球孢白僵菌MZ041016菌株對(duì)平菇厲眼蕈蚊的毒力

袁盛勇, 孔 瓊, 張宏瑞, 李正躍, 張雪梅, 李雄強(qiáng), 李文偉

(1.云南紅河學(xué)院農(nóng)學(xué)系,蒙自 661100; 2.云南紅河學(xué)院生物系,蒙自 661100;3.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)植保學(xué)院,昆明 650201)

昆蟲(chóng)病原真菌是一類通過(guò)菌絲穿透寄主體壁侵染昆蟲(chóng)的病原微生物,對(duì)于防治刺吸式口器害蟲(chóng),如蚜蟲(chóng)、葉蟬、飛虱等具有獨(dú)到之處,因此研究和開(kāi)發(fā)針對(duì)刺吸式口器害蟲(chóng)的真菌制劑受到國(guó)內(nèi)外的普遍關(guān)注[1]。球孢白僵菌(Beauveria bassiana)是目前研究和應(yīng)用最多的一種重要昆蟲(chóng)病原真菌,寄主范圍廣,可侵染15個(gè)目149個(gè)科的700余種昆蟲(chóng)和螨類,致病性強(qiáng),適應(yīng)性強(qiáng)[2],對(duì)控制害蟲(chóng)嚴(yán)重發(fā)生和減少環(huán)境污染起到了很大的作用。

平菇厲眼蕈蚊(Lycoriella pleuroti Yang et Zhang)隸屬于雙翅目,長(zhǎng)角亞目,眼蕈蚊科,厲眼蕈蚊屬,是國(guó)內(nèi)食用菌的優(yōu)勢(shì)危害種,俗稱菌蚊、菌蛆。該蟲(chóng)能為害平菇、猴頭菇、茶樹(shù)菇、靈芝等多種食用菌和藥用菌[3]。成蟲(chóng)常在培養(yǎng)料和出菇期的菌袋口端及子實(shí)體上爬行、交尾、產(chǎn)卵。幼蟲(chóng)潛入培養(yǎng)料及子實(shí)體中,直接取食食用菌的菌絲和培養(yǎng)料的原基或鉆蛀幼嫩菇體,造成退菌、原基消失,培養(yǎng)料松散、逐漸變成黃褐色,菇蕾萎縮死亡、菌柄折斷倒伏、耳片缺刻和菇體孔洞,嚴(yán)重時(shí)子實(shí)體完全失去商品價(jià)值[4]。關(guān)于應(yīng)用球孢白僵菌防治平菇厲眼蕈蚊的研究尚未見(jiàn)報(bào)道,本研究以能侵染平菇厲眼蕈蚊的球孢白僵菌為材料,研究其對(duì)平菇厲眼蕈蚊的防治效果,以達(dá)到用生物農(nóng)藥代替化學(xué)農(nóng)藥防治平菇厲眼蕈蚊的目的。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試菌種

球孢白僵菌MZ041016菌株保存在紅河學(xué)院農(nóng)學(xué)系實(shí)驗(yàn)室,經(jīng)復(fù)壯和擴(kuò)繁之后供試驗(yàn)用。

1.1.2 供試?yán)ハx(chóng)

從平菇栽培基地采集成蟲(chóng),在實(shí)驗(yàn)室菌袋上飼養(yǎng)得到供試蟲(chóng)態(tài)。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 菌種的擴(kuò)繁、分生孢子液的制備

采用馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基(PDA)在溫度25℃下進(jìn)行培養(yǎng),培養(yǎng)10d收集分生孢子。

1.2.2 分生孢子液的制備

用50mL無(wú)菌水+0.05%吐溫20作為潤(rùn)濕劑振蕩脫溶固體培養(yǎng)基上的孢子,并以雙層絲襪過(guò)濾,除去菌絲和雜質(zhì)。用血球計(jì)數(shù)板在顯微鏡下檢查計(jì)算孢子數(shù),測(cè)出濃度,再用無(wú)菌水分別稀釋成所需的梯度濃度。

