褐環(huán)粘蓋牛肝菌液體發(fā)酵研究*

薛振文 應(yīng)國華 呂明亮 李伶俐 何小菲

(1.浙江省麗水市林業(yè)科學(xué)研究院,麗水 323000;2.麗水市大山菇業(yè)研究開發(fā)有限公司,麗水 323000;3.麗水市林業(yè)局,麗水 323000)

褐環(huán)粘蓋牛肝菌 (Suillus luteus)是一種優(yōu)良的菌根食用菌,對油松具有很好的促生長作用[1],在國內(nèi)廣泛分布,是我國出口創(chuàng)匯的野生食用菌之一。麗水市林業(yè)科學(xué)研究院食用菌研究所從2001年開始承擔(dān)市、省級多個牛肝菌科技研究項目,包括褐環(huán)粘蓋牛肝菌菌種分離[2]、液體培養(yǎng)、生態(tài)學(xué)[3]、野生促繁[4]、人工栽培技術(shù)[5]等。褐環(huán)粘蓋牛肝菌液體培養(yǎng)及菌劑制作是實現(xiàn)其人工栽培產(chǎn)業(yè)化的基礎(chǔ)。現(xiàn)將液體培養(yǎng)研究報告如下。

1 材料與方法

1.1 供試菌株 麗水市林業(yè)科學(xué)研究院食用菌研究所保藏。

1.2 培養(yǎng)基 配方:①ME培養(yǎng)基,②ME+輔料100 g,③ME+輔料50g,④ME+輔料25g,⑤ME+懸浮劑1,⑥ME+懸浮劑2。

1.3 液體培養(yǎng)條件試驗設(shè)置 母種設(shè)平板培養(yǎng)6天、10天、14天、18天4個菌齡梯度。裝液量設(shè)150 mL、250 mL、350 mL、450 mL 4個梯度。接種量設(shè)2 cm2/瓶、4 cm2/瓶、6 cm2/瓶、8 cm2/瓶 4個梯度。接種塊形態(tài)設(shè)整塊與碎塊2個。培養(yǎng)方法采用靜置培養(yǎng)2天后搖床培養(yǎng)和直接搖床培養(yǎng)2種。除試驗特指外,培養(yǎng)條件均為500 mL三角瓶中分裝320 mL液體培養(yǎng)基,接種量為2 cm2/瓶,25℃、150 r/min振蕩培養(yǎng)14天后處理。

1.4 菌絲體生物量測定 用濕重法測定:取發(fā)酵液過濾至不再有液體滴出,在分析天平上精確稱重。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌株液體培養(yǎng)的生長規(guī)律 以時間為橫坐標(biāo),菌絲濕重為縱坐標(biāo)作液體培養(yǎng)曲線圖 (圖1)。

圖1 菌株生長曲線

將圖1分為3個生長期:①緩慢生長期 (6～10天),接種后,平板中的菌絲體對新的液體環(huán)境需要逐漸適應(yīng),生長緩慢。緩慢生長期的長短與菌種的菌齡、長勢、培養(yǎng)基的理化性質(zhì)和培養(yǎng)條件有關(guān)。②快速生長期 (10～14天)。緩慢生長期后菌絲體已適應(yīng)了新的培養(yǎng)環(huán)境,進入快速生長期。液體培養(yǎng)過程中菌株的生長包括菌球體積的增大和數(shù)量的增多2個方面。過大的菌球里面的菌絲活力減弱,因而要適當(dāng)控制搖床的轉(zhuǎn)速,促使菌球的數(shù)量增多。③停滯生長期 (14～22天)。快速生長期后,培養(yǎng)基中養(yǎng)分耗盡、氧氣缺乏和代謝產(chǎn)物積累,使菌絲細(xì)胞不能再進行正常的生長而進入停滯階段。這一時期,菌絲量基本不增加,顏色逐漸變黃,菌球開始老化。

2.2 不同試驗處理對菌絲生長的影響 菌絲量是衡量試驗結(jié)果好壞的主要指標(biāo)之一,對不同試驗結(jié)果采用DPS統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理,結(jié)果見表1。

表1 不同培養(yǎng)條件下褐環(huán)粘蓋牛肝菌菌絲生長量

(1)不同培養(yǎng)基對菌絲生長的影響。由表1可知,不同培養(yǎng)基的菌絲生長量差異達到極顯著水平,說明選擇適宜的培養(yǎng)基對菌絲生長至關(guān)重要。處理5與其他處理間的差異都達顯著水平,按菌絲體濕重由高到低排序為:處理5＞處理2＞處理3＞處理4＞處理1＞處理6。可見配方5是褐環(huán)粘蓋牛肝菌的適宜培養(yǎng)基。

