原發性肝細胞癌生物學行為與HBV感染及survivin表達的關系

陳江 崔彬

原發性肝癌(Primary liver cancer, PLC)居我國癌癥發病率的第二位，其中90%以上為肝細胞癌(HCC)，HBV感染與HCC的發生密切相關，而凋亡抑制基因survivin在HCC的發生發展中也起重要作用。因此就HBV感染后HCC的生物學行為以及與survivin蛋白表達的關系進行研究，探討HBV感染后HCC的生物學行為。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 取2000年2月～2006年5月肝穿并經病理證實臨床和病理資料完整的HCC標本61例。患者均未經過任何抗腫瘤治療，男性52例，女性9例，年齡28～76歲，中位年齡45.6歲。病理分級按Edmondson分級法分級，I級3例，II級16例，III級40例，IV級2例。按全國肝癌病理協作組提出的HCC的大體分類方法，結節型14例，巨塊型46例，彌漫型1例。47例AFP增高，29例GGT和ALT增高，B超及CT檢查證實18例伴有門靜脈癌栓。

1.2 方法與試劑 人Survivin(FL-142)單抗及S-P試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術有限公司，免疫組化采用S-P方法，操作步驟如下:石蠟切片脫蠟至水;3%H2O2室溫孵育5～10min;微波抗原修復;正常山羊血清封閉，室溫15min，滴加Survivin-抗原工作液，冰箱內4ΟC過夜; PBS沖洗，滴加第二代生物素，標記二抗工作液，室溫20min; PBS沖洗，滴加第二代辣根酶標記鏈霉卵白素工作液，室溫20min;PBS沖洗，DAB顯色，自來水沖洗，蘇木素復染，封片。已知的乳腺癌切片為陽對照，PBS代替一抗作為空白對照。

1.3 結果判斷 采用雙盲法，觀察切片至少5個上個具有代表性高倍視野，不少于1000個細胞，對免疫結果進行評估。Survivin陽性表達定位于細胞質，呈棕黃色。根據常規Survivin陽性細胞在同類細胞中所占比例分四個等級。陽性細胞＜10%為“-”，10%～25%“+”，26%～50%為“++”，＞51%為“+++”。

1.4 統計學處理 根據實驗資料的性質，對所得資料進行x2檢驗，P＜0.05認為有統計學意義。

2 結果

2.1 HBV感染及survivin表達與HCC生物學行為的關系HBV感染與HCC病例的年齡、腫瘤直經以及遠處轉移的發生無統計學差異，與HCC的Edmondson分級、門靜脈癌栓的形成、AFP值的升高肝內轉移的發生以及GGT的升高有統計學意義(P＜0.05)。survivin的表達與AFP增高及腫瘤直徑大小及酶學改變正相關(P＜0.05)；與Edmondson分級及肝內轉移的有無門脈癌栓形成無關(見表1)。

2.2 HBV感染與survivin蛋白表達的關系 survivin蛋白在HCC組織的陽性表達主要在細胞質中,呈棕黃色顆粒。39例HBV感染HCCsurvivin蛋白的陽性表達率為68.23%(27/39)，強陽性表率(陽性細胞＞51%)為40%(12/39);22例非HBV感染HCC組織survivin蛋白的表達率為31.81%(7／22)，強陽性表率為(13.6%)3/22;兩者分別有顯著性差異(x2＝21.97,P＜0.05)。

表1 HBV感染與HCC生物學行為關系

3 討論

HBV持續感染引起的炎癥、壞死及再生可能導致細胞突變的概率增加，HBV感染也可以使一些抑癌基因失活，導致肝細胞的細胞周期失控，使其向“永生化”發展[1]。本實驗結果表明，HBV感染與HCC的Edmondson分級、門靜脈癌栓的形成、AFP增高、肝內轉移、及酶學改變顯著相關，提示HBV感染是肝癌的主要致癌因素并影響其生物學行為。我國肝癌患者中,HBV流行率明顯高于對照人群,在HBV感染誘發原發性肝癌的過程中,有多種機制共同發揮作用。病毒DNA整合入肝細胞基因組后可激活一系列癌基因，并已發現HBV的X蛋白起著重要的作用[1]。Survivin是新發現的凋亡抑制蛋白家族成員之一，研究表明survivin在肝細胞癌中的陽性表達率為31%～70%[2]。本實驗結果表明在原發性肝細胞癌中HBV感染(HBsAg陽性)與survivin陽性表達顯著正相關(69.23%),而HBsAg陰性者survivin陽性表達率為31.81%。提示在肝細胞癌發生發展過程中，HBV感染可以誘發Survivin過表達。survivin與乙型肝炎病毒X蛋白結合蛋白(HBXIP)結合，形成survivin-HBXIP復合物，該復合物與半胱氨酸酶-9(caspase-9)前體結合，阻止其與凋亡蛋白激活因子1(APAF1)發生募集反應，從而抑制由線粒體/細胞色素C通路引發的細胞凋亡，使基因受損的肝細胞死亡障礙，引發癌變[3]。HBV感染后，乙型肝炎病毒X蛋白結合蛋白(HBXIP)與survivin共同作用在HCC的發生發展中有著重要的作用。

[1] 孫燕,趙平.臨床腫瘤學進展[M].北京:中國協和醫科大學出版社,2005:613-614.

[2] Ikeguchi M,Ueda T,satakani T,et al.Expression of survivin messenger RNA correlates with poor prognosis patients with hepatocellular carcinoma[J].Diagn Mol Pathol,2002,11:33-40.

[3] Marusawa H,Matsuzawa S,Welsh K,et al.HBXIP functions as a cofactor of survivin in apoptosis suppression[J].EMBO J,2003,22(11):2729-2740.