副豬嗜血桿菌病的危害及綜合防控措施

胡明明，張艷禾，王春來

（中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所、獸醫生物技術國家重點實驗室，黑龍江哈爾濱 150001）

副豬嗜血桿菌病又稱“革拉瑟氏病”，是由副豬嗜血桿菌(HPS)引起的一種以豬多發性漿膜炎、關節炎、呼吸困難、高熱及高死亡率為特征的傳染性疾病。隨著規模化、集約化養豬業的發展，副豬嗜血桿菌病由過去散發的傳染病變為大面積流行，給養豬業帶來了巨大經濟損失。我們將從近年來副豬嗜血桿菌病的病原學、流行病學、臨床癥狀與病理變化、分子生物學以及臨床診斷和防治等方面的研究進展，進而多方面清晰地認識、了解該疾病發病原因及其產生的危害，并以此為現實生產中副豬嗜血桿菌的治療和綜合防控提供借鑒意義，避免此病的流行和暴發。

一、病原特征

（一）形態學及生理生化特性1910年，德國科學家Glasser 首次描述了漿液性纖維素性胸膜炎、心包炎以及腦膜炎患豬的漿液性分泌物中，存在一種革蘭氏陰性桿菌，但這種病原菌直到1922年才由Sehermer和Ehrlieh首次分離并鑒定。HPS屬于需氧或兼性厭氧菌革蘭氏陰性菌，非溶血性、不運動、生長需要特定的V因子(煙酰胺腺嘌呤二核苷酸，NAD)，最適生長溫度為35℃～37℃，pH7.6～7.8。在顯微鏡下呈多形態，新分離的菌株呈球桿狀、雙球狀或短鏈狀，在陳舊培養物中呈長桿狀和絲狀。HPS通常有莢膜，但體外培養時易受影響，可變為無莢膜菌。脲酶和氧化酶試驗陰性，接觸酶試驗陽性，可發酵葡萄糖、蔗糖、果糖、半乳糖、D-核糖和麥芽糖等。Morozumi 和Hiramune等研究了不同溫度條件下HPS在生理鹽水和PBS（磷酸鹽緩沖溶液）中的存活能力，當HPS存在于生理鹽水或PBS中42℃1 h、37℃2 h、25℃8 h，均檢測不到HPS活菌。由此看來，HPS生長條件要求苛刻并且分離困難，在外界環境中的死亡速度非常快，因此對該菌培養和保存的要求非常高，這給研究者帶來極大的困難。

（二）流行病學副豬嗜血桿菌是常規飼養豬群上呼吸道的一種常在菌，可在鼻腔、扁桃體和氣管前段分離到，而不見任何臨床癥狀。當環境發生變化時或引起免疫抑制的因素存在時，會侵入機體并引起嚴重的全身性疾病。本病的主要傳染源為病豬、臨床康復的豬和隱性感染豬；主要的傳播途徑為呼吸道和消化道，即病菌通過飛沫隨呼吸運動而進入健康的仔豬體內，或通過污染飼料和飲水而經消化道侵入體內，在機體抗病力降低的情況下，繁殖、產毒和致病。HPS有很強的宿主特異性，只感染豬，主要在斷奶前后和保育舍階段發病，感染高峰通常見于保育期的4～6周，發病率可達40%，嚴重時死亡率可達50%。

HPS常與豬的幾種重要病原體如豬流感病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒及豬圓環病毒引起混合感染。周小兵等(2006)研究結果表明，保育舍內流行豬繁殖與呼吸綜合征病毒及豬圓環病毒時，副豬嗜血桿菌導致的死亡率會增高，即豬繁殖與呼吸綜合征病毒及豬圓環病毒的感染會破壞肺泡巨噬細胞，還會引起鼻腔黏膜炎癥,從而破壞非特異性呼吸道防御機制，因而使豬容易發生繼發性感染。HPS一年四季均可發病，但有研究表明冬季HPS的感染率和致死率都遠遠大于夏季，這是由于冬季寒冷的氣候對免疫系統影響較大，致使豬只對HPS的抵抗力降低。另有報道，本病的發生常與長途運輸、疲勞和其他應激因素等誘因有關。

二、分子生物學

（一）分型雖然研究HPS病原菌流行病學對于該疾病的防治具有重要意義，但是HPS病原菌通常有較多種系遺傳變異，因此對病原菌的鑒定和分型就變得更為迫切，因此精確確定其流行病學的特征，可為疾病的診斷和防治提供準確的理論依據。目前，HPS分型方法包括血清型和基因型。

