標本經液化濃縮后抗酸染色檢測分枝桿菌

王 勇,黃昕明,郭宇航,王曉紅

(1.佳木斯大學附屬第一醫院,黑龍江 佳木斯 154003;2.佳木斯婦幼保健院,黑龍江 佳木斯 154003)

近年來 ,由于免疫缺陷患者逐年增多、臨床激素、免疫抑制劑應用廣泛等原因使分枝桿菌條件感染病例呈明顯上升趨勢。雖然目前針對分枝桿菌病診斷的新方法層出不窮。但經典的抗酸染色仍然是醫生診斷以結核為主的分枝桿菌病的重要依據。目前實驗室常規采用痰涂片抗酸染色方法雖簡便易行,但該方法最小檢出菌量要達到10,000條 /mL以上,陽性檢出率較低,大大影響了分枝桿菌病的臨床病原學診斷。為提高病原學診斷陽性率,在日常工作中我們對準備進行抗酸染色的臨床痰標本在預處理方法上進行了改進,取得了很好的效果,明顯提高臨床痰標本分枝桿菌的陽性檢出率。

1 材料和方法

1.1 材料

濃縮液 (PEG6000、 NaCl等成分 )、提取液 (EDTA、 Tris-HCl、NP40等成分)、10%次氯酸鈉購自廣州中山大學達安生物診斷公司;抗酸染色液購自臺灣 BASO公司;高速臺式離心機系上海安亭科學儀器公司產品。

1.2 方法

患者清晨漱口后咳深部痰于有蓋無菌試管內。在無菌試管內加入 2～ 3倍量10%次氯酸鈉,室溫放置30min,期間每10分鐘振蕩混勻,混勻數次后痰液即可充分液化。將液化后痰液加入等量 DNA濃縮液震蕩混勻13,000rmp離心 10min,棄去上清液,在沉淀中加入 DNA提取液40μL,震蕩混勻后55℃加熱10min,10000rmp離心5min。吸去上清液,取沉淀涂片,干燥后按常規方法行抗酸染色。對照組采用常規方法:即痰標本直接涂片行抗酸染色作為方法學對照。

2 結果

來自臨床各科室痰標本58份 ,實驗組抗酸染色陽性19例(19/58),占總數32.76%;對照組抗酸染色陽性14例(14/58),占總數 24.14%;其中實驗組 19例陽性標本包括對照組全部14例陽性標本。兩組結果具有明顯差異。

3 討論

近年來針對分枝桿菌診斷的新方法層出不窮,尤其是分子生物學方法快速敏感,但對于資源有限情況下分枝桿菌檢測仍主要依賴于傳統的抗酸染色檢查,尤其是結核為代表的分枝桿菌感染的“重災區”往往是哪些貧窮、落后的農村地區,如何利用現有農村醫療資源,建立快速、敏感檢測分枝桿菌感染的方法意義更為重大。原有常規抗酸染色雖簡單易行,但最小檢出菌量要達到 10,000條 /mL以上,約有 24～61%的 HIV/AIDS結核患者為抗酸染色陰性肺結核。因此,提高抗酸染色陽性檢出率異常重要。從本實驗對原有方法改進中,作為液化劑而使用的次氯酸鈉具有滅菌特性可以起到很好的生物安全防護作用。符合 SARS流行后國家衛生組織對醫療機構生物安全的要求。濃縮液的使用,可以最大限度的使標本中抗酸桿菌濃集,提取液與痰沉淀物混勻后55℃加熱10min不會損傷分枝桿菌,但可以破壞痰中雜菌,減少雜質對染色的干擾。這些都有利于陽性檢出率的提高。