谷維素自微乳制劑的相對生物利用度研究

陳 智， 生立嵩， 田景振

（山東中醫藥大學，山東濟南 250355）

谷維素是從米糠油提取的一種維生素類藥物，其主要成分是環木菠蘿烯醇阿魏酯、2，4－亞甲基環木菠蘿醇阿魏酸酯，主要用于自主神經失調所致的胃腸、心血管神經官能癥、腦震蕩后遺癥、更年期綜合癥、月經前期緊張癥腸易激綜合癥以及治療各型心律失常［1］等。谷維素現有劑型均不能有效解決谷維素溶解度低、吸收差、生物利用度低的缺點。而自微乳化制劑則能夠解決脂溶性好，油水分配系數高的藥物的上述缺點。本實驗考察谷維素自微乳在大鼠體內的藥物動力學和生物利用度，以期為谷維素自微乳制劑的研究和開發提供依據。

1 實驗材料

1.1 實驗試劑

谷維素原料藥（浙江銀河藥業有限公司，批號060105），谷維素片（陜西云鵬制藥有限公司，批號:070202），阿魏酸鈉標準品（購自山東省藥物檢驗所，批號:0773－9809），枸櫞酸鈉（天津科密歐有限公司，批號071229）。

1.2實驗儀器

Agilent1100高效液相色譜儀:四元泵，在線脫氣機，自動進樣器，柱溫箱，二極管陣列檢測器（DAD）;Agilent ChemStation色譜工作站;電熱恒溫水浴鍋（北京科偉永鑫儀器廠）;超聲清洗器（KQ－250E型醫用，江蘇昆山市超聲儀器有限公司），HitachiUV3010紫外分光光度計（日立儀器制作所）。

1.3 實驗動物

SD大鼠，體重180～210 g（♂♀各半，山東魯元動物中心提供，動物許可證號:魯Sck20070512）。

2 方法與結果

2.1 體內方法學的建立

據文獻報道，谷維素口服進入體內后，主要轉化成為阿魏酸鈉形式，因此本部分參考相關文獻［2］建立了HPLC法測定大鼠體內的阿魏酸鈉含量，并應用于大鼠體內動力學的研究。

2.1.1 阿魏酸鈉對照品溶液的制備 精密稱取干燥至恒重的阿魏酸鈉對照品適量，以甲醇溶解成濃度為9.7 μg/mL的溶液，即得。

2.1.2 最大吸收波長的確定 取阿魏酸鈉對照溶液，在200～400 nm下全波長掃描。由掃描結果確定阿魏酸鈉溶液在甲醇中的最大吸收波長為（320±2）nm。

2.1.3 色譜條件 色譜柱:venusil XBP－C18（L）色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）;流動相∶甲醇－0.08%磷酸水溶液（50∶50）;進樣量:20 μL;檢測波長:320 nm;流速:1 mL/min;柱溫:25℃。

2.1.4 血漿樣品的提取與分離 精密吸取血漿0.2 mL至離心管中，加入3 mL乙醚，漩渦振蕩1 min，3 000 r/min離心10 min，吸取上層有機層2.5 mL置離心管中，加內標溶液20 μL，漩渦混勻，于40℃水浴中空氣流下揮干，加入流動相200 μL溶解，漩渦混勻，3 000 r/min離心10 min，精密移取上清液20 μL進行HPLC測定。

2.1.5 系統適用性實驗 取空白大鼠血漿，加入阿魏酸鈉對照品的大鼠血漿，按2.1.4項下處理，進行分析，考察確定的色譜條件理論塔板數和分離度是否達到要求。結果見圖1。

由圖1可知內標物綠原酸的保留時間為14.8 min，阿魏酸鈉的保留時間為5.4 min，內標物和樣品峰的理論塔板分別為:2 513、2 029，色譜峰與血漿中內源性雜質峰分離良好。

2.1.6 標準曲線的配制

標準溶液的配制:精密稱取阿魏酸鈉對照品適量，用甲醇配制成濃度為1.0，5.0，10.0，20.0，30.0，50.0，100.0 μg/mL的溶液，4℃保存備用。

