補腦養(yǎng)心顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的改進

馮金輝

（湖南省長沙市第一醫(yī)院分院藥劑科，湖南 長沙 410011）

補腦養(yǎng)心顆粒是由五味子、生曬參、丹參片藥材制成的中藥復(fù)方制劑，適用于各種慢性疾病引起的頭昏眼花、心煩意亂、記憶力減退、納差腹脹、小便頻數(shù)、疲倦無力等。由于五味子與南五味子性狀相差較大，所含化學(xué)成分也有差異，同時在價格上相差數(shù)倍[1-2]，故常有廠家或個人將南五味子冒充五味子使用。而補腦養(yǎng)心顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究中僅對生曬參、五味子進行了定性鑒別。為準(zhǔn)確地鑒別出五味子，筆者參照有關(guān)文獻[3-5]，采用高效液相色譜法測定了補腦養(yǎng)心顆粒中五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素的含量，并進行了方法學(xué)研究，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

LC10AVP高效液相色譜儀；JCX-100G型超聲波清洗機（濟寧超聲電子儀器廠）。補腦養(yǎng)心顆粒（本院藥劑科提供，批號分別為CY080628，CY080702，CY080705，CY080708，CY080711）；五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號分別為 110857-200608，110764-200408，110765-200609）；水為超純水（北京普析通用儀器公司）；甲醇為色譜純；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱：Hypersil BDS C18柱（200 mm ×4.6 mm，5μm）；流動相：甲醇 -水（75 ∶25）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：251 nm；柱溫：30℃；進樣量：10μL。理論塔板數(shù)按五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素峰計算均應(yīng)不低于2000。色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.2 溶劑制備

精密稱取五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素對照品適量，加甲醇制成每1 mL分別含52.5，15.7，39.5μg的混合溶液，即得混合對照品溶液。取裝量差異下的樣品，研細，取約3 g，精密稱定，置50 mL量瓶中，加入甲醇約40 mL，超聲處理30 min，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。取缺五味子藥材的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

線性關(guān)系考察：精密吸取質(zhì)量濃度為52.5，15.7，39.5μg/mL的混合對照品溶液 2.5，5，7.5，10，15，20μL，注入液相色譜儀，記錄峰面積，以進樣量為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素的回歸方程分別為 Y=88683 X+9999.4（r=0.9993），Y=30886 X-1978.6（r=0.9994），Y=60652 X+9325.9（r=0.9990）。結(jié)果表明五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素對照品進樣量分別在0.131～1.05 μg，0.039～0.314 μg，0.099～0.79 μg范圍內(nèi)與峰面積具有良好的線性關(guān)系。

精密度試驗：精密吸取混合對照品溶液，連續(xù)重復(fù)進樣測定，結(jié)果五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素峰面積積分值的 RSD分別為 2.09% ，1.78%1.85%（n=6）。

穩(wěn)定性試驗：精密吸取同一批（批號為CY080708）供試品溶液，分別于配制后 0，4，8，12，16，20 h 進樣測定，結(jié)果五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素峰面積積分值的 RSD分別為2.42%，2.05%，1.94%（n=6），表明供試品溶液在20 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

重現(xiàn)性試驗：分別精密稱取同一批（批號為CY080708）樣品共6份，每份約3 g，精密稱定，依法制備供試品溶液并測定。結(jié)果五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素含量的 RSD分別為2.45%，3.01%，2.86%（n=6），表明方法重現(xiàn)性良好。

加樣回收試驗：取已知五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素含量分別為0.038%，0.011%，0.026%的樣品（批號為CY080708）約1.5 g，共6份，精密稱定，精密加入三者質(zhì)量濃度分別為52.5，15.7，39.5 μg/mL 的混合對照品溶液各 8，10，12 mL，同一量級平行操作2份，按供試品溶液制備方法制備溶液，并按上述色譜條件測定含量，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果（n=6）

2.3 樣品含量測定

分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，照上述色譜條件測定，用外標(biāo)法計算。結(jié)果批號為CY080628，CY080702，CY080705，CY080708，CY080711 的樣品中，每 2.5 g 分別含五味子醇甲 1.05，0.95，0.88，0.95，0.83 mg，含五味子甲素 0.32，0.30，0.35，0.28，0.28 mg，含五味子乙素 0.72，0.70，0.70，0.65，0.63 mg（n=2）。

3 討論

為簡化操作，供試品溶液的制備曾采用超聲處理和加熱回流的方法進行處理[6-9]。結(jié)果采用超聲處理方法制成的供試品溶液提取完全、雜質(zhì)峰少，采用加熱回流方法則雜質(zhì)干擾較多，故用超聲處理法。曾取五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素混合對照品溶液，照分光光度法[2005年版《中國藥典（一部）》附錄Ⅴ A]在200～400 nm波長范圍內(nèi)進行掃描，結(jié)果五味子醇甲在213，251，280 nm波長處有吸收，五味子甲素在214，251，287 nm波長處有吸收，五味子乙素在218，252，285 nm波長處有吸收。3種成分均在251 nm波長處有最大吸收，故選擇251 nm作為測定波長。

曾對流動相中有機相進行了甲醇、乙腈的選擇，將有機相與水相按不同比例進行調(diào)整，經(jīng)試驗，以甲醇-水（75∶25）為流動相時，樣品中的混合色譜峰達到了基線分離，峰形對稱性好。但3個成分中五味子乙素峰對稱度不好，經(jīng)多次試驗也未能調(diào)整過來。在確定含量限度時，考慮到五味子的產(chǎn)地不同、采收季節(jié)不同等因素可能導(dǎo)致成分之間比例不同，不能因某個含量不合格就確定為產(chǎn)品不合格，經(jīng)研究考慮，在3個成分峰共同存在的前提下，以五味子木脂素類（包含五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素）的含量限度作為本制劑的含量限度。

本法為補腦養(yǎng)心顆粒的質(zhì)量控制提供了準(zhǔn)確、簡便的方法，從而有效控制了偽品五味子在本制劑的應(yīng)用，使患者的用藥安全得到了保障。

[1]李曉光，羅煥敏.南五味子屬植物化學(xué)成分及其活性研究進展[J].中國中藥雜志，2003，28（12）：1120-1125.

[2]楊月妍.五味子南五味子及易混偽品鑒別[J].實用中醫(yī)內(nèi)科雜志，2008，22（2）：70.

[3]李 攀，楊 帆，萬 麗.高效液相色譜法測定生脈片中五味子醇甲含量[J]. 中國藥業(yè)，2007，16（22）：33-34.

[4]田德娟，付麗杰，王軍麗.高效液相色譜法測定采力神安康口服液中五味子甲素含量[J]. 中國藥業(yè)，2008，217（24）：28.

[5]李奉勤，史冬霞，張瑞紅，等.五味子中五味子乙素提取工藝研究[J]，中國藥業(yè)，2006，15（7）：46.

[6]徐良梅，燕昌江，李建平，等.高效液相色譜法測定北五味子提取物中五味子甲素和乙素含量[J].分析儀器，2008（2）：15-17.

[7]周 莉，張羅紅，劉 華.HPLC法測定復(fù)方天麻顆粒中五味子醇甲的含量[J]. 現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2008，24（12）：1775-1776.

[8]趙艷玲，孔維軍，山麗梅，等.HPLC法測定南北五味子中五味子甲素和五味子酯甲的含量[J]. 中藥新藥與臨床藥理，2008，19（4）：299-301.

[9]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：89.