關(guān)于免疫組化染色方法的鑒別及病理應(yīng)用

朱曉萍,王 曉,王彩霞,王桂梅

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院病理科,黑龍江 佳木斯 154003)

在臨床實(shí)踐工作中,通過觀察我們發(fā)現(xiàn) SABC、SP法和Envision、ElivisionTM、MaxvisionTM法染色對比都有自己的優(yōu)缺點(diǎn),其中 MaxvisionTM法操作更簡便、更快捷,并可以達(dá)到滿意的效果,是一種較為理想的免疫組化染色方法。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇我院2008～2009年間胃癌標(biāo)本免疫組化染色染色P53、 Ki67、 P糖蛋白、 TS陽性中各 30例 ,每例 2 μm切片 4張 ,撈于多聚賴氨酸處理過的玻片上,分別用 SABC、SP法和Envision、ElivisionTM、MaxvisionTM法進(jìn)行免疫組化染色,所用試劑 P糖蛋白、TS、SP試劑盒、ElivisionTM、MaxvisionTM法試劑盒、PBS(磷酸鹽 pH7.2～ 7.4緩沖液)、檸檬酸(pH6.0)、EDTA(pH9.0)、DAB均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司,Envision試劑盒購自上海長島生物技術(shù)有限公司,SABC試劑盒購自北京博士德生物公司。

1.2 方法

將所有切片置于不銹鋼切片架上脫蠟入水,染 P53、Ki67、P糖蛋白時(shí)將切片置于 pH6.0的檸檬酸溶液中,染 TS時(shí)將切片置于 pH9.0的 EDTA溶液中,需高溫高壓修復(fù),自然冷卻后,自來水沖洗,PBS洗3min×3,然后作如下操作:

① Envision分別滴加一抗 (P53、Ki67、P糖蛋白、TS)室溫 60min或 4℃過夜 ,PBS洗 5min× 3,滴加 Envision試劑 ,室溫 30min,PBS洗 3min× 3。② ElivisionTM分別滴加一抗(P53、 Ki67、 P糖蛋白、 TS)室溫 60min或 4℃過夜,PBS洗5min× 3,滴加聚合物增強(qiáng)劑 ,室溫 30minPBS洗 3min× 3,滴加鼠或兔聚合物,室溫 30min,PBS洗 3min× 3。③ MaxvisionTM分別滴加一抗 (P53、Ki67、P糖蛋白、TS)室溫60min或 4℃過夜 ,PBS洗 5min× 3,滴加即用型 MaxvisionTM試劑,室溫15min,PBS洗3min×3。④SABC法:滴加5%牛血清白蛋白,室溫 10min,甩去多余液體,分別滴加一抗 (P53、Ki67、 P糖蛋白、TS)室溫 60min,PBS洗 5min× 3,滴加生物化二抗,室溫20min,滴加試劑 SABC,室溫30minPBS洗3min×3。⑤ SP法:滴加過氧化物酶阻斷溶液,室溫10min,PBS洗3min×3,甩去 PBS液,滴加非免疫性動(dòng)物血清,室溫 10min,甩去多余液體,分別滴加(P53、Ki67、P糖蛋白、TS)室溫下孵育60min或4℃過夜,PBS洗5min×3,滴加生物化二抗,室溫10min,PBS洗3min×3,滴加鏈霉素抗生素-過氧化物酶溶液 ,室溫 10min,PBS洗 3min× 3。所有切片 DAB顯色 ,流水洗,蘇木素復(fù)染、脫水、透明、封固、鏡檢。

1.3 結(jié)果判斷

P53、Ki67為核著色,P糖蛋白、TS為細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)著色,結(jié)果分析按常規(guī)病理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)[1]每張切片連續(xù)取 10各高倍視野,采用 HMIAS-2000醫(yī)學(xué)分析統(tǒng)計(jì)陽性細(xì)胞數(shù)。

2 結(jié)果

同例比較 ElivisionTM和 MaxvisionTM的陽性細(xì)胞數(shù)與 Envision差異不顯著,前者背景比后者清晰(圖1、圖2),E-livisionTM、MaxvisionTM和 Envision的陽性細(xì)胞數(shù)顯著高于 SABC和 SP法,而且背景明顯比后者干凈。

圖1 胃癌組織 Ki67MaxvisionTM法

圖2 胃癌組織 P糖蛋白 ElivisionTM法

3 討論

ElivisionTM和 Envision染色法是利用螯合物技術(shù)將多個(gè)抗鼠或抗兔 IgG分子與辣根過氧化物酶的螯合物直接與一抗結(jié)合,但兩者試驗(yàn)時(shí)間較長,陽性細(xì)胞數(shù)與 MaxvisionTM法無區(qū)別,且 ElivisionTM法比 Envision法背景清晰,試劑價(jià)格相對于 MaxvisionTM法偏低。MaxvisionTM是根據(jù)聚合物技術(shù)把辣根過氧化物酶(HRP)與抗鼠或抗兔IgG分子結(jié)合在多聚物上形成多聚物分子,具有三個(gè)特點(diǎn):首先、在切片加上一抗后,第二抗體標(biāo)記多聚螯合物酶(HRP)的復(fù)合物與一抗體結(jié)合在多聚螯合物上有大量的HRP分子,使抗原信號有了顯著的放大[2]故其敏感性較SABC、SP法高。其次、由于多聚物在人體內(nèi)不存在,又不使用生物素,從而避免了由于生物素引起的非特異的背景著色,使其顯色背景比 SABC、SP法清晰。再次、辣根過氧化物酶與二抗結(jié)合在多聚物上替代了傳統(tǒng)六法二抗、三抗,減少了實(shí)驗(yàn)步驟 ,且試劑孵育時(shí)間短 ,只需15min,使得免疫組化方法更簡便,試驗(yàn)時(shí)間比 SABC、SP法大為縮短。MaxvisionTM法操作簡便,速度更快,更加敏感,背景更干凈且陽性細(xì)胞數(shù)高于 SABC、SP法 ,可達(dá)到滿意的效果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:ElivisionTM染色法更加適合患者相對較少的基層醫(yī)院。MaxvisionTM法是一種較為理想的免疫組化染色方法,更加適合我院的實(shí)際工作。

[1]趙再秋,翟梅娟,趙賀秋,等.免疫組化在前列腺癌診斷中的作用[J].實(shí)用腫瘤學(xué)雜志,2006,20(3):199-200

[2]李玉松,王文勇,黃高升,等.病理學(xué)技術(shù) [M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2000,421