蒼術中非法添加硫酸阿托品及氫溴酸東莨菪堿的檢測方法

毛誼平，任榮軍，吳高芬

(湖南省岳陽市藥品檢驗所，湖南 岳陽 414000)

蒼術為菊科植物茅蒼術 Atractylodes lancea(Thunb.)DC.或北蒼術 Atractylodes chinensis(DC.)Koidz.的干燥根莖[1]，為芳香化濕類中藥，性味辛、苦，溫而無毒，具燥濕健脾、祛風除濕之功能，是濕困脾胃之專藥。其臨床應用范圍較廣，內外濕邪患者均可使用，并可配伍其他方藥治療胃脘痛、泄瀉、感冒、痹癥等疾病，效果較好[2]。近年來，我市有不少患者在使用蒼術后出現輕重不同的“阿托品中毒”樣現象，表現為面部潮紅、口干舌燥、視物不清、手掌發紅或有緊脹感、身煩熱、頭昏頭痛、小便淋漓不暢等癥狀，影響了患者疾病的及時有效治療，也對其身心健康造成了一定的危害。經我所抽樣研究，檢出蒼術藥材中摻有硫酸阿托品及氫溴酸東莨宕堿。筆者采用薄層色譜(TLC)法及高效液相色譜(HPLC)法建立了中藥蒼術中非法添加硫酸阿托品及氫溴酸東莨菪堿的定性定量檢測方法，報道如下。

1 儀器與試藥

島津20AT液相色譜儀(DAD檢測器，solution色譜工作站);Mettler Toledo XS－105型分析天平;JAC－400型濟寧奧波超聲儀。硫酸阿托品對照品(供含量測定用，批號為110805－200306)，氫溴酸東莨菪堿對照品(供含量測定用，批號為10000492－200308)均來自中國藥品生物制品檢定所;蒼術藥材由湖南省岳陽市中醫醫院提供;乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 TLC 鑒別

取本品粉末5 g，加濃氨試液4 mL，混勻，加三氯甲烷30 mL，搖勻，超聲 30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加三氯甲烷1 mL使溶解，作為供試品溶液。取蒼術對照藥材0.5 g，同法制成對照藥材溶液。取硫酸阿托品對照品、氫溴酸東莨菪堿對照品，加甲醇制成每1 mL各含4 mg的混合溶液，作為對照品溶液。照TLC法[2005年版《中國藥典(二部)》附錄ⅥB]試驗，吸取上述3種溶液各10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯－甲醇－濃氨試液(17∶2∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應位置上顯相同顏色的斑點，對照藥材溶液則無此斑點(圖1)。

圖1 薄層色譜圖

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件

色譜柱:phenomenex Luna C18柱(200mm×4.60mm，5μm);流動相:0.07 mol/L磷酸鈉溶液(含0.0175 mol/L十二烷基硫酸鈉，用磷酸調節pH至6.0)－乙腈(70∶30);檢測波長:216 nm;柱溫:30℃;流速:1.0 mL/min。理論塔板數按氫溴酸東莨菪堿及硫酸阿托品峰計算均應不低于3 000。

2.2.2 溶液制備

精密稱取氫溴酸東莨菪堿及硫酸阿托品對照品適量，分別加流動相溶解并制成每1 mL各含0.5 mg的混合對照品溶液，即得對照品溶液(東莨菪堿質量為氫溴酸東莨菪堿的1/1.445)。取本品粉末(過 3號篩)約1 g，精密稱定，置錐形瓶中，加入2 mol/L鹽酸溶液10 mL，超聲處理30 min(功率250 W，頻率 40 kHz)，放冷，濾過，濾渣和濾器用2 mol/L鹽酸溶液10 mL分數次洗滌，合并濾液和洗液，用濃氨試液調節pH至9，用三氯甲烷振搖提取4次，每次10 mL，合并三氯甲烷液，回收溶劑至干，殘渣用流動相溶解并轉移至5 mL量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。取蒼術對照藥材約0.5 g，按供試品溶液制備方法同法制成對照藥材溶液。

圖2 高效液相色譜圖

2.2.3 方法學考察

干擾試驗:分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液、對照藥材溶液各10 μL，按2.2.1項下色譜條件進樣分析。結果，供試品溶液色譜圖上在與對照品溶液相應位置有保留時間一致的色譜峰，氫溴酸東莨菪堿及硫酸阿托品對照品的保留時間分別約為20 min及34 min，而對照藥材溶液在此保留時間無色譜峰。高效液相色譜圖見圖2。