圖1 阿魏酸鈉標準品高效液相色譜圖

內標溶液的配制:精密稱取內標物適量，用甲醇配制成濃度為50 μg/mL的內標溶液，4℃保存備用。

取空白血漿0.2 mL置帶塞離心管中，分別精密加入阿魏酸鈉對照溶液，使血漿中藥物濃度為0.5，1.0，2.0，3.0，5.0，10.0 μg/mL。按2.1.4項下操作，記錄阿魏酸鈉和內標峰面積，以阿魏酸鈉峰面積和內標峰面積的比值（f）對濃度（C）進行線性回歸，得回歸方程:Y=1.692 5X+0.129 1（R2=0.997 7），阿魏酸鈉在0.1～20 μg/mL的范圍內線性關系良好。

2.1.7 回收率實驗

2.1.7.1 方法回收率 取空白血漿按2.1.4項下操作，將阿魏酸鈉峰面積和內標峰面積的比值（f）代入標準曲線計算測得量，計算方法回收率。回收率（%）=（測得量/加入量）×100%，求得低、中、高3個質量濃度平均方法回收率（n=3）分別為100.0%，96.69%，100.4%。

2.1.7.2 萃取回收率 取空白血漿按2.1.4項下操作，進樣20 μL測得峰面積的比值（f）;另分別吸取以上三種濃度標準溶液和內標，吹干后用流動相200 μL溶解，進樣20 μL測定峰面積的比值（f′），計算萃取回收率。萃取回收率（%）=（f/f′）×100% 求得低、中、高3個質量濃度萃取回收率（n=3）分別為102.0%，100.9%，96.1%。

2.1.8 精密度實驗 吸取空白血漿按2.1.4項下操作，進樣20 μL測得峰面積的比值（f）作為指標，測定日內精密度和日間精密度。求得日內精密度RSD（n=3）為0.49%，0.65%，1.23%，日間精密度RSD（n=3）為0.79%，0.51%，0.23%。

由上述方法學考察可知，建立的分析方法準確度高，精密度好，且藥物的血漿萃取度回收率大于90%，說明血漿的提取處理方法良好。

2.2 谷維素大鼠藥時曲線濃度（AUC）的測定

2.2.1 大鼠相對生物利用度的測定 取健康SD成年大鼠18只，♂♀各半，體重（250±20）g，隨機分3組:谷維素表面活性劑膠束溶液組組，谷維素市售片劑組，谷維素自微乳膠囊組，每組6只，禁食過夜后每只大鼠按1 mg谷維素/100 g體重給藥，給藥后分別于 1，3，5，10，15，20，30，60，120，150 min，3 h，5 h，6 h，12 h，尾靜脈取血 0.5 mL。3 000 r/min 離心20 min。移取上層血漿，按2.1.4項下操作，進樣20 μL，測定血藥濃度。

大鼠給藥后，制劑中的藥物在各時間點的平均血藥濃度－經時曲線見圖2。

圖2 谷維素制劑血藥濃度

2.2.2 藥時曲線下面積和相對生物利用度的計算 使用3P87軟件進行藥物血藥濃度數據處理，以谷維素市售片劑作為參比制劑，自微乳膠囊為受試制劑，進行谷維素自微乳膠囊的相對生物利用度的研究。結果見表1。

表1 血藥濃度統計結果（n=6）

與谷維素市售片劑相比，谷維素自微乳膠囊的相對生物利用度為270.9%，由表1結果可知，自微乳制劑與市售膠囊相比，生物利用度有較大提高。

3 討論與小結

3.1 建立了以高效液相色譜方法測定測定大鼠血漿中阿魏酸鈉的含量。以綠原酸為內標采用C18色譜柱，流動相為甲醇－0.08%磷酸水溶液（50∶50），檢測波長為320 nm，血漿內源雜質不干擾樣品的測定，且阿魏酸鈉與內標物分離良好，谷維素在0.1～20 μg/mL范圍內線性關系良好，絕對回收率大于95%（n=3），相對回收率在95% ～105%之間。日內日間RSD小于5%。本方法準確可靠，適用于谷維素大鼠體內血藥濃度測定。

3.2 本研究分別給谷維素表面活性劑膠束溶液組，谷維素市售片劑組，谷維素自微乳膠囊組，測定大鼠血漿中阿魏酸鈉的濃度，考察了谷維素自微乳的生物利用度。三個組進行比較表明，谷維素自微乳組的血藥濃度有顯著提高，并且顯著提高谷維素的生物利用度。

［1］王本堅，王保林，姜新道.谷維素的臨床新用途［J］.中國臨床醫生，2004，32（3）:12－13.

［2］任志強，劉麗君，龍艾兵，等.高效液相色譜法測定血漿中阿魏酸鈉含量［J］.中國藥房，2003，14（1）:33－34.