副豬嗜血桿菌的血清型復雜多樣，按瓊脂擴散血清分型方法(KRG)，可將副豬嗜血桿菌分為1～15個血清型（國際公認的血清分型標準菌株）。在全世界范圍內，各國流行的血清型不盡相同，我國分離株主要是血清4、5、12、13型，在日本和澳大利亞廣泛流行的血清型為5型，而危害美國豬場的HPS血清型為4型。在鑒定的15個血清型中毒力存在明顯的差別，血清型1、5、10、12、13、14型毒力最強，患豬在4 d內歸于死亡或處于瀕死狀態；血清2、4、15型為中等毒力，患豬通常不死亡但出現多發性漿膜炎；血清 3、6、7、8、9、11型感染豬后沒有明顯的臨床癥狀，這些菌株歸類為無毒力菌株。另有20%以上的分離株血清型不可定。這可能是由于一些分離株不能表達足夠多的特異性，或者可能還存在另外的一些血清型。

基因分型方法克服了血清學分型的局限性，且靈敏度高，操作簡單，為HPS流行病學研究、菌株鑒定，以及了解散發及流行規律、致病機制等方面提供了有力的研究手段。基因分型包括MEE，REF，ERIC等技術。Blackall等1997年用多位點酶電泳(MEE)研究了40個澳大利亞HPS分離株及8個血清型的過氧化氫酶等17種酶的電泳圖譜，獲得了34種電泳型，經聚類分析，除一個分離株的過氧化氫酶電泳酶譜呈現單一條帶外(代表了一個種或亞種)，其余的33種電泳酶譜聚類為兩組：第一組包括40個分離株中的血清型4、5 型、部分13型、2個不能分型的菌株，以及2個血清5型的標準菌株；第二組中的血清型范圍較廣，包括40個菌株中的血清1、2、7、9、10 型和部分13型，以及標準株的1、2、3、4、8、9型。結果表明HPS 的遺傳差異性很大，菌群中不止一個種或亞種，而且同一血清型菌株的電泳酶譜不定相同(如血清13 型分離株)。該研究證實了不同的HPS之間存在著多態性。Smart等運用限制性核酸內切酶指紋(REF)技術研究HPS在SPF豬和常規飼養豬的流行與分布，發現大多SPF豬帶有相同REF的HPS，而常規飼養豬帶菌的REF則存在很大差異，僅有一個菌株為所有試驗豬共有。在感染了地方性動物傳染病的豬群中，患病豬系統組織的HPS分離株的REF指紋相似性程度很高，這些研究結果顯示REF可以作為一種非常有效的分型手段。重復序列PCR（rep-PCR）也是一種研究流行病學的有效手段，Rafiee等2000年用腸桿菌科基因間重復一致序列（ERIC）-PCR技術研究了HPS的15種血清型，澳大利亞的14個分離株：3個突發HPS傳染病豬群的12個分離株以及2個其他豬場分離株的ERIC—PCR指紋。結果顯示：15種血清型均呈現了唯一獨特的ERIC-PCR指紋，且重復性高；3個突發HPS傳染病豬群的12個分離株擁有共同的ERICPCR指紋，并且明顯不同于15種血清型和來自其他豬場的2個分離株的ERIC-PCR指紋，表明3個豬場HPS病的暴發來自同一病原菌在比較和描述菌株特性方面，較血清學方法更有效。

（二）致病機理及毒力因子副豬嗜血桿菌感染后侵入全身的機理還不清楚。Miniats研究表明，免疫動物的抗體主要針對外膜蛋白（OMP），OMP有很強的免疫原性。Ruiz等2001年通過分析從健康仔豬與患病豬分離的HPS OMP也表明外膜蛋白與HPS的毒力有確切關系。但OMP是否是主要的免疫原尚需進一步研究。另外，神經氨酸酶是巴斯德菌科細菌的一種潛在毒力因子，該酶可通過清除宿主細胞的碳水化合物，從而發揮細菌毒力。除了對營養方面的影響以外，神經氨酸酶還介導清除與宿主細胞糖原結合的唾液酸，從而暴露出細菌定居或侵入宿主細胞所需的受體，并通過降低粘蛋白的粘性來干擾宿主的防御系統。Lichtensteiger 等(1997)研究結果顯示，90%以上的田間分離株有神經氨酸酶，由此推斷神經氨酸酶也可能為HPS的一個毒力因子。鐵是細菌生長不可缺少的元素，但是由于宿主糖蛋白、轉鐵蛋白和乳鐵蛋白的絡合作用，細菌外環境的鐵含量很少。Charlnad等(1995)的研究結果證明，豬血清中存在轉鐵蛋白受體，HPS利用自身的轉鐵結合蛋白（tbp）提供生長必需的鐵離子，推斷tbp在HPS感染宿主動物引起發病過程中起重要作用。還有研究表明Fhu蛋白也是體液免疫反應的目標之一，且表達水平并不受鐵的供應情況的限制，由此推斷Fhu蛋白也是副豬嗜血桿菌的毒力因子之一。這些研究結果拓展了研究者對HPS病原本質更深入的認識，為今后該疾病的診斷和藥物治療新靶點開發新型疫苗提供了可能性。

