高效液相色譜法測定三維制霉素栓中維生素E含量

鐘月平

（廣西壯族自治區(qū)欽州市婦幼保健院藥劑科，廣西 欽州 535000）

三維制霉素栓由制霉素、維生素E、維生素A、維生素D2加基質(zhì)制備而成，具有廣譜抗菌作用，臨床上用于婦科陰道炎等的治療。筆者參考有關(guān)文獻(xiàn)[1-2]方法，以高效液相色譜（HPLC）法測定三維制霉素栓中維生素E的含量，效果滿意，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

日本島津LC-10ATVP型高效液相色譜儀；SPD-10AVP型紫外檢測器；KQ-100DB型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。維生素E對照品（中國藥品生物制品檢定所提供，批號為10062-0007）；三維制霉素栓（市售品，批號分別為 070901，070902，070903）；甲醇為色譜純，其他試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱：Hypersil C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇 -水（90 ∶10）；檢測波長：280 nm；流速：0.8 mL/min；柱溫：（30.0 ±1）℃；進(jìn)樣量：20 μL。理論塔板數(shù)按維生素 E 計應(yīng)不低于3 000。在上述色譜條件下，維生素E保留時間為12 min，與其他組分達(dá)到基線分離，陰性無干擾。色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.2 溶液制備

取維生素E對照品約3 mg，精密稱定，置50 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。取裝量差異項下樣品，研細(xì)，混勻，精密稱取0.9 g，置100 mL量瓶中，加甲醇約85 mL超聲處理20 min，取出，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，靜置，用0.45 μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。取處方項下除維生素E以外的其余原料藥，按供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

空白干擾試驗：取陰性對照品溶液，按上述色譜條件分析。在與對照品相應(yīng)位置上無明顯的其他色譜峰出現(xiàn)。結(jié)果表明陰性對照品溶液對測定無干擾。

線性關(guān)系考察：配制0.242 g/L的維生素E對照品溶液，分別精密吸取 1.0，2.0，4.0，6.0，8.0 mL，置 10 mL 棕色量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。分別精密吸取上述溶液各20 μL進(jìn)樣。以維生素E對照品量為橫坐標(biāo)、峰面積積分值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 Y=142 073.329 5 X+1 788.409 3，r=0.999 8（ n=5）。結(jié)果表明，維生素E進(jìn)樣量在0.484～3.872 μg范圍內(nèi)與峰面積有良好的線性關(guān)系。

精密度試驗：取同一對照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣測定6次。結(jié)果維生素E平均峰面積為155 198，RSD=0.90%（n=6），結(jié)果表明儀器精密度良好。

重現(xiàn)性試驗：按擬訂的方法，取同一批（批號為070901）樣品進(jìn)行6次平行的供試品溶液制備與測定。結(jié)果維生素E平均含量為10.83 mg/粒，RSD=1.15% （n=6）。

穩(wěn)定性試驗：取同一批（批號為070901）樣品適量，依法制成供試品溶液，放置 0，2，4，8，12 h，分別進(jìn)行測定。結(jié)果平均峰面積為156 696，RSD=0.17%（n=5），表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗：精密稱取已知含量的同一批（批號為070901）樣品粉末6份，各約1.0 g，分別加入質(zhì)量濃度為1.114 g/L的維生素E對照品溶液1.0，3.0，6.0 mL，按供試品溶液制備方法制備待測溶液。照上述色譜條件進(jìn)行測定，計算回收率，結(jié)果見表1。

表1 維生素E加樣回收試驗結(jié)果（n=6）

2.4 樣品含量測定

取3批樣品，按供試品溶液制備方法制備溶液，依上述色譜條件測定，按外標(biāo)法計算含量。結(jié)果批號為070901，070902，070903的3批樣品，每粒中維生素E的含量分別為10.72，10.50，10.40 mg，其 RSD分別為0.19%，0.83%，0.51%（n=3）。

3 討論

筆者曾考察了多種流動相的洗脫效果，其中乙腈-水（90∶10）的雜質(zhì)峰過多、進(jìn)樣時間過長，乙腈-1%冰醋酸（88∶12）進(jìn)樣時間過長，甲醇 -0.5%冰醋酸（89∶11）峰形較差，而甲醇 -水（90∶10）可使維生素E基線分離且出峰時間適中，峰形較好。也曾對超聲提取時間進(jìn)行了比較，加入50%甲醇分別超聲提取10，20，30，40 min，結(jié)果顯示超聲提取20 min較為合適。本試驗結(jié)果表明，所建立的HPLC法簡便快捷，重現(xiàn)性和穩(wěn)定性均較好，操作簡便，可用于三維制霉素栓的質(zhì)量控制。

[1]王燕萍，馬 瀟，張 虹.HPLC法測定維生素E霜中維生素E的含量[J]. 中國藥事，2003，17（4）:230-231.

[2]馬經(jīng)野，許 蘊，付 林.反相高效液相色譜法測定血清中維生素E的含量[J]. 中國衛(wèi)生檢驗雜志，2006，16（2）：159-160.