青藤堿對實驗性多柔比星腎病大鼠尿蛋白、IL-6影響的研究

王麗敏,王麗娜,趙志新,鄒艷紅,聶 磊

(佳木斯大學附屬第一醫院兒科,黑龍江 佳木斯 154007)

微小病變型腎病綜合征(MCNS)是腎病綜合征常見的病理組織類型,但其病因及發病機制尚未完全明了。白細胞介素6(IL-6)是參與免疫調節和炎癥反應的重要細胞因子之一[1]。現已證實 ,腎臟系膜細胞、上皮細胞和腎小管上皮細胞都可分泌 IL-6,IL-6能通過旁分泌或自分泌形式與腎小球系膜細胞上的 IL-6受體結合,能促進腎臟系膜細胞增多和基質增生,使腎小球濾過膜增厚,最終導致腎小球硬化[2]。青藤堿(SIN)作為一種免疫抑制劑主要用于治療風濕性疾病,本研究通過制備大鼠多柔比星腎病模型,模擬人類 MCNS檢測 IL-6在 MCN S大鼠中的異常表達和分布及青藤堿對其影響,探討 IL-6在 MCNS特別是蛋白尿發生中的可能作用。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及分組

雄性 Wistar大鼠50只,由佳木斯大學動物實驗中心提供,體重 100～ 130g。隨 機 分為正常 組 (n= 10)、腎病組(n=40)。參照王崢等[3]方法給予腎病組一次性尾靜脈注射多柔比星5mg/kg,正常組一次性尾靜脈注射0.9%生理鹽水5mg/kg。收集所有大鼠24h尿液,進行24h尿蛋白定量檢測,尿蛋白＞30mg/24h為模型成功。將模型成功的腎病大鼠隨機分成2組:腎病對照組、治療組。治療組給予青藤堿36mg/kg˙d灌胃。腎病對照組及正常組給予等量生理鹽水灌胃。于注射多柔比星后7、14、28、42d分別留取大鼠尿液進行24h尿蛋白檢測,收集一部分尿液離心取上清液凍存以備做 IL-6的檢測,第42天處死所有大鼠。留取左腎,進行組織學病理觀察。

1.2 方法

1.2.124 h尿蛋白測定

分別于第6,13,27,41天將大鼠置于代謝籠收集24h尿液,采用考馬斯亮藍法檢測其24h尿蛋白定量。

表1 各組大鼠不同時期尿蛋白定量比較(±s,mg/24h)

表1 各組大鼠不同時期尿蛋白定量比較(±s,mg/24h)

*與正常組比較 P＜0.01;△與腎病對照組比較 P＜0.01。

1.2.2 腎組織及尿液中 IL-6檢測

IL-6檢測采用酶聯免疫吸附法(ELISA法)。試劑盒購于武漢博士德生物公司,嚴格按說明書操作,冷凍尿液及腎組織勻漿標本均于常溫下再次以2000r/min離心10min后使用,選取 7個標準孔,另加空白對照和質控,在 450nm波長用空白對照管校零讀取吸光值,繪制標準曲線,計算尿及腎組織中 IL-6的濃度,結果以 pg/mL˙cr表示。

1.3 統計學處理

2 結果

2.1 各組大鼠24h尿蛋白定量

腎病組大鼠尿蛋白排泄量逐漸增加,較正常組及治療組比較差異有統計學意義 (P＜0.01),見表1。

2.2 各組大鼠不同時期尿液中 IL-6含量

腎病組大鼠尿 IL-6的表達與正常組及治療組相比差異具有統計學意義 (P＜0.01),見表2。

2.3 腎組織中 IL-6含量

腎病組與正常組及治療組相比差異具有統計學意義(P ＜ 0.01),見表3。

表3 各組大鼠42d腎組織中 IL-6表達(±s,pg/mL˙cr)

表3 各組大鼠42d腎組織中 IL-6表達(±s,pg/mL˙cr)

*與正常組比較 P＜0.01;△與腎病對照組比較 P＜0.01。

表2 各組大鼠不同時期尿 IL-6含量(± s,pg/mL˙cr)

表2 各組大鼠不同時期尿 IL-6含量(± s,pg/mL˙cr)

*與正常組比較 P＜0.01;△與腎病對照組比較 P＜0.01。

2.4 相關分析

腎病組尿蛋白排泄量與尿中 IL-6的表達呈正相關(r= 0.795,P ＜0.01)。尿蛋白排泄量與腎組織中 IL-6的表達呈正相關 (r= 0.761,P＜0.01)。腎組織及尿中 IL-6的表達呈正相關 (r= 0.813,P＜0.01)。

3 討論

IL-6是具有多種生物學活性的刺激因子,其作為機體復雜的細胞因子網絡中的重要成員,在一些疾病的發生發展中起著關鍵作用。本實驗結果顯示腎病組在注射多柔比星7d后尿液中 IL-6的表達逐漸升高 ,42d達高峰 ,24h蛋白尿量在各時期表達與正常組相比均有顯著性差異 (P＜0.01),尿液中及腎組織中 IL-6的濃度與24h蛋白尿量均呈正相關(P ＜0.01),且尿液中 IL-6的表達與腎組織中 IL-6的表達也呈正相關 (P ＜0.01)。治療組尿液、腎組織中 IL-6及尿蛋白也不同程度的增加,但較腎病組為低。已有研究證實,腎臟系膜細胞、腎小球上皮細胞和間質細胞等均可產生IL-6,且 IL-6在腎臟局部又能刺激系膜細胞增殖并分泌其他細胞因子和膠原等并進而影響疾病進展[4]。在病理情況下,這些細胞 IL-6產生增多 ,參與腎臟病理生理過程,并從尿中排出。這也解釋了在尿 IL-6增高的 MCNS患者中,大量蛋白尿的發生率較高,腎臟病理改變程度較重的原因。這與本實驗研究結果相一致。本實驗較好模擬了人類 MCNS,并發現 IL-6表達的變化規律及其與蛋白尿的關系,為進一步研究 IL-6在人類腎臟疾病中的作用提供了理論依據。綜上所述,我們認為腎臟局部 IL-6的變化與腎小球及小管-間質病變的發生及發展有密切的聯系。而青藤堿能有效抑制腎組織及尿液中 IL-6的表達 ,減輕 MCNS大鼠尿蛋白、保護腎功能,促進腎臟病理損害的修復。

[1] 田彬,范伏元.健脾益腎顆粒劑對脾腎陽虛型慢性腎炎患者尿 IL-6水平的影響 [J].湖南中醫藥大學學報,2008,28(4):50-52

[2] Mora C,Navarro JF.Inflammation and diabetic nephropathy[J].Curr Diab Rep,2006,6(6):463-468

[3] 王崢,王增貴,劉震,等.多柔比星誘發大鼠腎病模型的實驗研究[J].華西醫科大學學報,1990,21(4):430-432

[4] 楊森,陳雙峰,劉偉,等.T細胞亞群、IL-6在 IgA腎病患者扁桃體摘除術后的應用價值 [J].醫學檢驗與臨床,2007,18(2):53-54