三、臨床癥狀及病理變化

（一）臨床癥狀2～8周齡仔豬感染發病可呈典型癥狀，育肥豬感染多見慢性經過，哺乳母豬也可感染發病。在臨床上常見以下兩種病癥：急性型：許多豬只突然同時發病，往往首先發生于膘情良好的豬，體溫40.5℃～42℃，食欲下降或不食，并伴有咳嗽、呼吸困難等癥狀。鼻孔有粘液性及漿液性分泌物。關節腫脹、跛行、步態僵硬，同時出現身體顫抖，共濟失調，可視黏膜發紺，在1～4 d內死亡。個別豬只不表現任何癥狀而突然死亡，也有的轉化為亞急性或慢性型。亞急性型和慢性型：常由急性型轉化而來，病豬表現被毛粗亂，反復發熱，咳嗽、呼吸困難、耳邊緣發紫。有的腹下和四肢末梢等皮膚有紫紅色斑塊，體表發紺，常見眼瞼、耳翼浮腫，跛行和呈犬坐姿勢或不愛運動。

（二）剖檢變化剖檢特征主要表現為漿液性、纖維素性、多發性漿膜炎和多發性關節炎，胸腔內有大量的淡紅色液體及纖維素性滲出物凝塊。肺表面覆蓋有大量的纖維素性滲出物并與胸壁粘連，多數為間質性肺炎，部分有對稱性肉樣變化，肺水腫、腹膜炎，常表現為化膿性或纖維性腹膜炎，腹腔積液或與內臟器官粘連；心包炎、心包積液，心包內常有奶酪樣甚至豆腐渣樣滲出物，使外膜與心臟粘連在一起，形成“絨毛心”，心肌有出血點；全身淋巴結腫大，呈暗紅色，切面呈大理石樣花紋；脾臟腫大，有出血性梗死；關節腫大，關節腔有漿液性滲出性炎癥。

（三）病理組織學觀察氣管以及肺支氣管可觀察到的黏膜上皮脫落，黏膜下水腫伴有出血, 中性粒細胞浸潤，同樣的病變也可在小腸和大腸中觀察到。另外，在小腸中還有大量的酸性粒細胞浸潤；在心臟、脾臟以及大腦中也可發現有中性粒細胞浸潤；在心臟中還可觀察到部分心肌纖維斷裂，有的心肌細胞發生顆粒變性或水泡變性。肝臟呈灶狀壞死，有的肝細胞腫大，灶狀壞死同樣見于大腦和腎臟中，在大腦中壞死灶周圍的神經原細胞嚴重腫脹，膠質細胞增生，出現衛星現象和嗜神經原現象。

四、診斷與防治

（一）診斷通過病史調查、流行病學、臨床癥狀及剖檢變化等可做出初步診斷，確診還需要進一步實驗室檢驗。首先，采取病死豬的肺、心血、肝、腎、淋巴結及腹水、胸水等病料進行分離、培養、鑒定病原。本菌不發生溶血現象，并進一步進行生化鑒定，本菌可分解蔗糖和尿素，不分解乳糖、甘露醇和麥芽糖，對葡萄糖發酵不穩定；醋酸鉛試驗呈陰性，硝酸鹽還原試驗呈陽性。通過血清學診斷方法，如瓊脂擴散試驗、補體結合試驗和間接血凝試驗，具有反應靈敏、方便快捷的特點，適合于臨床應用。血清學檢測可作為豬群感染與否的診斷，但不能確診豬群是否發病。因為多數豬群中都具有抗副豬嗜血桿菌的抗體，但抗體滴度較低，均不表現臨床癥狀。此病確診還需借助聚合酶鏈式反應(PCR)，該技術可大大提高副豬嗜血桿菌感染診斷的靈敏性。Blackall用多點酶電泳(MEE)、Smart用內切酶指紋法、Rafiee和Ruiz用PCR法對本菌基因分型，其結果顯示該方法對所有的菌株都能作出鑒定。因副豬嗜血桿菌是豬上呼吸道的一種常在菌，常在健康豬的上呼吸道可分離出該菌。臨床癥狀又與豬鏈球菌病、豬傳染性胸膜肺炎、豬丹毒、豬肺疫、仔豬副傷寒及氣喘病等相似，且易與這些疫病混合感染和繼發感染。故確診該病要綜合運用上述診斷方法。

