蒼術(shù)中非法添加硫酸阿托品及氫溴酸東莨菪堿的檢測(cè)方法

毛誼平，任榮軍，吳高芬

(湖南省岳陽市藥品檢驗(yàn)所，湖南 岳陽 414000)

蒼術(shù)為菊科植物茅蒼術(shù) Atractylodes lancea(Thunb.)DC.或北蒼術(shù) Atractylodes chinensis(DC.)Koidz.的干燥根莖[1]，為芳香化濕類中藥，性味辛、苦，溫而無毒，具燥濕健脾、祛風(fēng)除濕之功能，是濕困脾胃之專藥。其臨床應(yīng)用范圍較廣，內(nèi)外濕邪患者均可使用，并可配伍其他方藥治療胃脘痛、泄瀉、感冒、痹癥等疾病，效果較好[2]。近年來，我市有不少患者在使用蒼術(shù)后出現(xiàn)輕重不同的“阿托品中毒”樣現(xiàn)象，表現(xiàn)為面部潮紅、口干舌燥、視物不清、手掌發(fā)紅或有緊脹感、身煩熱、頭昏頭痛、小便淋漓不暢等癥狀，影響了患者疾病的及時(shí)有效治療，也對(duì)其身心健康造成了一定的危害。經(jīng)我所抽樣研究，檢出蒼術(shù)藥材中摻有硫酸阿托品及氫溴酸東莨宕堿。筆者采用薄層色譜(TLC)法及高效液相色譜(HPLC)法建立了中藥蒼術(shù)中非法添加硫酸阿托品及氫溴酸東莨菪堿的定性定量檢測(cè)方法，報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

島津20AT液相色譜儀(DAD檢測(cè)器，solution色譜工作站);Mettler Toledo XS－105型分析天平;JAC－400型濟(jì)寧奧波超聲儀。硫酸阿托品對(duì)照品(供含量測(cè)定用，批號(hào)為110805－200306)，氫溴酸東莨菪堿對(duì)照品(供含量測(cè)定用，批號(hào)為10000492－200308)均來自中國(guó)藥品生物制品檢定所;蒼術(shù)藥材由湖南省岳陽市中醫(yī)醫(yī)院提供;乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 TLC 鑒別

取本品粉末5 g，加濃氨試液4 mL，混勻，加三氯甲烷30 mL，搖勻，超聲 30 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)尤燃淄? mL使溶解，作為供試品溶液。取蒼術(shù)對(duì)照藥材0.5 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。取硫酸阿托品對(duì)照品、氫溴酸東莨菪堿對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL各含4 mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液。照TLC法[2005年版《中國(guó)藥典(二部)》附錄ⅥB]試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯－甲醇－濃氨試液(17∶2∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，對(duì)照藥材溶液則無此斑點(diǎn)(圖1)。

圖1 薄層色譜圖

2.2 含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件

色譜柱:phenomenex Luna C18柱(200mm×4.60mm，5μm);流動(dòng)相:0.07 mol/L磷酸鈉溶液(含0.0175 mol/L十二烷基硫酸鈉，用磷酸調(diào)節(jié)pH至6.0)－乙腈(70∶30);檢測(cè)波長(zhǎng):216 nm;柱溫:30℃;流速:1.0 mL/min。理論塔板數(shù)按氫溴酸東莨菪堿及硫酸阿托品峰計(jì)算均應(yīng)不低于3 000。

2.2.2 溶液制備

精密稱取氫溴酸東莨菪堿及硫酸阿托品對(duì)照品適量，分別加流動(dòng)相溶解并制成每1 mL各含0.5 mg的混合對(duì)照品溶液，即得對(duì)照品溶液(東莨菪堿質(zhì)量為氫溴酸東莨菪堿的1/1.445)。取本品粉末(過 3號(hào)篩)約1 g，精密稱定，置錐形瓶中，加入2 mol/L鹽酸溶液10 mL，超聲處理30 min(功率250 W，頻率 40 kHz)，放冷，濾過，濾渣和濾器用2 mol/L鹽酸溶液10 mL分?jǐn)?shù)次洗滌，合并濾液和洗液，用濃氨試液調(diào)節(jié)pH至9，用三氯甲烷振搖提取4次，每次10 mL，合并三氯甲烷液，回收溶劑至干，殘?jiān)昧鲃?dòng)相溶解并轉(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。取蒼術(shù)對(duì)照藥材約0.5 g，按供試品溶液制備方法同法制成對(duì)照藥材溶液。