1.2.3 菌株對(duì)平菇厲眼蕈蚊幼蟲(chóng)的毒力測(cè)定

將球孢白僵菌MZ041016菌株分生孢子稀釋為孢子含量3.0×104～3.0×108個(gè)/mL5個(gè)處理濃度,每個(gè)處理設(shè)3個(gè)重復(fù),并用0.05%吐溫20+無(wú)菌水作對(duì)照,每個(gè)濃度30頭幼蟲(chóng),浸入20～30mL孢子懸液中30s后迅速取出,用干濾紙吸去留在蟲(chóng)體上的懸浮液,置于盛有黃豆粉的培養(yǎng)皿中,用紗布封口,置于25℃,相對(duì)濕度80%的人工氣候培養(yǎng)箱中,每天觀察記錄化蛹和死亡數(shù)量,并將蟲(chóng)尸取出,連續(xù)觀察7d。

1.2.4 菌株對(duì)平菇厲眼蕈蚊成蟲(chóng)的毒力測(cè)定

球孢白僵菌MZ041016菌株分生孢子液稀釋為3.0×104～3.0×108個(gè)/mL5個(gè)處理濃度,每個(gè)處理設(shè)3個(gè)重復(fù),并用0.05%吐溫20+無(wú)菌水作對(duì)照,采用噴霧法接種。在每個(gè)容量為300mL瓶壁有孔的礦泉水瓶?jī)?nèi)放入30頭成蟲(chóng)。接種時(shí)先將成蟲(chóng)置于瓶?jī)?nèi),用M301414型喉頭噴霧器均勻噴施4mL分生孢子液,用紗布封口,置于25℃、相對(duì)濕度為80%的人工氣候培養(yǎng)箱中。每天觀察記錄其死亡蟲(chóng)數(shù),并將蟲(chóng)尸取出。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)方法

數(shù)據(jù)采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS10處理,根據(jù)校正死亡率進(jìn)行概率值轉(zhuǎn)換后,對(duì)劑量作線性回歸分析,建立直線回歸模型,從而分別估計(jì)劑量效應(yīng) LC50、LT50和相關(guān)系數(shù)(R)等參數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 球孢白僵菌MZ041016菌株不同濃度孢子液對(duì)平菇厲眼蕈蚊成蟲(chóng)的毒力

毒力測(cè)定結(jié)果(表 1～3)表明,球孢白僵菌MZ041016菌株分生孢子懸浮液濃度為3.6×108個(gè)/mL時(shí)對(duì)平菇厲眼蕈蚊成蟲(chóng)毒力最強(qiáng),第7天校正死亡率86.72%,其次是3.6×107個(gè)/mL濃度下,其校正死亡率為74.79%,毒力最差為3.6×104個(gè)/mL濃度下,校正死亡率為25.02%。在3.6×108個(gè)/mL濃度下第2天成蟲(chóng)出現(xiàn)死亡,隨著時(shí)間推移和濃度增加,校正死亡率呈逐漸增加趨勢(shì)。對(duì)平菇厲眼蕈蚊成蟲(chóng)毒力測(cè)定中第4～7天的致死中濃度(LC50)依次為2.988×108、3.55×107、3.78×106個(gè)/mL和2.319×105個(gè)/mL。可看出隨著孢子濃度的增加,平菇厲眼蕈蚊成蟲(chóng)的 LT50逐漸減小,3.6×105～3.6×108個(gè)/mL濃度下的LT50依次為8.57、6.14、5.18d和4.28d。

表1 球孢白僵菌MZ041016菌株分生孢子不同濃度對(duì)平菇厲眼蕈蚊成蟲(chóng)的毒力

表2 球孢白僵菌MZ041016菌株分生孢子對(duì)平菇厲眼蕈蚊成蟲(chóng)的致死中濃度

表3 球孢白僵菌MZ041016菌株分生孢子對(duì)平菇厲眼蕈蚊成蟲(chóng)的致死中時(shí)

