羊蹄總皂苷的提取及抗炎作用研究

劉力豐,王 尚

(1.長春中醫藥大學附屬醫院,吉林長春130021;2.長春中醫藥大學,吉林長春130117)

羊蹄為蓼科植物羊蹄(Rumex japonicus Houtt.)的干燥根。據《全國中草藥匯編》記載有清熱解毒、止血、通便、殺蟲之功,主治鼻出血,功能性子宮出血,血小板減少性紫癜,慢性肝炎,肛門周圍炎,大便秘結;外用治外痔,急性乳腺炎,黃水瘡,皮癬等。主要含有蒽醌類：大黃酚、大黃素、大黃素甲醚等;同時還含有鞣質等成分[1]。但對其所含皂苷類成分研究較少,故本課題以羊蹄為原料,對其皂苷類成分提取工藝進行系統研究,為最終深入了解羊蹄這一藥用植物資源奠定基礎。

1 儀器與試藥

UV-1700型分光光度計(日本島津);BP211D電子天平(德國賽多司);烘箱;水浴鍋;真空泵;超凈工作臺(CJ-1)。羊蹄(采于吉林長白縣);齊墩果酸對照品(含量測定用,中國藥品生物制品鑒定所);Wistar雄性大鼠,購自長春高新醫學動物實驗研究中心,體重200～240 g。昆明種小鼠18～20 g,雌雄均用,購自吉林大學基礎醫學院動物實驗中心。

2 方法與結果

2.1 羊蹄總皂苷的提取 稱取羊蹄粉末200 g,置5 000 mL圓底燒瓶中,加乙醚2 000 mL浸泡2次,每次1 h,過濾,殘渣揮盡乙醚后加70%乙醇2 000 mL,在80℃水浴中回流提取2次,合并2次提取液,減壓回收乙醇,殘渣加蒸餾水500 mL溶解,溶液上D101大孔樹脂,分別用水、30%乙醇、70%乙醇洗脫,棄去蒸餾水與30%乙醇洗脫部分,收集70%乙醇洗脫部分,回收乙醇,殘渣加蒸餾水300 mL溶解,溶液用水飽和正丁醇萃取3次,每次500 mL,棄去水層,合并正丁醇層,將正丁醇溶液60℃減壓干燥即得羊蹄總皂苷干品。

2.2 羊蹄總皂苷含量的測定[2]

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取齊墩果酸對照品2.0 mg,置10 mL的容量瓶中,加70%乙醇溶解并定容至刻度,備用。

2.2.2 樣品溶液的制備 稱取羊蹄總皂苷60 mg,置100 mL容量瓶中,加70%乙醇溶解并定容至刻度,備用。

2.2.3 測定波長的選擇 吸取對照品溶液0.5 mL于10 mL具塞試管中,沸水浴中揮干,依次加入新配制的10%香草醛-冰醋酸溶液0.2 mL,高氯酸0.8 mL,搖勻,于70℃水浴中加熱15 min取出,冰水浴中冷卻后加入冰醋酸5 mL,混勻,以相應試劑為空白,在400～600 nm波長范圍內測定其吸收波長。同法測定羊蹄總皂苷吸收波長。二者最大吸收均為554 nm,故選擇測定波長為554 nm。

2.2.4 標準曲線的繪制 精密吸取對照品溶液0.1,0.2,0.3,0.4,0.5 mL,置10 mL具塞試管中,照 2.2.3項下自“沸水浴中揮干”起,于554 nm測定吸光度,以齊墩果酸溶液濃度(C)為橫坐標,吸光度(A)為縱坐標,繪制標準曲線,得回歸方程為：A=59.324C-0.0023,r=0.999 5(n=5)。結果表明齊墩果酸在3.333～16.667 μ g/mL范圍內與吸光度呈良好的線性關系。

2.2.5 樣品含量測定 取樣品溶液,在554 nm處測定吸光度,將吸光度帶入標準曲線,線性回歸法計羊蹄總皂苷含量。實驗結果表明,羊蹄總皂苷含量為64.3%。

2.3 羊蹄總皂苷的抗炎作用實驗 取大鼠30只,隨機分為3組：對照組,0.2 g/kg陽性藥阿司匹林組,0.521 g/kg受試藥給藥組。連續給藥5 d,于末次給藥1 h后于大鼠右后足腱膜下注入0.05%角叉菜膠0.20 mL/只,然后于注射后1,2,3,4,5,6 h測其足腫脹(先于注射前測正常大鼠足周長),比較正常足值之差作為腫脹度。結果表1。

表1 對大鼠角叉菜膠性足腫脹的影響

從上表可知,與對照組相比受試物中劑量組對大鼠角叉菜膠性足腫脹有極顯著性差異。

3 討論

本文采用回流法提取羊蹄總皂苷,同時采用D101大孔樹脂、水飽和正丁醇有機溶劑萃取等方法純化所得總皂苷,最終含量達到64.3%,明顯提高總皂苷有效部位的含量。該方法簡便易行,是提取皂苷類成分的常用方法,同時對設備要求低,實驗室操作簡單。本實驗首次定量測定了羊蹄總皂苷的對大鼠角叉菜膠性足腫脹消炎的活性,實驗結果證實對大鼠角叉菜膠性足腫脹抗炎作用較為明顯。此結果為該植物的開發、利用提供了科學依據和物質基礎。

[1]鄭永慶,陳萬生.中藥羊蹄化學成分的研究(Ⅰ)[J].第二軍醫大學學報,2000,21(10)：910-913.

[2]騰燕平,張玉梅,劉穎,等.分光光度法測大豆總皂苷含量[J].中國食品衛生雜志,2000,12(4)：10-13.