(2)母種菌齡對菌絲生長的影響。從表1看,不同菌齡的母種的菌絲生長量有明顯差異,其中處理8與處理9、處理7和處理10間存在顯著差異。按菌絲體濕重由高到低排序為:處理8＞處理9＞處理7＞處理10。表明選擇10天菌齡的母種進行接種培養(yǎng)是較適宜的。

(3)不同接種量對菌絲生長的影響。從表1可以看出,不同接種量的菌絲生長量按菌絲體濕重由高到低排序為:處理14＞處理13＞處理12＞處理11。處理14與處理13、處理13與處理12之間無顯著差異,處理11與其他處理間的差異均達極顯著水平。隨著接種量的增加,菌絲量增大,但菌球有衰老現(xiàn)象。因此接種量宜選擇4 cm2/瓶。

(4)不同形態(tài)接種塊對菌絲生長的影響。不同形態(tài)接種塊對菌絲生長量的影響不大 (表1)。但接種整塊省時省力、效果較好,可供選用。

(5)不同培養(yǎng)方法對菌絲生長的影響。試驗結(jié)果表明,兩種不同培養(yǎng)方法對菌絲生長的影響較大,差異達到極顯著水平。菌絲體濕重:處理17＞處理18(表1),表明采用先靜置培養(yǎng)2天后再搖床培養(yǎng)的方法是可取的。

(6)不同裝液量對菌絲生長的影響。不同裝液量對菌絲量的影響較大。按菌絲體濕重由高到低排序為:處理21＞處理20＞處理22＞處理19,其中處理19與處理22間無顯著差異,其余各處理間差異均為極顯著,并以裝液量350 mL/瓶的菌絲產(chǎn)量最高 (表1)。

3 結(jié) 論

褐環(huán)粘蓋牛肝菌液體培養(yǎng)可分為3個階段:緩慢生長期 (0～10天)、快速生長期 (10～14天)和停滯生長期 (14～22天)。褐環(huán)粘蓋牛肝菌液體培養(yǎng)14天后菌絲濕重達到18.71 g,菌球的活力較強,而后進入停滯生長期,雖然菌絲量有所增加,但菌球和沉積在壁上的菌絲體顏色逐漸變黃,說明菌球開始老化,菌絲活力減弱。因此在液體培養(yǎng)14～18天內(nèi)收獲,不僅菌球活性好,而且菌絲量也較大,是最理想的收獲階段。

以配方ME+懸浮劑1培養(yǎng)菌絲,菌絲量較大,達36.37 g。母種菌齡為10天的菌絲量大。接種量與菌絲生長量呈正相關(guān);由于液體中營養(yǎng)成分是有限的,不能容納過多的菌絲體繁殖,所以接種量以4 cm2/瓶的培養(yǎng)效果最好,表現(xiàn)為菌球白色,活力強,菌絲生長量較大。不同形態(tài)接種塊對菌絲量的影響不顯著。采用靜置培養(yǎng)2天后搖床培養(yǎng)的方法培養(yǎng)效果較好,菌絲生長量大。褐環(huán)粘蓋牛肝菌裝液量為350 mL/瓶的培養(yǎng)效果較好,菌絲生長量較大。

[1]姚慶智,閆 偉.菌根接種在油松育苗中生長效應(yīng)的研究[J].干旱區(qū)資源與環(huán)境,2005,19(3):185～188.

[2]應(yīng)國華,呂明亮,陳連慶.褐環(huán)粘蓋牛肝菌菌種分離研究 [J].林業(yè)科學(xué)研究,2004,17(1):66～71.

[3]應(yīng)國華,呂明亮,陳奕良,等.褐環(huán)粘蓋牛肝菌生態(tài)學(xué)特性研究[J].林業(yè)科學(xué)研究,2005,18(3):267～273.

[4]應(yīng)國華,呂明亮,馮福娟,等.褐環(huán)粘蓋牛肝菌菌塘復(fù)壯及增產(chǎn)技術(shù)研究 [J].中國食用菌,2006,25(4):18～21.

[5]應(yīng)國華,呂明亮,李伶俐,等.褐環(huán)粘蓋牛肝菌人工栽培技術(shù)研究 [J].中國食用菌,2009,28(5):14～15.