（二）預防副豬嗜血桿菌病的綜合預防方案包括免疫接種、藥物預防和加強飼養管理。

1.免疫接種。疫苗的使用是預防副豬嗜血桿菌造成損失的最為有效的方法之一，商品苗和自家苗可以防制副豬嗜血桿菌傳染病。然而多種血清型和一定量非分型菌株的存在,影響了滅活疫苗有效的交叉保護。Miniats等(1991)以兩株高毒力副豬嗜血桿菌所制備的菌苗誘發了可以抵抗同源和異源攻擊的交叉保護。相反地，低毒力菌株的菌苗只能抵抗同源攻擊。因此推斷細菌的毒力可能與其免疫保護力呈正相關，但使用活性強毒菌株存在安全等問題。

目前，哈爾濱獸醫研究所，正在對HPS滅活疫苗進行研究，對免疫后母豬生產的仔豬ELISA檢測結果顯示，仔豬特異性抗體水平顯著的高于對照組；并且免疫母豬所產的仔豬被免疫后，攻毒時不產生臨床癥狀或全身性的損害；相反，未免疫母豬所產的仔豬免疫后，攻毒時表現出中樞神經癥狀和跛行。因此免疫母豬的作用是非常關鍵。

2．藥物預防。萬遂如等在實際生產中總結了很有效的藥物預防方案，每噸飼料中加入300 g氟苯尼考、200 g阿莫西林，連續喂14 d。妊娠母豬每噸飼糧中加入利高霉素1 kg，阿莫西林200 g，分娩前后各喂7 d。哺乳仔豬分別在1日齡、7日齡肌肉注射頭孢噻呋0.2 ml，21日齡注射0.4 ml。仔豬每噸飼糧中加入80%支原凈100 g、強力霉素150 g，于斷奶前后各喂7 d，同時配合每噸水中加阿莫西林150 g，連飲14 d。另外可在飲水中加一些抗應激的藥物如維生素C等，可以增強預防效果，可有效防止本病的發生。

（三）治療發生疫情時，要及時隔離病豬，病死豬作無害化處理，控制好傳染源，以免疫情擴散。在發病初期采取非腸道給藥途徑對整個豬群用大量抗菌素進行預防，對有臨床癥狀的豬只要適當加大用量，以保證藥物及時滲透到腦脊髓液及關節中。可選用頭孢氨芐、阿莫西林、氨芐西林等抗菌藥每隔6～8 h進行肌肉注射，并配合地塞米松增強效果。但由于副豬嗜血桿菌的血清型多，且不同菌株的抗藥性不同，所以最好對引起病癥的病原體做藥物敏感試驗，采用敏感藥物可以快速有效的控制疫病在豬群中蔓延，而且可以避免盲目用藥引起的細菌變異以及經濟損失。另外，豬場要按照科學的免疫程序做好豬瘟、偽狂犬病、藍耳病、豬肺疫、豬丹毒、豬傳染性胸膜肺炎及氣喘病等疫病的免疫接種，使豬群常年處于良好的免疫狀態，也可有效地防止副豬嗜血桿菌病在豬場的繼發感染。

五、展望

目前，副豬嗜血桿菌感染已由原先的零星散發變為大規模的暴發流行，對養豬業的危害正日益加重。隨著副豬嗜血桿菌的診斷，流行病學等方面已取得了重大成就，研究者可以快速，準確的掌握特定豬場中病原的流行病學等相關信息，但是HPS是一種機會致病菌，只在與其他病毒或細菌協同時才會致病，因此制定必要的免疫接種、藥物預防同時還要配合以優良的管理措施, 防控其他病原體，完全可以預防豬群感染副豬嗜血桿菌在豬場中的廣泛流行。今后，在確定毒力因子、闡述其致病機理以及獲得保護性免疫的機制、以及研制廣譜的疫苗等方面都還需要研究工作者進行深入研究。

（略）