頭孢呋辛鈉在小鼠體內(nèi)的藥代動力學及組織分布研究

王 敏,侯麗然,高金波

(黑龍江省教育廳生物藥制劑重點實驗室佳木斯大學,黑龍江 佳木斯 154007)

注射用頭孢呋辛鈉為一種半合成第二代頭孢菌素,具有較好的廣譜抗菌作用,其作用機理是通過結合細菌蛋白,從而抑制細菌細胞壁的合成[1]。臨床應用于敏感的革蘭陰性菌所致的呼吸道、泌尿系、皮膚和軟組織、骨和關節(jié)、女生殖器等部位的感染等[2]。頭孢呋辛鈉血藥濃度測定國外多采用微生物法[3～5],國內(nèi)未見文獻報道。本文根據(jù)頭孢呋辛鈉的結構特點,建立了測定血漿和組織中頭孢呋辛鈉濃度的 HPLC法,并利用該方法對注射用頭孢呋辛鈉在小鼠體內(nèi)的藥代動力學及在組織內(nèi)的分布進行了試驗研究,給出了動力學參數(shù)和在體內(nèi)組織中的分布狀況。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilengt 1100高效液相色譜儀;包括:G1314A紫外檢測器,G1379A真空在線脫氣機,G1311A四元泵,G1313A自動進樣器;CP225D電子天平(上海恒平電子有限公司);Sartorius酸度計,FSH-2A型勻漿機(國立常州試驗設備研究所)。

1.2 試藥

頭孢呋辛對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號130493-200102,含量 96.2%);注射用頭孢呋辛鈉 (北京悅康藥業(yè)集團有限公司,批號:B20060103);對乙酰基酚(含量＞ 98.5%,東北制藥總廠,批號051029);乙腈為色譜純;水為重蒸餾水。

2 實驗方法與結果

2.1 對照液及內(nèi)標溶液的配制

頭孢呋辛鈉照品溶液:精密稱取頭孢他啶對照品5.0mg,用制成濃度為0.5mg˙mL-1的頭孢呋辛鈉對照品貯備液。置冰箱4℃保存。內(nèi)標液:精密稱取對乙酰氨基酚10.0mg用水制成濃度 1.0mg˙mL-1的內(nèi)標貯備液,置冰箱4℃保存。臨用用水將內(nèi)標貯備液稀釋 100倍,即為 10μg˙ mL-1的內(nèi)標溶液。

2.2 色譜條件

色譜柱為 Hypersil C18(4.6mm× 150mm,5μm)不銹鋼柱;流動相 pH3.4醋酸鹽緩沖液 (取0.1mol/L醋酸鈉溶液50mL,加 0.1mol/L醋酸溶液至 1000mL,用 NaOH溶液與CH3COOH溶液調(diào)節(jié)使 pH至3.4)-乙腈(85：15);用 0.45 μm的濾膜過濾;檢測波長為274nm;流速為1.0mL/min,室溫25℃ ,進樣 20μL。

2.3 樣品的處理方法

2.3.1 血漿

取小鼠血漿0.5mL,加乙腈1mL沉淀蛋白,旋渦混合1min,4000r/min離心10min,取上清液用0.45μm的微孔濾膜過濾。

2.3.2 組織

取 3只小鼠的心、脾、肺及腎臟和肝1g,用生理鹽水洗凈表面浮血,濾紙吸干 ,稱質(zhì)量,加入2mL pH7.0的磷酸鹽緩沖液進行勻漿 ,4000r/min離心10min,取上層清液200 μL,加400μL乙腈沉淀蛋白,4000r/min離心 20min,取上清液用0.45 μm的微孔濾膜過濾。

2.4 標準曲線繪制

用空白血漿加頭孢呋辛鈉照品貯備液配成含頭孢呋辛鈉 1μ g/mL,5 μg/mL,25 μg/mL,100μ g/mL,250 μg/mL 的 血漿標準液,分別加入0.50mL的對乙酰基酚內(nèi)標溶液渦旋30s,按血樣預處理項下處理后,以0.45 μm的濾膜過濾,依次進樣,測定其峰面積。以所測得的頭孢呋辛鈉峰面積與內(nèi)標峰面積的比值 As/Ai為橫坐標與相應的頭孢呋辛鈉濃度 C(mg˙L-1)為縱坐標作線性回歸,結果顯示頭孢呋辛鈉血藥濃度在 1～ 250μg/mL范圍內(nèi)線性良好,回歸方程為:C=16.12As/Ai+ 1.46,r=0.9998,n=5,以信躁比 =3計 ,最低檢測濃度為0.25 μg/mL。

