規(guī)模豬場(chǎng)豬呼吸道綜合征相關(guān)病原感染的病原學(xué)調(diào)查

馬萬(wàn)里，張紹軍，王麗霞，徐賀靜，韓慶安

(1.河北省唐海縣第九農(nóng)場(chǎng)，河北唐山 063208；2.唐山市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，河北唐山 063004；3.遷安市委農(nóng)工部, 河北遷安 0644002;4.河北省唐山市路南區(qū)農(nóng)經(jīng)局，河北唐山 063000；5.河北省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心, 河北保定 071000)

豬呼吸道疾病綜合征(PRDC)是由一種或多種細(xì)菌、病毒、加上環(huán)境應(yīng)激所引起的混合感染，通常由細(xì)菌、病毒或支原體首先侵入豬的呼吸道，破壞豬的呼吸道防疫屏障后，其它氣源性病菌乘隙進(jìn)入豬的呼吸系統(tǒng)，造成繼發(fā)感染，故可將病原分為原發(fā)性病原和繼發(fā)性病原。原發(fā)性病原有豬肺炎支原體(M.H)、支氣管敗血波氏桿菌(B.B)、豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)、偽狂犬病毒(PRV)、豬流感病毒(SIV)、豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌(APP)、豬圓環(huán)病毒2型(PCV-2)、豬瘟病毒(CSFV)、豬呼吸道冠狀病毒(PRCV)等；繼發(fā)性病原有豬鏈球菌(S.S)、多發(fā)性巴氏桿菌(Pm)、副豬嗜血桿菌(HPS)、豬附紅細(xì)胞體(EH)等。本研究通過(guò)對(duì)PRDC發(fā)病豬群進(jìn)行病原分離和鑒定，旨在掌握2004-2007年河北省規(guī)模豬場(chǎng)PRDC的主要病原，并預(yù)測(cè)未來(lái)發(fā)展趨勢(shì)，為有目的、有重點(diǎn)地開展PRDC的綜合防控提供參考，從而減少其對(duì)豬群的危害。

一、材料與方法

(一)材料

1.試驗(yàn)豬場(chǎng)及豬群。樣本采自全市17個(gè)縣(市、區(qū))68個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)(其中大型規(guī)模豬場(chǎng)14個(gè)，中型規(guī)模豬場(chǎng)16個(gè)，小型規(guī)模豬場(chǎng)38個(gè))的豬呼吸道疾病綜合征發(fā)病豬群。其中采集病料最多是仔豬群(哺乳仔豬和保育豬)，共46個(gè)；其次為育肥豬群， 共22個(gè)，種豬群(生產(chǎn)母豬和種公豬)最少，共11個(gè)。

2.病原學(xué)樣本。采集病死豬的血液，腦組織，淋巴結(jié)，胸、腹腔積液，肺臟、肝臟、腎臟、脾臟、心臟等內(nèi)臟器官，用于病毒、細(xì)菌和寄生蟲的檢測(cè)。

3.試劑及菌株。CSFV RTPCR檢測(cè)試劑盒、PRRS RT-PCR檢測(cè)試劑盒、PRV PCR檢測(cè)試劑盒、PCV2 PCR檢測(cè)試劑盒，均由北京愛(ài)德士元亨生物科技有限公司生產(chǎn)。麥康凱瓊脂板、巧克力瓊脂板、鮮血(5%綿羊血)瓊脂板、三糖鐵瓊脂斜面按常規(guī)方法配制。肝素購(gòu)自保定化學(xué)試劑公司；微量生化發(fā)酵管購(gòu)自杭州天和微生物試劑有限公司；NAD購(gòu)自北京鼎國(guó)生物科技發(fā)展中心；金黃色葡萄球菌株由河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)科院微生物實(shí)驗(yàn)室保存。

4.主要儀器。電子天平、真空干燥器、電泳槽、微波爐、組織研磨器、-20℃冰箱、Eppendorf可調(diào)移液器、Heraeus臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)、Biometra PCR基因擴(kuò)增儀、UVP紫外凝膠成像處理系統(tǒng)、Tanon EPS100型電泳儀(北京六一儀器廠)、Forma Scientific CO2培養(yǎng)箱。

(二)方法 病毒性病原體采用PCR或RT-PCR方法，細(xì)菌性病原采用培養(yǎng)、分離鑒定方法，寄生蟲通過(guò)染色鏡檢方法進(jìn)行檢測(cè)。