2.2 球孢白僵菌MZ041016菌株不同濃度孢子液對(duì)平菇厲眼蕈蚊幼蟲(chóng)的毒力

表1、表2和表3統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明,球孢白僵菌MZ041016菌株分生孢子懸浮液3.6×108個(gè)/mL濃度下對(duì)平菇厲眼蕈蚊幼蟲(chóng)毒力最強(qiáng),第7天校正死亡率為87.69%,其次是3.6×107個(gè)/mL濃度下,校正死亡率為80.46%,毒力最差為3.6×104個(gè)/mL濃度下的31.11%。在不同濃度下第2天幼蟲(chóng)開(kāi)始出現(xiàn)死亡,隨著時(shí)間的推移和濃度增加,校正死亡率呈逐漸增加趨勢(shì)。對(duì)平菇厲眼蕈蚊幼蟲(chóng)毒力測(cè)定中第 4～7天的致死中濃度(LC50)分別為3.467×108、2.853×107、2.841 ×106個(gè)/mL 和3.082×105個(gè)/mL,隨時(shí)間推移,致死中濃度逐漸減小。隨著分生孢子濃度的增加,平菇厲眼蕈蚊幼蟲(chóng)致死中時(shí)間 LT50逐漸減小,3.6×105～3.6×108個(gè)/mL濃度下的LT50依次為8.09、6.03、4.96d和4.53d。

表4 球孢白僵菌MZ041016菌株分生孢子不同濃度對(duì)平菇厲眼蕈蚊幼蟲(chóng)的毒力

表5 球孢白僵菌MZ041016菌株分生孢子對(duì)平菇厲眼蕈蚊幼蟲(chóng)的致死中濃度

表6 球孢白僵菌MZ041016菌株分生孢子對(duì)平菇厲眼蕈蚊幼蟲(chóng)的致死中時(shí)

3 討論

利用昆蟲(chóng)病原真菌防治平菇厲眼蕈蚊的報(bào)道很少,試驗(yàn)應(yīng)用球孢白僵菌MZ041016菌株不同濃度分生孢子液對(duì)平菇厲眼蕈蚊成蟲(chóng)和幼蟲(chóng)進(jìn)行毒力測(cè)定,結(jié)果表明,兩個(gè)蟲(chóng)態(tài)均能感病,其中幼蟲(chóng)較成蟲(chóng)敏感,這可能與低齡幼蟲(chóng)的各種防御功能發(fā)育不完善,因而抵抗力較差有關(guān)。使用不同孢子濃度處理平菇厲眼蕈蚊成蟲(chóng)和幼蟲(chóng)的結(jié)果表明,3.6×108個(gè)/mL是較為理想的濃度。環(huán)境條件對(duì)該菌的毒力影響很大,其中溫度和濕度是兩個(gè)非常重要的因素,適當(dāng)?shù)臏囟群蜐穸仁窃摼乐纹焦絽栄坜ξ玫年P(guān)鍵因素,在菇房中應(yīng)用還待進(jìn)一步深入研究。

[1]李濤,劉映紅,張永軍.球孢白僵菌對(duì)煙蚜繭蜂寄生行為的影響[J].植物保護(hù)學(xué)報(bào),2007,34(4)：401-404.

[2]李榮森,羅紹彬.微生物防治害蟲(chóng)[M].北京：科學(xué)出版社,1983.

[3]何嘉,張?zhí)?李正躍.平菇眼蕈蚊的生物學(xué)特性及其防治[J].中國(guó)食用菌,2004,24(4)：52-54.

[4]沈登榮,張宏瑞,張?zhí)?我國(guó)食用菌眼蕈蚊的研究現(xiàn)狀[J].中國(guó)食用菌,2008,27(1)：48-50.