山莨菪麝香膏質量標準研究

郭全興， 劉亞蓉， 楊鳳梅， 高占魁

（1.青海省藥品檢驗所，青海西寧 810016;2.青海寶鑒堂國藥有限公司，青海西寧 810016）

山莨菪麝香膏為青海寶鑒堂國藥有限公司（前身為青海省海北制藥廠）研制的新藥。收載于衛生部藥品標準中藥成方制劑第十三冊中。具有活血鎮痛，祛風除濕的功效。用于風濕痹痛，關節炎、類風濕關節炎，跌打損傷等癥的疼痛［1］。原部頒標準中僅有唐古特瑞香的紙層析鑒別（祖師麻甲素）和膏劑的常規檢查項。無含量測定內容。為了更全面的控制該產品的內在質量，本實驗對方中君藥唐古特瑞香進行了含量測定研究，對方中其他藥味進行了鑒別研究，并對原標準中唐古特瑞香的紙層析鑒別方法進行了修訂。試驗證明，方法簡便快捷，專屬性強，結果滿意。

1 儀器和試藥

Agilent 1100高效液相色譜儀，Agilent G1314 VWD紫外檢測器，HP化學工作站（美國Aglient公司）;CP-3800瓦里安氣相色譜儀;CP-8410全自動進樣器;FID檢測器;CP-Wax毛細管柱;電子天平（Sartorius BT224S，北京賽多力斯儀器公司）;超聲波清洗器（B2500s-MT，上海必能信超聲波清洗儀有限公司）。

祖師麻甲素對照品（批號110900-200405，含量測定用）;樟腦對照品（747-2001060;供含測）;龍腦對照品（110881-200202，供含測）;水楊酸甲酯（110707-200107）均由中國藥品生物制品檢定所提供;甲醇、乙腈為色譜純，其它試劑均為分析純;水為重蒸餾水。

山莨菪麝香膏 3批（批號:XJ630062、XJ630060、XJ630083）及有關陰性對照樣品均由青海寶鑒堂國藥有限公司提供。

2 定性鑒別

2.1 TLC法鑒別唐古特瑞香 取本品140 cm2，加乙酸乙酯30 mL，加熱回流30 min，提取液轉至分液漏斗中，用4%氫氧化鈉溶液，提取3次，每次10 mL，合并提取液，以稀鹽酸酸化至pH值1～2，再以乙酸乙酯提取3次，每次10 mL，合并提取液，濃縮至10 mL，作為供試品溶液。取祖師麻甲素對照品，加乙酸乙酯制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。另取缺唐古特瑞香的陰性對照樣品，同供試品溶液制備法制得陰性對照溶液。吸取上述3種溶液各10 μL，分別點于硅膠G薄層板 （青島海洋化工廠）上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸-乙醚（10∶1∶1∶3）為展開劑，展開，取出，晾干。噴以三氯化鐵試液，日光下檢視，3批供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。陰性對照無干擾。見圖1。

圖1 唐古特瑞香TLC鑒別圖

2.2 GC法鑒別樟腦、冰片、水楊酸甲酯［2］色譜條件與系統適用性試驗 色譜柱:CP-Wax 52 CB毛細管柱（長度30 m，內徑:0.25 mm，膜厚0.25 μm），柱溫:130 ℃，載氣氮氣:30 mL/min，檢測器:FID。

2.2.1 供試品溶液的制備 取本品橡膠膏1片（約70 cm2），除去塑料，精密量取面積，剪成條狀，置揮發油測定器中，自上端加水8 mL，再加乙酸乙酯2 mL，連接冷凝管，加熱回流提取4 h，冷至室溫，分取揮發油測定器中的乙酸乙酯層，置10 mL量瓶中，用乙酸乙酯洗滌揮發油測定器，洗液并入量瓶中，加乙酸乙酯稀釋至刻度，作為供試品溶液。

2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取樟腦對照品0.051 00 g，置5 mL量瓶中，用乙酸乙酯溶解并稀釋至刻度，作為樟腦貯備液;精密稱取龍腦對照品0.066 85 g，置5 mL量瓶中，用乙酸乙酯溶解并稀釋至刻度，作為龍腦貯備液;精密稱取水楊酸甲酯對照品1.081 62 g，置100 mL量瓶中，用乙酸乙酯溶解并稀釋至刻度，作為水楊酸甲酯貯備液。精密吸取樟腦、龍腦、水楊酸甲酯貯備液各1 mL，置10 mL量瓶中，用乙酸乙酯溶解并稀釋至刻度，作為混合對照品溶液。

2.2.3 陰性對照溶液的制備 按處方比例稱取除樟腦、龍腦、水楊酸甲酯以外的其他藥材適量，依照山莨菪麝香膏的制備工藝和供試品溶液的制備方法，制得陰性對照溶液。

測定法分別精密吸取上述3種對照品貯備液、供試品溶液、陰性對照溶液各1 μL，注入氣相色譜儀中，在上述色譜條件下測定。

結果:從圖譜上分析，3種成分在毛細管柱上可得到很好的分離，專屬性和重現性強，認為可作為山莨菪麝香膏中樟腦、冰片、水楊酸甲酯的定性鑒別方法。結果見圖2。

圖2 GC色譜圖

3 含量測定

3.1 色譜條件 色譜柱 依利特Hypersil ODS2，5 μm 4.6 mm×250 mm柱;乙腈-0.4%磷酸溶液（22∶78）為流動相;檢測波長為327 nm;理論塔板數按祖師麻甲素計算應不低于2 000。

