溶膠凝膠固定化酶流動注射化學發(fā)光法測定人體血清中的膽固醇
2010-04-12 00:00:00李德英孫芳邱建丁汪敬武
分析化學 2010年2期
摘 要 采用溶膠凝膠技術分別固定了膽固醇脂酶和膽固醇氧化酶，制成固定化酶柱；人體血清中膽固醇脂在膽固醇脂酶的催化作用下生成膽固醇，膽固醇在膽固醇氧化酶的催化作用下被氧化產(chǎn)生H2O2，將其與魯米諾發(fā)生耦合的化學發(fā)光反應，在模擬酶血紅蛋白的催化作用下產(chǎn)生較強的化學發(fā)光。結合流動注射技術，建立了溶膠凝膠固定化酶流動注射化學發(fā)光法測定膽固醇的新方法。實驗發(fā)現(xiàn)，發(fā)光強度與膽固醇的濃度在一定范圍內(nèi)呈良好的線性關系，總膽固醇的線性范圍為1.01×10－ 6~2.02×10－4 mol/L(r=0.9975)； 檢出限為7.5×10－ 7 mol/L；游離膽固醇的線性范圍為5.0×10－ 8~2.18×10－5 mol/L(r=0.9991)； 檢出限為5.0×10－9 mol/L。用生化分析儀(東芝TBA-120FR)與本方法進行對照，兩種方法無顯著性差異。本方法已應用于臨床血清樣品中膽固醇的檢測。
關鍵詞 溶膠凝膠； 固定化酶柱； 流動注射； 化學發(fā)光； 膽固醇； 血紅蛋白
