中遠紅外線對荷瘤鼠免疫功能的影響

李電剛,王淑湘,馬小茹,韓玉澤,陶佳南,佟春玲,王 杰,侯麗然,冷莉莉

(佳木斯大學基礎醫學院病理生理學教研室,黑龍江 佳木斯 154007)

近年來,各國醫學家們在實驗和臨床研究做的大量工作證明,中遠紅外線可治愈或延長癌癥病人的生命[1,2]。本實驗通過中遠紅外線對荷瘤(S— 180和 H— 22肝癌)小鼠的照射,測定小鼠的非特異性與特異性免疫的功能狀態,探討中遠紅外線具有提高機體免疫功能作用的程度。

1 材料與方法

1.1 材料

實驗動物:昆明種小白鼠 ,體重 (20± 2)g,雌雄不拘 ,由中科院上海藥研所、哈市實驗動物研究所、哈醫大和佳木斯大學醫學院動物室提供。

1.2 方法

1.2.1 實驗分組

Ⅰ組為陰性對照組;Ⅱ組為陽性對照組;Ⅲ組為 S-180和 H-22荷瘤鼠治療觀察組。

1.2.2 小鼠耳腫試驗

在用中遠紅外線波長7～ 10μm;照射距離:20cm;照射時間:每日兩次,每次30min,14d為一個療程。用二甲苯0.01mL涂小鼠右耳內側 ,致炎 30min后,脫頸處死,剪下雙耳,用9mm直徑的打孔器,打取雙耳對稱部位的耳片,用1/萬感量的電子天平秤重量,計算雙耳對稱耳片的重量差值,即為耳腫脹率。

1.2.3 小鼠足墊腫脹試驗

經改良,即在中遠紅外線照射的第9天,每鼠右足墊皮下注射108/mL ISRBC0.5mL。免疫4d后再同量 SRBC進行左足墊皮下注射。在免疫注射的前與后24h,用游標卡尺分別測定右左足墊的厚度,兩足墊厚度的差值,即為足墊腫脹率。

1.2.4 小鼠血清 LZM含量的測定

采用平板法。取小鼠眼球血液分離血清,用生理鹽水稀釋成10、20、50及100μ g/mL濃度的標準 LZM,加到 1%瓊脂(含微球菌)平板相應孔內 ,中心孔加生理鹽水。平板置37℃溫箱內溫育18～ 24h。用卡尺測量 LZM的溶菌環直徑 (以 cm表示),參照各孔對應 LZM的濃度,在對數坐標紙上以縱坐標為 LZM濃度;橫坐標代表溶菌環直徑(cm),繪制成 LZM標準曲線。以待檢血清代替標準 LZM加入上述瓊脂平板孔內,經溫育后,測定溶菌環直徑,在標準曲線查出其相應LZM的含量。

1.2.5 胸腺、脾臟的重量及其指數的測定

先稱重小鼠體重,然后測定胸腺、脾臟的重量,求出胸腺 /體重、脾臟 /體重的比值,在計算出胸腺指數與脾指數。

1.2.6 小鼠外周血的 ANAE陽性細胞百分率的測定

取小鼠眼球血制成推片血膜,自然干燥后,按原法略加改良進行染色,即將復染色液改為2%孔雀綠色液。染色后在光學顯微鏡下,計算 LC內呈現紅色顆粒的 AN AE陽性細胞的百分率。

1.2.7 小鼠血清溶血素(HA)的測定

在連續照射的第 9天,取4%SRBC0.2mL給實驗鼠進行腹腔內注射。免疫后第5天,無菌操作取小鼠眼血并分離血清。取 1:800血清 1mL、5%SRBC0.5mL與 1:10豚鼠血清 (補體 )1mL,在試管內混勻,經37℃ 水浴 30min,冰浴停止反應。1500轉 /分 ,離心 10min。取上清 1mL加都氏試劑3mL,混勻后10min用 721型分光光度計,于波長540mm讀取 OD值,計算半數 SRBC溶血值(CH50);另設不加血清的空白對照管,作為比色時調零的基準;半數溶血管取5%SRBC0.25mL加入都氏試劑3.75mL,其余同上。

1.2.8 小鼠脾臟溶血空斑形成細胞(PEC)的測定

按史美浩方法進行取小鼠脾細胞懸液。0.2%SRBC與補體各 1mL,在試管內混均后,置 37℃水浴箱內溫育 1h,3000轉 /分 ,離心 5min,取上清液 ,用 721型分光光度計 ,波長413mm測光度讀數(OD值)。

