戊四氮致癲癇大鼠肝損傷的電鏡觀察

王芳芳,王淑秋,劉君星,劉 蕾,馬小茹,梁衍峰

(佳木斯大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院,黑龍江 佳木斯 154007)

戊四氮慢性點(diǎn)燃模型適合于對(duì)癲癇病理、傳播機(jī)制和癲癇灶形成機(jī)制以及篩選抗癲癇藥物的研究,但是在致癲癇的過程中,是否對(duì)其它臟器有損害,人們對(duì)這點(diǎn)關(guān)注不多,有人在光鏡下觀察了戊四氮致癇后大鼠的肝腎損傷[1,2],本研究擬在電鏡下觀察戊四氮致癇后大鼠肝臟超微結(jié)構(gòu)的變化。

1 材料與方法

1.1 材料

戊四氮(PTZ):美國(guó) Sigma公司。大鼠:Wistar雄性健康大鼠 ,3～ 5月齡 ,體重 (200± 20)g,共 16只 ,分為癲癇模型組和正常對(duì)照組,每組8只。電鏡:日本電子株式會(huì)社 JEM-1200EX。

1.2 方法

①PTZ點(diǎn)燃模型的制備:PTZ用前以生理鹽水新鮮配制成溶液(10g/L)。癲癇模型組用 PTZ亞驚厥劑量(35mg/kg)腹腔注射,每日 1次,持續(xù) 28d;正常對(duì)照組以等容生理鹽水代替 PTZ腹腔注射。大鼠癲癇發(fā)作評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)[3]:0級(jí),無行為上的發(fā)作反應(yīng);Ⅰ級(jí),節(jié)律性點(diǎn)頭或頭面部抽動(dòng);Ⅱ級(jí),陣攣性咀嚼或點(diǎn)頭甩尾;Ⅲ級(jí),頭部顫搐加前肢陣攣性抽搐;Ⅳ級(jí):袋鼠姿勢(shì)或多肢抽動(dòng);Ⅴ級(jí),全面性持續(xù)強(qiáng)直-陣攣發(fā)作。每天對(duì)每只大鼠在 PTZ注射后觀察30～ 60min,并記錄癲癇發(fā)作的級(jí)別、發(fā)作潛伏期(s)(即注入 PTZ到首次癇性發(fā)作之間經(jīng)歷的時(shí)間)及發(fā)作持續(xù)時(shí)間(s),凡出現(xiàn)連續(xù) 5dⅡ級(jí)以上癇性發(fā)作的大鼠為達(dá)到點(diǎn)燃標(biāo)準(zhǔn)。②電鏡觀察:實(shí)驗(yàn)動(dòng)物麻醉后斷頭處死,在低溫條件下迅速取肝臟,用于電鏡檢測(cè)。

圖2 癲癇肝臟a

圖1 正常肝臟

2 結(jié)果

2.1 行為學(xué)觀察結(jié)果

癲癇組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)過程中均有顯示連續(xù)多次Ⅱ～Ⅴ級(jí)驚厥發(fā)作,全部達(dá)到點(diǎn)燃標(biāo)準(zhǔn)。癲癇組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在注射戊四氮后2～ 6min內(nèi)即開始發(fā)作,首先出現(xiàn)瞼肌陣攣、點(diǎn)頭運(yùn)動(dòng)、尾巴翹起,嚴(yán)重者繼之雙前肢抬起陣攣,隨后出現(xiàn)四肢抽搐,部分動(dòng)物出現(xiàn)翻滾,每次發(fā)作持續(xù) 1～ 30min,常反復(fù)發(fā)作。

2.2 電鏡觀察結(jié)果

正常對(duì)照組肝臟結(jié)構(gòu)正常(圖1),癲癇組肝臟發(fā)生明顯改變,細(xì)胞核染色質(zhì)邊集(圖2),線粒體變圓(圖3)。

圖3 癲癇肝臟 b

3 討論

用于癲癇研究的動(dòng)物模型種類繁多,曾用于癲癇研究的動(dòng)物模型約有100余種。依據(jù)制備方法不同可分為化學(xué)藥物模型、電刺激模型等;依據(jù)發(fā)作情況可分為癇性發(fā)作模型 (急性 )和癲癇模型(慢性);按發(fā)作表現(xiàn)可分為急性單純部分發(fā)作模型、慢性單純部分發(fā)作模型、復(fù)雜部分發(fā)作模型、癲癇持續(xù)狀態(tài)模型、全身強(qiáng)直陣攣發(fā)作模型、失神發(fā)作模型、難治性癲癇模型;按主要致病機(jī)制可分為免疫性癲癇模型、遺傳性癲癇模型等。其中慢性點(diǎn)燃模型和急性癲癇持續(xù)狀態(tài)(Status Epilepticus,SE)模型都屬于 M EL模型 ,在癲癇研究種廣泛應(yīng)用。有關(guān)資料顯示雄性成年 Wistar大鼠具有對(duì)癲癇點(diǎn)燃的先天易感性,是制作點(diǎn)燃癲癇模型的常選動(dòng)物[4]。化學(xué)點(diǎn)燃,是重復(fù)給予動(dòng)物某種化學(xué)致癇劑(閾下劑量),戊四氮是最常用的化學(xué)點(diǎn)燃藥物,可使動(dòng)物出現(xiàn)癲癇敏感性增高并持續(xù)存在[5],最后形成癲癇通常用于制備大鼠慢性點(diǎn)燃模型。慢性點(diǎn)燃模型適合于對(duì)癲癇病理、傳播機(jī)制和癲癇灶形成機(jī)制以及篩選抗癲癇藥物的研究。但人們只關(guān)注戊四氮致癇引起海馬神經(jīng)元的損傷,在探討其致癇機(jī)制和藥物治療機(jī)制的研究中忽略了戊四氮引起其它臟器損傷的作用。我們的研究結(jié)果證實(shí),戊四氮致大鼠癲癇的同時(shí)伴有肝臟的損傷。但戊四氮導(dǎo)致的肝損傷作用,是否對(duì)其致癇作用有關(guān)系尚待進(jìn)一步研究。

[1]楊艷華.丙戊酸鈉-苯妥英鈉-拉莫三嗪對(duì)戊四氮點(diǎn)燃大鼠肝腎細(xì)胞影響的研究.河北醫(yī)科大學(xué),碩士論文,2008

[2]李國(guó)麗.丙戊酸鈉-卡馬西平和托吡酯對(duì)戊四氮點(diǎn)燃大鼠模型肝臟和腎臟影響的研究.河北醫(yī)科大學(xué),碩士論文,2008

[3]Erdtmann-Vourliotis M,Riechert U,Mayer P,et al.Pentyenetetrazole(PT Z)-induced c-fos ex pression in the hippocampus of kindled rats in suppressed by concomitant treatment with naloxone[J].Brain Res,1998,792(2):299-308

[4]Eskazan E,Onat FY,Alter R,et,al.Resistance to propagafion of amygdaloid kindling seizures in rats with genetic absence epilepsy。[J].Epilepsia,2002,43(10):1115-1119

[5]Urca G,Frenk H.Intracerebral opiates block the epileptic effect of intracerebroventricular(ICV)leucine-enkephalin[J].Brain Res,1983,259(1):103-110