花卉害螨的采集和玻片標本的制作

張麗芳，瞿素萍，劉忠善，王繼華

（1.云南省農業科學院質量標準與檢測技術研究所，云南昆明650205；2.云南出入境檢驗檢疫局技術中心，云南昆明650228；3.云南省農業科學院花卉研究所，云南昆明650205）

花卉害螨屬于節肢動物門，蛛形綱(Arachnida），蜱螨亞綱(Acari），具有個體小、繁殖快、適應性強、易爆發成災等特點。園林花卉上的害螨分布廣泛，種類很多，其中葉螨以危害葉片為主，成螨、若螨密集群居于受害葉片背面刺吸汁液，并吐絲結網，被害葉現白斑，輕的葉片枯黃，遠看似火燒，危害重的全株枯死。害螨包括柑橘全爪螨PanonychuscitriMcGregor、 朱 砂 葉 螨 Tetranychus cinnabarinus Boisduva1、二斑葉螨Tetranychus urticae Koch等常見種類。癭螨危害嫩葉幼梢、花，造成畸形或葉面粗糙，變黑褐色或銹色，有的形成蟲癭或毛氈，還傳播植物病毒，造成更大損失。粉螨主要種類有羅賓根螨Rhizoglyphus robini Claparede和刺足根螨Rhizoglyphus echinopus(Fumouze et Robin）等，刺吸塊根球莖，造成腐爛干癟，影響地上部植株的生長[1-2]。我國危害園林花卉的螨類有100多種，其中危害較重的有40多種。現代蜱螨學的發展在歐洲是從19世紀末20世紀初才開始的，Kramer，Megin等人的工作對蜱螨學研究提供了基礎，但是其分類現在還是處于開始發展時期[3]，有人認為現在蜱螨分類的混亂程度恰如100年前昆蟲分類的情況。筆者介紹花卉害螨的采集和玻片標本的制作方法，以供螨類工作者和相關人員參考。

1 標本采集

采集葉片，葉芽和枝條上的螨類一般用拍打法，用毛筆或小木棒敲擊枝葉，使螨類墜落于鋪在下方的白紙或者白布上，或直接用毛筆輕刷受害部位，然后將其置入盛有75%酒精的小瓶中。該螨類一般很柔軟，必須細心處理，避免損壞螨體，而且常有多種不同螨類混雜，在鑒定時需雌雄個體，所以采集數量要盡量多。為確認寄主植物，不混雜其他螨類，也可先將枝葉用塑料袋套入后再敲擊，塑料袋要有細小的通風口，否則寄主植物容易產生水蒸氣，使螨粘滿塑料袋。

有些螨類隱藏在蟲癭、毛氈中，采集時應特別注意褐化、畸形的部份和色澤淡的毛氈，需要注意的是，蟲癭里不僅有癭螨，而且還會有昆蟲，應注意區分。危害輕的只需剪取葉片受害組織，發生重的可直接摘取被害葉，連螨和寄主一起放浸漬液（配方：95%酒精75 mL，蒸餾水20 mL，白糖添加至飽和，取澄清液備用）中保存。

塊根球莖上的螨類由于會混雜有栽培基質，數量不多時，不易發現，可采用水浮法把土壤放在水或食鹽飽和溶液中使螨類上浮進行收集。大量繁殖，數量較多時直接用肉眼就可看到有很多粉狀小白點，借助放大鏡，仔細觀察，就會發現小白點在移動，此時可用毛筆粘水，直接挑取，置入盛有75%酒精的小瓶中。