1.2.9 小鼠外周血 TLC亞群的測定

取小鼠眼球血,肝素抗凝。去抗凝血 100 μL,加入 FITCCD3(CD4、CD8)McAb100μL,混勻 ,置 4℃冰箱作用 30min;加入溶血劑2mL,混勻 ,室溫放置 10min。1200轉 /分 ,離心 5min,棄去上清。沉淀物中加入 PBS2mL,混勻、同上離心后棄上清;加入固定液0.6mL,混勻 ,4℃放置 30min后上機計數。

2 結果

2.1 中遠紅外線的抗炎作用

見表 1。

表1 中遠紅外線對小鼠急性與慢性炎癥反應的影響 (±s,n=6)

表1 中遠紅外線對小鼠急性與慢性炎癥反應的影響 (±s,n=6)

注:1、與Ⅰ組比較*P ＜ 0.05,△P＞ 0.05;2、與Ⅱ 組比較*P ＜0.01,5P＞ 0.05。

組別(n=6) 耳腫脹率(mg) 足墊腫脹率(mm)Ⅰ .陰性對照組 2.8± 0.12 0.32± 0.14Ⅱ .陽性對照組 2.5± 0.10△ 0.46± 0.05*Ⅲ .治療觀察組 2.6± 0.0015 0.22± 0.05*

2.2 中遠紅外線對小鼠非特異性免疫功能的影響

見表 2。

表2 中遠紅外線對小鼠非特異性免疫功能的作用 (±s,n=6)

表2 中遠紅外線對小鼠非特異性免疫功能的作用 (±s,n=6)

注:①與Ⅰ組比較*P＜0.01,P＞ 0.05;②與Ⅱ 組比較*P＜0.01。

組別 血清 LZM(mg/mL) 胸腺指數 脾指數 外周血 AN AE±C(%)Ⅰ71.0±3.57Ⅱ29.30± 0.84* 0.72 0.98 65.3± 3.01*49.21±0.79Ⅲ48.51± 1.14△* 0.60 0.90 70.3± 2.94△*

2.3中遠紅外線對小鼠特異性體液免疫功能的影響

見表3。

表3 中遠紅外線對小鼠 HA與 PEC的作用 (±s,n=6)

表3 中遠紅外線對小鼠 HA與 PEC的作用 (±s,n=6)

注:與Ⅰ組比較*P＜0.05,P＞ 0.05;與Ⅱ組比較△ P＜0.05。

組別 HA(CH50) PFC(OD)Ⅰ87.73± 9.7 0.538± 0.03Ⅱ86.40± 10.15* 0.537± 0.02*Ⅲ88.40± 6.9△* 0.533± 0.02△*

3 討論

急性與慢性炎癥反應是許多疾病的重要病理表現。因此,防止炎癥反應是控制許多疾病發生與發展的重要措施[3,4]。本實驗揭示中遠紅外線照射對荷瘤鼠的急性炎癥反應無影響,而對慢性炎癥側有較強的抑制作用,這可能是中遠紅外線對機體慢性炎癥疾病有較好療效之所在。機體非特異性與特異性體液與細胞免疫功能對機體的抗感染、抗腫瘤,同種反應性與遲發超敏反應的發生、發展與結局具有重要作用[1,5]。本實驗證實中遠紅外線能增強小鼠血清 LZM含量,說明該儀對 M合成與分泌 LZM有促進作用,連同中遠紅外線增加外周血 ANAE陽性細胞與 TLC亞群中 CD3、CD4、減少 CD8TLC等作用 ,表明中遠紅外線對小鼠的細胞免疫具有增強作用,推測中遠紅外線在抗胞內寄生物的感染、抗腫瘤、移植排斥反應與遲發型超敏反應的發生、發展與結局等具有臨床實際應用價值。

[1]徐景智,盧愛榮,楊景發,等.紅外輻射對機體免疫功能的影響[J].紅外技術,2000,22(3):58-62

[2]吳本王介.遠紅外治療儀的動物實驗研究 [J].中國醫療器械信息,2001,7(2):36-37

[3]何勇,李志新,崔友.中遠紅外線對荷瘤鼠大腦 β—內啡肽、腦啡肽、強啡肽水平影響的實驗研究 [J].黑龍江醫藥科學,2001,24(3):42-43

[4]楊景發,劉玉穎,李同鍇.中紅外與短波紅光綜合治療儀的臨床應用與實驗研究 [J].紅外技術,2002,24(3):56-58

[5]吳志毅,楊維青,胡民,等.紅光、紅外線協同輻射對荷瘤機體免疫功能的影響 [J].中國臨床康復,2002,6(16):2386-2393