織分化程度呈正相關(P<0.01),且在不同組織學分級間p16高表達率相比差異均有統計學意義(P<0.05),說明p16表達對軟骨肉瘤組織學分級有指導作用,即p16表達率越低,分化程度越差[3]。在不同預后分組中,未復發組與復發組之間強陽性率相比差異有統計學意義(P<0.05),復發組高表達率明顯低于未復發組。由此可見,p16對軟骨肉瘤的不良預后有重要影響,即表達越低,預后越差。p27蛋白是一個熱穩定蛋白,其基因位于人染色體12p13處,是高度保守的蛋白分子。p27作為細胞周期的負性調控因子,通過阻止細胞G1/S期的轉換,抑制細胞增殖,使細胞有機會修復損傷的DNA或糾正DNA復制中產生的錯誤。p27有誘導細胞調亡的作用,用腺病毒載體轉染乳腺癌細胞系MDAMB-231,可使p27過表達,導致細胞調亡明顯增加;同時,p27參與對細胞分化的調控,可誘導未成熟細胞進行分化。近來研究表明[4],增生組織和癌組織中的p27表達顯著低于正常組織,其表達水平與腫瘤的惡性程度、侵襲性的強弱有關,并與細胞增殖標志呈顯著負相關。本研究結果顯示,骨肉瘤p27蛋白高表達率明顯低于軟骨瘤(P<0.01),由此推斷p27蛋白的減少或缺失與骨肉瘤發生有關。瘤組織分化程度越差,p27表達率越低;且p27表達率隨著臨床分期的增高而降低降低。在不同預后分組中,生存期<1年與生存期>3年之間強陽性率相比差異有統計學意義(P<0.01),低生存期組高表達率明顯低于高生存期組[5]。綜上所述,作為細胞周期的調節因子的p16蛋白,對軟骨肉瘤中有重要作用,且對其的發生、發展及預后具有重要臨床意義。p27作為細胞周期的負性調控因子,p27蛋白減少或缺失是骨肉瘤的發生、發展及不良預后的重要指標,對臨床具有重要的指導意義。

[1]施宗高,周曉燕,許良中,等.乳腺癌組織中NOEY2基因的mRNA表達及其與臨床病理的關系[J].中華腫瘤雜志,2002,24(5):475～478.

[2]陳紅,姚吉龍,卞度宏,等.p27在子宮內膜癌組織中的表達及其臨床意義[J].現代婦產科進展,2001,10(3):176～177.

[3]郭成學.p16蛋白與軟骨肉瘤臨床病理特征及預后關系[J].中原醫刊,2006(18).

[4]徐錦屏,章永川,陳漢松,等.p16和p27蛋白在乳腺癌的表達及其意義[J].腫瘤防治雜志,2009(2).

[5]王茁,王憲智,王原,等.卵巢癌p16蛋白的表達及其意義[J].腫瘤研究與臨床,2009(3).

R5

A

1674-0742(2010)07(c)-0066-02

王貴琴:女,大專,1966～,河南鄭州,主治醫師,研究方向:骨科病理或骨腫瘤病理,工作單位:鄭州市骨科醫院。

2010-05-10