圖2 高效液相色譜圖

2.2.3 方法學(xué)考察

干擾試驗(yàn):分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、對(duì)照藥材溶液各10 μL，按2.2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析。結(jié)果，供試品溶液色譜圖上在與對(duì)照品溶液相應(yīng)位置有保留時(shí)間一致的色譜峰，氫溴酸東莨菪堿及硫酸阿托品對(duì)照品的保留時(shí)間分別約為20 min及34 min，而對(duì)照藥材溶液在此保留時(shí)間無色譜峰。高效液相色譜圖見圖2。

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制:分別精密稱取氫溴酸東莨菪堿及硫酸阿托品對(duì)照品 24.62，25.34 mg，置 50 mL 量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻。按上述色譜條件測(cè)定，分別進(jìn)樣 4，8，12，16，20 μL，測(cè)定峰面積積分值。以對(duì)照品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)、峰面積積分值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，氫溴酸東莨菪堿及硫酸阿托品回歸方程分 A=851.4 C+42.17(r=0.999 8)和 A=968.2 C+32.43(r=0.999 7)。結(jié)果表明，氫溴酸東莨菪堿及硫酸阿托品進(jìn)樣量分別在1.97 ～9.85 μg和 2.03 ～10.15 μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn):精密量取標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液20μL，依法連續(xù)進(jìn)樣6次。結(jié)果氫溴酸東莨菪堿及硫酸阿托品峰面積的 RSD分別為0.82%和1.01%(n=6)。表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一批摻偽樣品1.0 g，精密稱定，依法制備供試品溶液并測(cè)定含量。結(jié)果氫溴酸東莨菪堿及硫酸阿托品含量分別為 2.3 mg/g 和 5.6 mg/g， RSD 分別為 0.92% 和 1.36%(n=6)。表明方法重現(xiàn)性良好。

加樣回收試驗(yàn):取已知含量的同一樣品1 g共6份，精密稱定，分別添加氫溴酸東莨菪堿及硫酸阿托品對(duì)照品，依法制備供試品溶液至“回收溶劑至干”，殘?jiān)昧鲃?dòng)相溶解并轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，依法進(jìn)樣分析。結(jié)果見表1。

表1 氫溴酸東莨菪堿及硫酸阿托品加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

檢測(cè)限測(cè)定:取氫溴酸東莨菪堿及硫酸阿托品對(duì)照品適量，加流動(dòng)相適量溶解并逐步稀釋，按上述色譜條件測(cè)定，結(jié)果氫溴酸東莨菪堿及硫酸阿托品最低檢測(cè)質(zhì)量濃度分別為0.131 μg/mL和0.586 μg/mL(S/N=3)，最低檢測(cè)量分別為 1.31 ng 和 5.86 ng。

2.2.4 樣品含量測(cè)定

取3批不同批號(hào)的摻偽樣品，按2.2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.2.1項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣測(cè)定，外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果摻偽樣品中氫溴酸東莨菪堿及硫酸阿托品的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為 0.23% 和 0.56% 。

3 討論

文獻(xiàn)報(bào)道的流動(dòng)相有甲醇－水(53∶47，水中含20 mmol/L醋酸鈉，0.02% 三乙胺，0.3%四氫呋喃，pH 為 6.86)[3－4]，0.02 mol/L醋酸鈉溶液(含0.02%三乙胺，用醋酸調(diào)pH至7.0)－甲醇(48∶52)[5]，甲醇 －水(40 ∶60，水中含 0.02 mol/L 醋酸鈉、0.02% 三乙胺、用冰醋酸調(diào) pH 至 6.0)[6]，以 0.07 mol/L 磷酸鈉溶液(含0.017 5 mol/L十二烷基硫酸鈉，用磷酸調(diào)節(jié)pH至6.0)－乙腈(70∶30)[1]。為確定流動(dòng)相的組成及比例，對(duì)含適當(dāng)離子對(duì)濃度的甲醇－緩沖液、乙腈－緩沖液等系統(tǒng)進(jìn)行了比較。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，流動(dòng)相為甲醇－緩沖液系統(tǒng)時(shí)，柱壓很高;且因檢測(cè)波長(zhǎng)216 nm屬于低紫外區(qū)，甲醇的末端吸收較大，易干擾檢測(cè)，故選擇乙腈－緩沖液系統(tǒng)。

對(duì)該色譜檢測(cè)方法還進(jìn)行了耐受性試驗(yàn)，考察流動(dòng)相pH、組成比例等對(duì)色譜分離的影響。結(jié)果表明，pH為3.0～6.0時(shí)，待測(cè)成分的峰形及分離度均較好。pH越低，其保留時(shí)間越短，分離度越小。pH為6.0、組成比例為30∶70時(shí)，峰形及分離度較好，且準(zhǔn)確可靠，方法重現(xiàn)性好。

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