正交試驗法優選清熱明目顆粒的水提工藝

河北省邢臺市眼科醫院制劑室 楊存愛 (邢臺 054001)

正交試驗法優選清熱明目顆粒的水提工藝

河北省邢臺市眼科醫院制劑室 楊存愛 (邢臺 054001)

目的:優選清熱明目顆粒的最佳水提工藝。方法:應用 L9(34)正交試驗,以浸泡時間、加水量、提取時間、提取次數為考察因素,每個因素取 3個水平,并以黃芩苷含量和干浸膏重量為考察指標,進行回流提取,減壓濃縮,優化提取條件。結果:3因素浸泡時間 A、加水量 B、提取時間 C影響顯著,而提取次數 D影響不顯著。結論:清熱明目顆粒的最佳制粒工藝條件為 A1B2C2D2。即浸泡 1 h,加 8倍量水,回流提取 1.5 h,提取 2次。

清熱明目顆粒;正交試驗;黃芩苷;水提工藝

清熱明目顆粒為我院純中藥復方制劑,由龍膽、黃芩、地黃、大黃、石膏、知母、天花粉、蘆根、金銀花等多味中藥制成,具有清熱解毒,消翳明目的作用,用于治療急慢性葡萄膜炎、視網膜炎、急慢性結膜炎和各類角膜炎,療效顯著。其中黃芩為方中君藥,黃芩苷為其主要活性成分。本制劑采用水提取,減壓濃縮制備濃縮藥液,經噴霧制粒而成。為發揮藥物的最佳療效,優化制備工藝,本實驗采用正交試驗對其提取參數進行優化,以浸泡時間、加水量、提取時間、提取次數為考察因素,以黃芩苷含量和干浸膏重量為考察指標,從而確定了清熱明目顆粒的最佳水提工藝條件,為工業化大生產提供依據。

1 材料

大連依利特高效液相色譜儀,十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱 (4.6 mm×200 mm,5μm);P230高壓恒流泵,UV230紫外 -可見檢測器;黃芩苷對照品 (中國藥品生物制品檢定所,批號 715-20001,供含量測定用);SNGT-12型全能真空干燥提取器 (湖南衡陽市雁翔制藥設備廠);101-1型電熱鼓風干燥箱 (上海陽光實驗儀器有限公司);中藥飲片 (邢臺百順康)甲醇為色譜純;其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 因素和水平的確定 根據浸提理論與預試驗,選定浸泡時間 (A)、加水量 (B)、提取時間 (C)、提取次數(D)為考察因素,每個因素取 3個水平,結果見表1,并以黃芩苷含量和干浸膏重量為綜合考察指標,設計正交試驗。

表1 因素水平表

2.2 提取工藝 根據因素水平表,采用 L9(34)進行正交試驗,按處方比例稱取 9份藥材,分別用水提取,過濾除渣,減壓濃縮至適量,分別定容至 250mL,所得水煎液為供試品溶液。并測定供試品溶液黃芩苷的含量及干浸膏的重量。

2.3 干浸膏重量的計算 精密量取供試品溶液 50mL于已干燥至恒重的蒸發皿中,水浴蒸干,再于 105℃烘箱中干燥 3 h,置干燥器中冷卻 30 min,迅速稱重,記錄干浸膏重量,結果見表2。

2.4 高效液相色譜法測定黃芩苷的含量[3]

2.4.1 色譜條件:色譜柱:C18柱 (4.6 mm×200 mm,5 μm);檢測波長:280 nm,流速:1.0mL/min;流動相:甲醇 -水 -磷酸 (47∶53∶0.2);進樣量:20μL。在上述色譜條件條件下,分別取對照品溶液和樣品溶液及陰性樣品溶液進樣。所得色譜圖,黃芩苷與相鄰其他組分峰分離完全,分離度為 12.43,保留時間為 23.10 min,理論塔板數為 26 860.35,陰性樣品無干擾。

2.4.2 對照品溶液:精密稱取黃芩苷對照品 15 mg,置50mL量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,作為貯備液,再精密量取 1mL置 10mL量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,即得含黃芩苷為 30μg/mL的對照品溶液。

2.4.3 樣品溶液:精密量取供試品溶液 5mL(相當于2.5 g顆粒)置 50mL量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,用 0.45 nm膜過濾,作為樣品溶液。