3.2 對照品溶液的制備 精密稱取祖師麻甲素對照品適量，加甲醇制成每1 mL含11.57 μg的溶液，即得。

3.3 供試品溶液的制備 取本品1 g（批號XJ630062），精密稱定，置燒杯中，加水煎煮3次，每次80 mL，煎煮40 min，合并煎煮液，過濾，放冷，用石油醚（60～90℃）洗滌2次，每次30 mL，水液蒸干，殘渣用甲醇溶解并轉移到25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

3.4 陰性對照試驗 按照處方組成，取除唐古特瑞香以外的其余藥味，按制備工藝要求制成不含唐古特瑞香的制劑，按供試品溶液制備項下的方法制備陰性對照溶液。在本試驗擬定的色譜條件下測定，結果表明，其他成分對祖師麻甲素的測定無干擾，HPLC色譜圖見圖3。

3.5 線性關系考察 分別精密吸取上述對照品溶液（11.57 μg/mL）4、8、12、16、20 μL，按上述條件分別注入色譜儀測定，以進樣量為橫坐標，峰面積為縱坐標，作標準曲線，計算回歸方程Y=39.694X+6.129 9，r=0.999 6（n=5），祖師麻甲素進樣量在0.046 3 μg～0.231 4 μg范圍內與峰面積呈線性關系。

3.6 精密度試驗 精密吸取上述對照品溶液10 μL，重復進樣5次，按色譜條件操作進行，測峰面積，以峰面積計算RSD=1.4%，測定方法精密度良好。

3.7 穩定性試驗 取上述供試品溶液（批號XJ630062）分別在 0、2、4、6、8 h 進行，進樣量 10 μL，測定祖師麻甲素峰面積，以峰面積計算RSD=1.0%，說明供試品溶液在8 h內穩定。

圖3HPLC色譜圖

3.8 重復性試驗 按照上述含量測定方法對相同批號樣品（批號:XJ630062）制備5份供試液，分別進樣10μL，測得峰面積，計算RSD=2.4%，說明本方法重現性良好。

3.9 回收率試驗 取樣品（批號XJ630062）9份，每份取約0.5 g，精密稱定，分別精密加入祖師麻甲素對照品（0.112 4 mg/g）1.5、1.0、0.8 mL，按正文中供試品溶液的制備方法制備，依法測定，計算加樣回收率，結果平均回收率95.4%，RSD=0.5%。結果表明本方法加樣回收較好。見表1。

表1 祖師麻甲素加樣回收試驗結果

本品由于劑型限制，橡膠對提取造成較大困難，故加樣回收率偏低，但考慮到本品為外用制劑，且此含量測定方法重現性較好、方法穩定，認為可以控制藥品質量。

3.10 樣品測定結果 按本實驗含量測定方法，對10批樣品進行含量測定，結果見表2。

表2 10批樣品祖師麻甲素含測結果（n=4）

4 討論

4.1 原標準中唐古特瑞香鑒別采用紙色譜法，結果色譜斑點大而散，背景干擾較嚴重。本實驗對原方法進行了改進，采用薄層色譜法進行鑒別，斑點清晰，陰性無干擾。

4.2 方中唐古特瑞香為藏族民間用藥，其祛風除濕、活血化瘀、抗炎鎮痛的主要有效成分為瑞香素（daphnetin），即祖師麻甲素，又名瑞香內酯（7，8-二羥基香豆素）［3］。有文獻報道用HPLC法測定唐古特瑞香中祖師麻甲素的含量［4］，本試驗進行了參考，但本品為橡膠膏，由于劑型特點，提取難度較大，樣品中祖師麻甲素不易提取完全，提取液中殘留橡膠對色譜柱損傷較大，所以我們對供試品的提取進行了多方面的考察，最終確定采用水煎煮提取方法。

4.3 根據文獻報道［5］，對方中人工麝香進行了GC定量研究，但由于方中人工麝香處方量極低，僅為處方量的0.195/100 0，且本品為外用貼膏劑，基質為天然橡膠，藥材粉末及提取物最后加入基質共同入攪拌，制得。故從制劑中提取極為困難，GC幾乎檢測不到麝香酮的峰。顯微鑒別也因基質影響而無法檢測。

4.4 參照文獻方法［6］對方中山莨菪進行了TLC鑒別研究，因為陰性干擾較大，無法收入正文。

4.5 對方中冰片、樟腦、水楊酸甲酯進行了氣相色譜的含量測定研究。實驗表明，樣品中3種成分可以得到很好的分離，但同批樣品中的冰片（以龍腦計）、樟腦、水楊酸甲酯含量不均一，差異大，無法做加樣回收試驗;樣品的穩定性、精密度也差。分析原因，一是由于樣品涂布不均勻導致;二是在生產過程中，烘干等工序使得樟腦、龍腦、水楊酸甲酯都有不同程度的損失。故只將上述3種成分進行GC法定性鑒別，含量測定暫不列入正文，我們今后將繼續對這3種成分進行含量測定研究。

［1］衛生部藥品標準中藥成方制劑第十三冊［S］.1997:22.

［2］江 生，張小松，毛 慶.GC同時測定消炎鎮痛膏中的樟腦、薄荷腦、龍腦和水楊酸甲酯［J］.華西藥學雜志，2008，23（6）:706-707.

［3］王明時，劉衛國，忻莉娟.唐古特瑞香化學成分的研究［J］.南京藥學院學報，1984，15（2）:1-5.

［4］劉亞蓉.HPLC測定唐古特瑞香中祖師麻甲素的含量［J］.陜西中醫，2009，30（1）:85-87.

［5］梁 穎，汪小根.GC-MS法初步分析天然麝香與人工麝香［J］.中藥新藥與臨床藥理［J］.2005，16（3）:204-205.

［6］王 環，張曉峰，陳桂琛，等.人工栽培山莨菪和野生山莨菪中4種托烷類生物堿含量的比較研究［J］.西北植物學報，2005，25（3）:575-577.