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毛細管凝膠電泳紫外檢測核酸靈敏度

2010-04-12 00:00:00連冬生張相年賀寶霞趙樹進韓麗萍
分析化學 2010年8期

摘 要 以已知濃度的DNA Marker為標準樣品,常規壓力進樣,電動進樣,柱頭場放大及聯合使用基質場放大和柱頭場放大等方法進行CGEUV分析,對比不同進樣方法的檢測靈敏度。以聚合酶鏈式反應(PCR)后的高鹽DNA樣品驗證方法的可靠性。當DNA樣品稀釋達40萬倍,與電動進樣和壓力進樣相比,在對峰形和峰寬無明顯影響下,將電動進樣的時間延至420 s, 三羥甲基氨基甲烷鹽酸緩沖液(E)濃度降低至1.%, 柱頭場放大靈敏度分別提高了約28和90倍; 聯合使用基質場放大和柱頭場放大后,靈敏度分別提高3760和12000倍。DNA的檢出限達0.1 μg/L(/N=3, CGEFAIUV)。同時以本法分析PCR后的DNA產物獲得了極高的靈敏度(分別比普通的壓力進樣和電動進樣提高0477倍和3334倍)。本實驗采用基質場放大和柱頭場放大聯用, 方法操作簡單,靈敏度高,適用于高鹽微量的DNA樣品分析。

關鍵詞 脫氧核糖核酸; 毛細管電泳; 基質場放大; 柱頭場放大; 聚合酶鏈式反應產物

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