金蓮花醇提物體外抗甲型流感病毒作用研究

趙宏偉，趙玉珍

（1.陜西中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，陜西 咸陽(yáng) 712046； 2.陜西省食品藥品檢驗(yàn)所，陜西 西安 710061）

金蓮花對(duì)革蘭陽(yáng)性球菌及陰性桿菌都有抑制作用，對(duì)綠膿桿菌的抗菌作用尤為明顯，臨床用于治療扁桃體炎、咽炎，對(duì)泌尿系感染等亦有一定療效。金蓮花是難得的純天然植物抑菌良藥，抗菌譜廣，無(wú)耐藥性，高效安全，尤其適合于兒童用藥[1]。本試驗(yàn)采用雞胚培養(yǎng)流感病毒，并用雞紅血球凝集試驗(yàn)檢測(cè)藥物對(duì)病毒在雞胚尿囊液中增殖的抑制作用[2-4]，研究了金蓮花醇提物抗甲型流感病毒作用，報(bào)道如下。

1 材料

試驗(yàn)藥物：受試藥物金蓮花醇提物（含生藥0.4 g/mL）。陽(yáng)性對(duì)照藥物雙黃連注射醇提物（哈爾濱藥業(yè)集團(tuán)中藥二廠，600 mg/瓶，批號(hào)為02111220），棕色凍干粉劑，試驗(yàn)用藥質(zhì)量濃度為100 g/L；陽(yáng)性對(duì)照藥物病毒唑（華北秦皇島制藥有限公司），試驗(yàn)用藥質(zhì)量濃度為0.25 g/L。

病毒：流感病毒甲型PR8株購(gòu)自中國(guó)預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院病毒所，由本實(shí)驗(yàn)室傳代保存，病毒血凝滴度為1∶640，試驗(yàn)中使用流感病毒（PR8株）的濃度為80個(gè)血凝單位。

雞胚：取9～10日齡雞胚的胚蛋（西安華秦肉雞公司），檢查雞胚生長(zhǎng)良好。

雞紅細(xì)胞：采取健康的公雞血，以生理鹽水洗滌3次，配成0.5%雞紅細(xì)胞懸液，用于檢測(cè)流感病毒滴度的血凝試驗(yàn)。

2 方法與結(jié)果

2.1 雞胚生長(zhǎng)發(fā)育影響試驗(yàn)

常規(guī)選擇生長(zhǎng)良好的雞胚，將金蓮花醇提物原液 （含生藥400 g/L）進(jìn)行 2倍連續(xù)稀釋到 1∶64（400～12.5 g/L），將不同質(zhì)量濃度的藥液分別接種到9日齡生長(zhǎng)良好的雞胚尿囊腔中，每胚0.2 mL，每一稀釋度9個(gè)雞胚，36.5℃孵育，逐日觀察，以雞胚生長(zhǎng)發(fā)育良好、72 h雞胚仍然存活的質(zhì)量濃度為最大無(wú)毒濃度。逐日觀察雞胚接種后的活動(dòng)、發(fā)育情況和雞胚體有無(wú)充血，判斷藥物對(duì)雞胚的毒性作用。同時(shí)設(shè)生理鹽水對(duì)照、正常雞胚對(duì)照。在接種金蓮花醇提物藥液后，24 h內(nèi)雞胚死亡為非特異性死亡。結(jié)果72 h后雞胚發(fā)育正常，胚體無(wú)明顯出血；除接種藥物原液 （含生藥400 g/L時(shí)雞胚發(fā)育較小外，接種試驗(yàn)藥物原液和藥物的各個(gè)稀釋質(zhì)量濃度時(shí)雞胚均未見(jiàn)死亡，也未見(jiàn)明顯毒性作用。結(jié)果表明金蓮花醇提物藥液對(duì)雞胚的最大無(wú)毒濃度為200 g/L。

2.2 雞胚流感病毒增殖抑制作用試驗(yàn)

試驗(yàn)采用流感病毒甲型PR8株 （80個(gè)血凝單位），藥物濃質(zhì)量度為200～12.5 g/L（2倍連續(xù)稀釋）。分為兩個(gè)試驗(yàn)組，A組采用病毒與藥物等量混合，室溫下直接作用2小時(shí)后，再共同接種雞胚；B組采用病毒和藥物分別接種，先接種病毒4 h后，再接種不同質(zhì)量濃度的藥物。每個(gè)雞胚的尿囊腔中接種0.2 mL病毒液，每一濃度接種9個(gè)雞胚。同時(shí)設(shè)病毒對(duì)照、陽(yáng)性藥物對(duì)照和正常對(duì)照組。在35℃孵育72 h，收獲雞胚的尿囊液，測(cè)定病毒的血凝滴度，以“++”的血凝狀態(tài)為血凝效價(jià)的終點(diǎn)，并計(jì)算其幾何平均滴度（GMT），同時(shí)觀察雞胚發(fā)育情況。試驗(yàn)重復(fù)2次，對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果接種受試藥物72 h后，病毒對(duì)照組胚體發(fā)育偏小、有片狀出血；陽(yáng)性藥物對(duì)照組與正常對(duì)照組的雞胚大小基本一致，無(wú)明顯充血。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。可見(jiàn)A組中，將病毒與受試藥物等量混合作用2 h后再感染雞胚，金蓮花醇提物質(zhì)量濃度為25～200 g/L時(shí)對(duì)流感病毒甲型PR8株有直接殺滅作用（P＜0.05）；B組中，先接種病毒后加藥物，金蓮花醇提物質(zhì)量濃度為25～400 g/L時(shí)對(duì)流感病毒甲型PR8株在雞胚內(nèi)的增殖有抑制作用（P ＜ 0.05）。

表1 金蓮花醇提物對(duì)流感PR8株抑制作用測(cè)定結(jié)果

3 討論

金蓮花屬植物主要成分為生物堿、黃酮類，多具有消炎、抗病毒等作用，對(duì)多種細(xì)菌有抑制作用[1]。本試驗(yàn)結(jié)果表明：金蓮花醇提物在體外對(duì)流感病毒甲型PR8株有直接殺滅作用，對(duì)流感病毒甲型PR8株在雞胚內(nèi)的增殖有抑制作用。這與其主要成分的抗菌作用有關(guān)，其抑菌作用機(jī)理有待進(jìn)一步研究。

[1]宋冬梅，孫啟時(shí).金蓮花屬植物研究進(jìn)展[J].沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2005，22（3）231-234.

[2]惠 琦，姜 崴，莊茂欣，等.流感疫苗中間品——雞胚尿囊病毒液質(zhì)量控制的研究[J]. 微生物學(xué)雜志，2009，29（3）：42-45.

[3]李建國(guó)，李瑞琴，馬民惠，等.咽喉凈口服液對(duì)PR8流感病毒感染小鼠的保護(hù)性、肺及免疫器官病理改變的影響[J].河南中醫(yī)，1999，19（2）：30-31.

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