反相高效液相色譜法測定心脈通分散片中葛根素的含量

心脈通分散片由當歸、決明子、鉤藤、牛膝、丹參、葛根、槐花、毛冬青、夏枯草、三七十味藥組成，功能活血化瘀、通脈養心、降壓降脂，用于高血壓、高脂血癥等。葛根為本品中主藥之一，其所含葛根素具有降低血壓、擴張冠脈、增加腦血流量及降低血管阻力等作用，因此我們采用高效液相色譜法測定本品中有效成分葛根素的含量，經方法學驗證，表明本方法簡便、快速、準確，可用于控制成品的質量。

1 儀器與試藥

島津高效液相色譜儀(包括SCL-10A VP控制器、LC-10AT VP泵、SPD-10A VP檢測器、SIL-10AD VP自動進樣器、DGU-14A脫氣機、CTO-10AS VP柱溫箱、CLASS-VP工作站)；KQ-250型超聲波清洗器(昆山超聲儀器有限公司)；Mettler M3電子天平；TG328A電光分析天平(上海天平儀器廠)；Lambda 12紫外分光光度計(美國P.E.公司)。

葛根素對照品(供含量測定用)，購于中國藥品生物制品檢定所，批號：752-200108。心脈通分散片，自制。甲醇為色譜純，水為重蒸水。

2 方法與結果[1-5]

2.1 色譜條件

色譜柱：Hypersil BDS C18 5 μm，ID 4.6 mm×200 mm；流動相：甲醇-水(23∶77)；流速1.0 ml/min；檢測波長：250 nm；柱溫：30℃；進樣量：5 μl。

2.2 對照品溶液的制備

取葛根素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 ml含65 μg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

取本品，研細，取約1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 ml，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率40kHz)45分鐘，取出，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，取續濾液，即得。

2.4 標準曲線的繪制

取葛根素對照品約8.5 mg，精密稱定，置50 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，從中分別精密吸取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 ml置10 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，從中分別精密吸取5 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積對進樣量進行線性回歸，得回歸方程為：y=20099+4758765x，r=0.9999。結果表明葛根素進樣量在0.08528～0.5117 μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

2.5 精密度試驗

精密吸取葛根素對照品5 μl注入液相色譜儀，記錄峰面積，重復測定6次，結果RSD為0.31%。

2.6 供試品溶液穩定性試驗

取供試品溶液，于0、1、2、4、6、8、12小時分別精密吸取5 μl注入液相色譜儀，記錄峰面積，結果表明樣品溶液在12小時內穩定。

2.7 重復性試驗

取同一批號樣品6份，精密稱定，依法平行測定，結果平均含量為 3.0741 mg/g，RSD為0.75%。

2.8 加樣回收試驗

取已知含量的樣品6份，精密稱定，分別精密加入一定量的葛根素對照品，依法測定，計算回收率，結果見表1。

2.9 陰性干擾試驗

取陰性對照樣品按供試品溶液制備方法制備陰性對照溶液。分別取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各5μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結果在選定的色譜條件下，供試品中葛根素峰與其他組分色譜峰能達到基線分離，陰性對照對測定無干擾。見圖1～3。

2.10 樣品測定

取樣品3批，依法測定含量，結果見表2。

3 討論

3.1 樣品前處理分別對不同提取溶劑及不同超聲處理時間進行了比較，結果表明以甲醇為溶劑，超聲處理45分鐘即可基本提取完全。

3.2 本品為復方制劑，所含成分較復雜，對分離有一定影響，經實驗，確定以甲醇-水(23∶77)作為流動相，能使葛根素達到基線分離，且其他成分對測定無干擾。

3.3 本法亦可用于葛根藥材及其復方制劑的含量測定。

圖1 葛根素對照品色譜圖

圖2 供試品色譜圖

圖3 陰性對照色譜圖

表1 加樣回收試驗結果

編號稱樣量(g)樣品中含葛根素的量(mg)加入對照品的量(mg)實測值(mg)回收率(%)平均回收率(%)RSD(%)10.50111.5401.6083.13098.8820.50501.5521.5363.089100.0730.50251.5451.4683.030101.1640.50131.5411.5393.05498.3199.570.9950.50801.5621.6303.18299.3960.50161.5421.5433.07999.61

表2 樣品葛根素含量測定結果

注：表中數據為每片心脈通分散片中葛根素含量

[1]宿潔，楊曉云，吳愛英.HPLC測定天樂膠囊中葛根素含量[J]．中國臨床藥學雜志，2003，12(2)： 94-95.

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[3]廖麗云，徐小平，田晨旭，等.RP-HPLC測定單體綠原酸的含量[J].成都醫學院學報，2007,2(2)：109-111.

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