雌激素受體β在子宮內膜中的表達

趙 棟 黃詩穎 翁 雷 孫 靜

(1.同濟大學附屬上海市第一婦嬰保健院婦科,上海 200040;2.復旦大學藥學院藥理教研室,上海 201203)

子宮內膜異位癥是一種常見的復雜婦科疾病,發病機制尚不明確,主要臨床表現是疼痛及不孕。子宮內膜異位癥在正常婦女中發病率為0.5%～5%,而在患不孕癥的婦女中高達25%～45%[1]。有研究[2]表明子宮內膜的基質和腺體細胞主要表達雌激素受體α(ER-α),而對于子宮內膜是否表達雌激素受體β(ER-β),研究結果并不一致。本研究應用RT-PCR以及免疫組化法測定ERβ在異位內膜及在位內膜的表達情況。

1 資料與方法

1.1 標本來源 收集2008年7月—2008年12月同濟大學附屬上海市第一婦嬰保健院進行手術治療的子宮內膜異位癥患者異位及其在位子宮內膜標本,常規4%甲醛固定,石蠟包埋。收集異位內膜標本15例,對應增生期在位內膜12例,分泌期在位內膜3例,患者年齡23～41歲,平均年齡35歲。選擇同期因宮頸病變行全子宮切除患者的子宮內膜15

例作為對照,增生期10例,分泌期5例,患者年齡36～49歲,平均年齡45歲。所有患者月經周期規律,術前半年之內未接受激素治療,術前簽署知情同意書。

1.2 逆轉錄聚合酶鏈式擴增 采用Trizol法制備總RNA,制備的RNA樣品用核酸定量分析儀檢測OD260、OD260/OD280的值,并計算 RNA產量。所用Trizol試劑購自GIBCO公司,逆轉錄試劑盒購自Promega公司。

1.3 免疫組織化學染色 主要步驟包括5μm切片,脫蠟水化,抗原修復,封閉內源性過氧化物酶。一抗為小鼠抗人ERb(Serotec,UK),二抗為連接生物素的馬抗小鼠抗體(Vector Lab,CA),非特異性的小鼠IgG作為陰性對照,已知陽性的卵巢組織作為陽性對照。

2 結 果

2.1 逆轉錄聚合酶鏈式擴增 組織的OD260/OD280在1.8～2.0,RNA的純度高,同時得到總RNA的濃度;紫外燈下28S、18S帶清晰,5S帶模糊,RNA的完整性好。在位及異位內膜組織中ER-βmRNA陽性表達率均為100%。

2.2 免疫組化 ER-β在內膜異位癥患者的異位內膜病灶,在位內膜及正常對照組的在位內膜的基質細胞和腺上皮細胞均不表達,僅有部分血管內皮細胞表達ER-β(圖 1)。

圖1 A正常卵巢組織(陽性對照)B對照組子宮內膜C子宮內膜異位病灶D內膜異位癥患者的在位子宮內膜

3 討 論

子宮內膜異位癥是一種雌激素依賴性的疾病,雌激素可以刺激異位內膜細胞的增殖,是內膜異位病灶形成的必要條件之一[3]。ER-β激動劑在小鼠子宮內膜異位癥模型中可有效治療子宮內膜異位癥,使得研究者對于ER-β在子宮內膜細胞中的作用產生極大的興趣。因為雌激素作用絕大多數是通過受體介導的,所以要了解這種新的雌激素受體在子宮內膜異位癥的作用,首先必需了解ER-β在子宮內膜組織中的分布情況。有關ER-β在子宮內膜中及內膜異位病灶的表達,雖有相關報道,但結果不一[4-5]。分析其原因主要是試驗試劑及試驗方法的不同。有些學者用流式細胞技術檢測雌激素受體,首先細胞在制備過程中生化特性可能發生改變;其次,流式細胞技術主要用于檢測細胞表面抗原,而且雌激素受體為核蛋白,抗體要與細胞結合,必須破壞核膜,或者用注射器將抗體注入細胞核內同時固定,所以用流式細胞技術研究核蛋白在方法上面值得商榷。

本研究用RT-PCR法探測15例子宮內膜異位癥患者的在位及異位內膜以及15例非內膜異位癥患者的子宮內膜,結果顯示內膜異位癥組及對照組均表達ER-αmRNA。免疫組化法測定正常組及對照組子宮內膜蛋白質分布結果顯示子宮內膜基質細胞及腺上皮細胞的細胞核中均無ER-β蛋白表達,只有血管內皮細胞表達ER-β。本試驗采用小鼠抗人的單克隆抗體具有極高的特異性,使用非特異獨特型抗體作為陰性對照有效地排除假陽性,結果直觀、真實、可靠。

特異性ER-β激動劑在小鼠模型中可有效治療包括子宮內膜異位癥在內的一些炎性疾病,目前正在進行人類的臨床研究。而子宮內膜及異位內膜的細胞核中很可能無ER-β存在,所以,ER-β激動劑對于子宮內膜異位癥的治療作用可能為非受體依賴性的。它可能是通過影響細胞增殖、自然凋亡、免疫系統、新生血管形成、或者下丘腦-垂體-卵巢軸等起的作用,不過這還需要進一步研究加以驗證。

1 Ozkan S,Murk W,and A rici A.Endometriosis and infertility:epidemiology and evidence-based treatments[J].Ann Acad Sci,2008,1127:92-100.

2 Brandenberger AW,Lebovic DI,Tee DK,et al.,Oestrogen recep tor(ER)-alpha and ER-beta isoforms in normal endometrial and endometriosis-derived stromal cells[J].Mol Hum Reprod,1999,5(7):651-655.

3 Lebovic,DI,Mueller MD,Taylor RN,Immunobiology of end ometriosis[J].Fertil Steril,2001,75(1):1-10.

4 王海霞,解其貴,趙俊紅,等.子宮內膜癌雌激素受體α、β亞型和孕激素受體m RNA表達與臨床病理的關系[J].中國臨床醫學,2008,15(6):863-865.

5 Lecce G.,Meduri G,A ncelin M,et al.,Presence of estrogen receptor beta in the human endometrium through the cycle:expression in glandular,stromal,and vascular cells[J].JClin End ocrinol Metab,2001,86(3):1379-1386.