2.4.4 陰性樣品溶液:按處方比例制備缺黃芩的陰性樣品,依“2.4.3”項下制備陰性樣品溶液。

2.4.5 線性關系考察:分別精密量取對照品貯備液 0.6、1.0、1.4、1.8、2.2mL置 10mL量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,即得每 1mL含黃芩苷 18、30、42、54、66μg的對照品溶液。各精密量取 20μL進樣,以上述色譜條件進行測定。以峰面積 (Y)與對照品質量 (X)進行線性回歸,得黃芩苷的回歸方程為 Y=88.75X-136.8(r=0.9 994,n=5),線性范圍為 18～66μg/mL;結果表明,黃芩苷在相應范圍內線性關系良好。

2.4.6 精密度試驗:精密量取 “2.4.2”項下的對照品溶液,按上述色譜條件重復進樣 5次,黃芩苷峰面積積分值的 RSD為 0.36%。

2.4.7 重復性試驗:取同一樣品溶液 6份,按 “2.4.3”項下方法制備樣品溶液,以上述色譜條件測定黃芩苷的峰面積,計算含量,RSD分別為 0.38%。

2.4.8 穩定性試驗:精密量取同一樣品溶液,分別于0、2、4、6、8、10 h進樣 1次,測定含量,結果表明,在10 h內黃芩苷的含量均無明顯變化,RSD分別為 0.42%。

2.4.9 加樣回收率試驗:精密稱取黃芩苷對照品 183.5 mg置 50mL量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,再精密量取 5mL置 50mL量瓶中加甲醇稀釋至刻度,搖勻,作為測回收率對照品溶液備用;精密量取已知含量的供試品溶液 2.5mL 9份,分別置 50mL量瓶中,再精密加入上述對照品溶液適量,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,用 0.45 nm膜過濾,測定含量,進行回收率試驗,結果平均回收率為 100.8%,RSD為 0.48%。

2.4.10 黃芩苷含量的計算:分別精密量取供試品溶液5mL,以 “2.4.3”項下方法制備樣品溶液,計算供試品溶液的黃芩苷含量,結果見表2。

2.5 結果 分別記錄黃芩苷含量和干浸膏重量,進行綜合評分,對綜合評分結果進行統計學處理,結果見表3。

表2 水提工藝正交試驗結果分析表

表3 水提工藝方差分析

分析結果表明,各因素對水提工藝的影響程度依次為B>C>A>D,其中浸泡時間、加水量、提取時間對提取工藝有顯著影響,而提取次數提取結果無顯著影響。經直觀比較分析,同時結合生產實際,優選出最佳水提工藝為A1B2C2D2,即用 8倍量水浸泡 1 h,回流提取 2次,每次1.5 h。

2.6 工藝驗證試驗 按處方稱取各藥材 3份,按選定的最佳工藝條件A1B2C2D2采用全能真空干燥提取器進行提取中試,平行制備 3份樣品,測得黃芩苷的平均含量為 382 mg/mL,平均干浸膏重量為 2.75 g?？梢?按最佳工藝提取有效成分含量處于較高水平,證明該工藝合理,重復性強。

3 討論

①評價指標[2-3]:因黃芩為清熱明目顆粒的君藥,黃芩苷為其有效成分,是主要指標成分,所以在綜合評分中,黃芩苷含量與干浸膏重量按 7∶3權重比來考察提取效果。并且評分時以各指標最大值為參數將數據進行歸一化,采用加權方式綜合評定,使評價指標更趨于合理化。②色譜條件:本實驗以甲醇 -水 -磷酸 (47∶53∶0.2)為流動相測定黃芩苷含量,峰形好,分離度好,簡單易行。③優選工藝:本實驗采用L9(34)正交設計優選出清熱明目顆粒的最佳水提工藝為:用 8倍量水浸泡 1 h,回流提取 2次,每次 1.5 h。該工藝穩定可靠,可作為該制劑工業化生產的依據。

[1]中華人民共和國藥典委員會 .中國藥典 (一部) [S].北京:化學工業出版社,2005.318

[2]周瀅,張勝,曹佩雪,等 .石斛明目膠囊藥材水煎醇沉工藝的正交試驗 [J].中國醫院藥學雜志,2009,29(10):785-787

[3]樊莉,周世文,李聃丹,等 .正交試驗法優選黃芪天麻膠囊的提取工藝 [J].中國醫院藥學雜志,2009,29(7):525-528

(2010-02-26 收稿)

R 284.2

B

1007-5615(2010)02-0037-02