2.5 回收率及精密度實驗

取小鼠的血漿0.5mL,加入頭孢呋辛鈉照品貯備液0.1mL,0.2mL,0.3mL,0.4mL,0.5mL,再加入內(nèi)標液 0.50 mL,加入重蒸餾水使成為2.0 mL,渦旋30s,按樣品處理方法進行處理后,進樣測得峰面積。5種濃度的回收率分別為(97.12± 1.96)%,(98.99± 1.01)%,(98.35± 1.64)%,(96.50±2.89)%及(96.15±3.03)%。RSD為1.24%。

2.6 藥代動力學研究

30只健康小鼠,雌雄各半,體質(zhì)量25g左右,頭孢呋辛鈉用滅菌生理鹽水溶解后,按1000mg/kg劑量背部推注,于給藥后即刻及 0.125、 0.25、 0.5、 1、 2、 3h對 小鼠進行斷頭取血1.5mL,肝素抗凝后 3500r/min離心 10min分離血漿,置 -20℃保存至測定。采用 3p87藥代動力學程序擬合,顯示藥-時曲線符合單劑量一級吸收一室模型,C=18.7042e(-0.3136t)-18.7042e(-1.1216t);t時間體內(nèi)的代謝物量 M=18.7042;藥物自體內(nèi)消除一級速度常數(shù) Kel=0.3136;表觀一級吸收速率常數(shù) Ka=1.1216;單劑量給藥后的最高血藥濃度Cmax=18.7042;單劑量給藥后出現(xiàn)最高血藥濃度的時間即峰時 tp=1.5772;藥物從中央室消除的半衰期 t1/2K el= 2.2098;藥物的吸收半衰期 t1/2K a=0.6179;血藥濃度-時間曲線下總面積 AUC=76.3199;滯后期 t0=0.1346。

2.7 組織分布研究

18只健康小鼠,雌雄各半,體質(zhì)量25g左右,按上述劑量及給藥方法 ,分別于背部給藥后的 0.5、1、 1.5、 2、3、 4h采血并立即處死,迅速取出心、肝、脾、肺、腎每個時間點3只動物 ,分別按樣品處理方法處理后進樣,測定各時間點組織中頭孢呋辛鈉的濃度。見表1。

表1 各組織中藥物濃度(± s,μg˙g-1)。

表1 各組織中藥物濃度(± s,μg˙g-1)。

3 討論

小鼠單次背部推注1000mg/kg頭孢呋辛鈉后,血藥濃度上升迅速,又在很短的時間內(nèi)下降,體內(nèi)分布快而廣。t1/2K a=0.6179h,說明藥物在小鼠體內(nèi)消除快。心臟、肝臟、脾、肺、腎臟藥物濃度測定結果說明,隨血藥濃度的下降,各組織中藥物濃度也下降,總趨勢一致,但組織中藥物濃度下降滯后于血藥濃度,3h時血藥濃度已低于檢測限,而3h時組織藥物濃度仍可達一定的水平。實驗結果表明,頭孢呋辛鈉在體內(nèi)主要以原形經(jīng)腎臟排泄,在組織中分布較廣。

[1] 中華人民共和國藥典委員會編.中華人民共和國藥典〔S〕.2000年版,二部,2000,177

[2] 劉又寧,余秉翔,方向群,等.氟氧頭孢對呼吸道感染療效的臨床觀察 [J].中國抗生素雜志,1996,21(2):105-108

[3] Bundtzen R W,Toothaker R D,Nielson O S,et al.Pharmacokinetics of cefuroxime in normal and imparied renal function:comparison of high pressure liquid chromatography and microbiological assays[J].Antimicrob Agents Chemother,1981,19:443-446

[4] Lovering A M,Perez J,Bowker K E,et al.A comparison of the penetration of cefuroxime and cephamandole into bone,fat and haematoma fluid in patients undergoing total hip replacement[J].J Antimicrob Chemother,1997,40(1):99-102

[5] Deguchi K,Yokota N,Koguchi M,et al.Antimicrobial activities of cefuroxime against recent clinical isolates[J].J Antibiot,1994,47:365-368