標準曲線繪制:分別精密稱取氫溴酸東莨菪堿及硫酸阿托品對照品 24.62，25.34 mg，置 50 mL 量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻。按上述色譜條件測定，分別進樣 4，8，12，16，20 μL，測定峰面積積分值。以對照品質量濃度為橫坐標、峰面積積分值為縱坐標繪制標準曲線，氫溴酸東莨菪堿及硫酸阿托品回歸方程分 A=851.4 C+42.17(r=0.999 8)和 A=968.2 C+32.43(r=0.999 7)。結果表明，氫溴酸東莨菪堿及硫酸阿托品進樣量分別在1.97 ～9.85 μg和 2.03 ～10.15 μg范圍內與峰面積積分值呈良好線性關系。

精密度試驗:精密量取標準曲線繪制項下混合對照品溶液20μL，依法連續進樣6次。結果氫溴酸東莨菪堿及硫酸阿托品峰面積的 RSD分別為0.82%和1.01%(n=6)。表明儀器精密度良好。

重復性試驗:取同一批摻偽樣品1.0 g，精密稱定，依法制備供試品溶液并測定含量。結果氫溴酸東莨菪堿及硫酸阿托品含量分別為 2.3 mg/g 和 5.6 mg/g， RSD 分別為 0.92% 和 1.36%(n=6)。表明方法重現性良好。

加樣回收試驗:取已知含量的同一樣品1 g共6份，精密稱定，分別添加氫溴酸東莨菪堿及硫酸阿托品對照品，依法制備供試品溶液至“回收溶劑至干”，殘渣用流動相溶解并轉移至10 mL量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，依法進樣分析。結果見表1。

表1 氫溴酸東莨菪堿及硫酸阿托品加樣回收試驗結果(n=6)

檢測限測定:取氫溴酸東莨菪堿及硫酸阿托品對照品適量，加流動相適量溶解并逐步稀釋，按上述色譜條件測定，結果氫溴酸東莨菪堿及硫酸阿托品最低檢測質量濃度分別為0.131 μg/mL和0.586 μg/mL(S/N=3)，最低檢測量分別為 1.31 ng 和 5.86 ng。

2.2.4 樣品含量測定

取3批不同批號的摻偽樣品，按2.2.2項下方法制備供試品溶液，按2.2.1項下色譜條件分別進樣測定，外標法計算含量。結果摻偽樣品中氫溴酸東莨菪堿及硫酸阿托品的平均質量分數分別為 0.23% 和 0.56% 。

3 討論

文獻報道的流動相有甲醇－水(53∶47，水中含20 mmol/L醋酸鈉，0.02% 三乙胺，0.3%四氫呋喃，pH 為 6.86)[3－4]，0.02 mol/L醋酸鈉溶液(含0.02%三乙胺，用醋酸調pH至7.0)－甲醇(48∶52)[5]，甲醇 －水(40 ∶60，水中含 0.02 mol/L 醋酸鈉、0.02% 三乙胺、用冰醋酸調 pH 至 6.0)[6]，以 0.07 mol/L 磷酸鈉溶液(含0.017 5 mol/L十二烷基硫酸鈉，用磷酸調節pH至6.0)－乙腈(70∶30)[1]。為確定流動相的組成及比例，對含適當離子對濃度的甲醇－緩沖液、乙腈－緩沖液等系統進行了比較。結果發現，流動相為甲醇－緩沖液系統時，柱壓很高;且因檢測波長216 nm屬于低紫外區，甲醇的末端吸收較大，易干擾檢測，故選擇乙腈－緩沖液系統。

對該色譜檢測方法還進行了耐受性試驗，考察流動相pH、組成比例等對色譜分離的影響。結果表明，pH為3.0～6.0時，待測成分的峰形及分離度均較好。pH越低，其保留時間越短，分離度越小。pH為6.0、組成比例為30∶70時，峰形及分離度較好，且準確可靠，方法重現性好。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學工業出版社，2005:111，188.

[2]羅熙財.服含蒼術復方煎劑出現阿托品中毒樣現象[J].中國中藥雜志，2000，25(11):32.

[3]陸 霞，李 華，阮桂平.心寶丸中硫酸阿托品與氫溴酸東莨菪堿的含量測定[J].中藥材，2002，25(5):353 －354.

[4]朱月琴，張 弦，殷放宙.HPLC法測定洋金花及其總生物堿中東莨菪堿的含量[J].海峽藥學，2006，18(1):95－97.

[5]柴金玲，李 瑛，李 偉，等.HPLC法測定洋金花中東莨菪堿的含量[J].藥物分析雜志，2006，26(5):634－636.

[6]侯士果，谷學新，王書妍，等.HPLC測定洋金花中東莨菪堿和阿托品的含量[J].中國中藥雜志，2006，31(13):1 065－1 067.