采集前應準備好采集瓶和保存液。采集到的樣本必須貼上正規的標簽，寫明采集時間、地點、蟲體顏色、寄主植物及生長周期、周邊環境及采集人等情況。

2 玻片標本的制備

花卉害螨體軀特別細小，為了便于觀察和永久保存，制作清晰透明和形態完好的玻片標本十分重要。

2.1 永久性玻片標本的制作

2.1.1 軟化及除去體內物質 將害螨在5%的氫氧化鈉（NaOH）或氫氧化鉀（KOH）溶液中煮沸5～10 min，柔軟、色淡的只需在溶液中冷浸數5～7 h即可。在煮或浸之前，可在蟲體不重要的地方用細針刺1個小孔，以便溶去蟲體內物質。處理完畢后，倒去堿液，用清水充分清洗標本。

2.1.2 染 色 用清水充分清洗后即可用洋紅溶液染色，染色可以深一些，因在下一步脫水過程中還要退去一些，變得淡一點。

2.1.3 脫 水 用不同濃度的酒精由低濃度到高濃度 30%，50%，70%，80%，85%，90%，95%，100%（無水酒精）逐步除去標本中的水分，最后放入二甲苯中。每次在不同濃度的酒精中浸5～10 min，無水酒精浸2次，第二次浸的時間可短一些，約2 min即可。然后將標本移入二甲苯液中進行透明，如二甲苯呈現混濁現象，說明標本脫水未凈，需再回到無水酒精中處理，至完全脫水為止。

2.1.4 封 片 將在二甲苯液中經過透明的標本移到洗凈的載玻片的中心處，滴上中性樹膠，滴膠的量依標本及玻片的大小而定，然后慢慢的蓋上蓋玻片。玻片制好后放入45～50℃溫箱中烘干，待中性樹膠完全干固后，才可貼上正確標簽，移出保存。

2.2 臨時玻片標本的制作

制作臨時玻片標本的目的，是為了較快地鏡檢，現做現用。通常是配制一種不必經過脫水，標本就能封片的膠，常用水溶性的封固液水含氯醛膠，其配方是：阿拉伯樹膠15 g，甘油10 mL，水含氯醛100 g，蒸餾水25 mL，此法具有螨體透明迅速，簡便易行的優點。制備臨時玻片標本時，先取一滴膠液置于潔凈的載玻片中央，用吸管吸取保存液中的標本至濾紙上，用蘸有膠液的解剖針，從濾紙上粘取標本至膠滴中，蓋上蓋玻片，然后放在酒精燈上加熱至沸騰，螨體即伸展透明。玻片制好后放入40～50℃烘箱中烘烤3～5周，貼上標簽即可。

3 討論

花卉害螨采集最適宜的時間是高溫干旱的季節，此時發生危害重，繁殖快，種類多，很容易采到大量標本，不過有時為了研究，也需要在不同季節或者是同一季節的不同時間，對同種植物觀察和采集若干次。隨著溫室大棚花卉周年種植的發展，任何季節都可采集到花卉害螨，更方便了花卉害螨的種類研究。標本制作過程中將二甲苯液中經過透明的標本移到洗凈的載玻片的中心處時，可以先用吸管吸取二甲苯液中的標本至濾紙上，用粘有膠液的解剖針從濾紙上迅速粘取標本至膠滴中，操作起來相對要容易一些，也可以直接用挑針挑取至膠滴中。總之，螨類由于蟲體特別細小，制作標本較困難，各個步驟都很關鍵，需要熟練的操作，不斷積累經驗，才能制作出完美的玻片標本。

[1] Diaz A,Okabe K,Eckenrode C J,et al.Biology,ecology,and management of the bulb mites of the genusRhizoglyphus(Acari:Acaridae）[J].Experimental and Applied Acarology,2000,(24）:85-113.

[2] Fan Q H,Zhang Z Q.Revision of Rhizoglyphus Claparède(Acari:Acaridae）of Australasia and Oceania[M].London:Systematic&Applied Acarology Society,2004.374.

[3] 忻介六.農業螨類學[M].北京：農業出版社，1988.2-5.

[4] 中國科學院中國動物志編輯委員會.中國經濟昆蟲志 [M].北京：科學出版社，1995.13-16.