陽(yáng)性率統(tǒng)計(jì)以豬場(chǎng)為單位，只要從該豬場(chǎng)采集的組織、血樣等樣本中檢測(cè)到病原，則判斷該豬場(chǎng)感染該病原。場(chǎng)陽(yáng)性率為20%以上的病原體為該規(guī)模場(chǎng)PRDC的主要病原。

二、結(jié)果

結(jié)果見(jiàn)表1、表2和表3。

三、分析與討論

唐山地區(qū)規(guī)模豬場(chǎng)4年來(lái)PRRSV、PCV-2、APP、E.coli(大腸桿菌)、和EH場(chǎng)陽(yáng)性率基本呈逐年上升，CSFV呈逐年下降趨勢(shì)；PRV前三年呈逐年上升，第四年呈下降趨勢(shì)，且下降明顯；Sal.(沙門氏菌)在2006-2007年、CSFV和PRV在2004-2005年、Tpl(弓形蟲)在2004年對(duì)規(guī)模豬場(chǎng)的危害較大；而Pm、S.S和HPS對(duì)規(guī)模豬場(chǎng)危害不大。雖然E.coli在2005-2007年，Sal.(沙門氏菌)在2006-2007年為主要病原，但是它們不是原發(fā)性病原，是繼發(fā)病原。主要是因?yàn)樗鼈兌嗍菑陌l(fā)病中晚期的豬群病料中分離到的，而在發(fā)病早期的豬群病料中很少檢測(cè)到，所以唐山地區(qū)規(guī)模豬場(chǎng)PRDC主要病原是PRRSV、PCV2、APP和EH。

4年來(lái)，唐山地區(qū)共調(diào)查發(fā)病的規(guī)模豬場(chǎng)68個(gè)，其中小型規(guī)模豬場(chǎng)最多，為38個(gè)，占55.88%；其次為中型規(guī)模豬場(chǎng)，為16個(gè)，占23.53%；大型規(guī)模豬場(chǎng)最少，為14個(gè)，占20.59%。調(diào)查PRDC發(fā)病豬群共79個(gè)，其中仔豬群最多，為46個(gè)，占58.23%；其次為育肥豬群，共22個(gè)，占27.85%；種豬群最少，共11個(gè)，占13.92%。這表明規(guī)模豬場(chǎng)PRDC發(fā)病率同豬場(chǎng)規(guī)模呈負(fù)相關(guān)，同豬群類型有明顯相關(guān)性。

表1 2004-2007年唐山地區(qū)PRDC病原學(xué)調(diào)查場(chǎng)陽(yáng)性率(%)

表2 2004-2007年不同類型規(guī)模豬場(chǎng)PRDC病原學(xué)調(diào)查場(chǎng)陽(yáng)性率(%)

表3 不同類型病原體混合感染情況

2004-2007年，唐山地區(qū)多病原混合感染的規(guī)模豬場(chǎng)所占比率分別 為 84.61%、94.44%、95.65% 和100%。2004年，規(guī)模豬場(chǎng)主要以三病原和四病原混合感染為主，到2007年時(shí)，則發(fā)展到以四病原、五病原和六病原及以上混合感染為主。多病原混合感染主要以病毒性病原體之間和病毒性與非病毒性病原體之間混合感染為主，也出現(xiàn)非病毒性病原體之間的混合感染現(xiàn)象，但所占比率不大。

全國(guó)PRDC發(fā)病豬場(chǎng)多病原混合感染現(xiàn)象比較普遍。蒙雪瓊等(2006)、覃紹敏等(2007)調(diào)查結(jié)果 表 明，SIV與 PRRSV、CSFV、PCV2、PRV的混合感染還是比較常見(jiàn)。徐輝等(2007)等認(rèn)為，浙江省2007年“豬高熱病” 是以PRRSV為主要病原或誘因所致的CSFV、PCV2和PRV等多病原混合感染的綜合性傳染病；而陳義祥等(2005)調(diào)查表明，PRRSV感染在廣西豬場(chǎng)已普遍存在，與其他病毒混合感染現(xiàn)象逐漸趨向復(fù)雜化。楊宗照等(2006)的研究表明，2004年杭州地區(qū)3個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)陸續(xù)發(fā)生的仔豬腹瀉、保育豬呼吸困難的疾病，是由豬瘟合并PRRSV和PCV2感染造成的。

總之，唐山地區(qū)規(guī)模豬場(chǎng)病原學(xué)調(diào)查PRDC主要病原是PRRSV、PCV2、APP和EH，為今后防控的重點(diǎn)。

略)