市售蔬菜中原花青素的提取與測(cè)定

楊曉輝，汪嶺，馬燕

（寧夏醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院，寧夏銀川750004）

市售蔬菜中原花青素的提取與測(cè)定

楊曉輝，汪嶺，馬燕

（寧夏醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院，寧夏銀川750004）

通過2種不同的方法對(duì)市售各種蔬菜中的原花青素進(jìn)行提取,并測(cè)定提取液中原花青素的含量,確定各種蔬菜中原花青素含量高低的規(guī)律，并比較了2種提取方法的提取效果。用75%的乙醇溶液作為提取劑，按照料液比為1∶9.14的比值分別在室溫和70℃的恒溫水浴中提取30 min后，采用紫外分光光度法測(cè)定提取液中原花青素的含量。結(jié)果：采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量測(cè)定提取液中原花青素含量，原花青素在3.1 μg/mL～31 μg/mL濃度范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，其回歸方程為A=0.00341+0.0081C，R=0.99866，且方法的精密度良好（RSD=0.24%），平均回收率在94.6%～101.2%之間，符合分析方法要求。原花青素含量基本按照顏色越淺，含量越低，顏色越深紫，含量越高的規(guī)律變化，且適當(dāng)?shù)募訜崮苁乖ㄇ嗨氐奶崛「浞帧?/p>

原花青素；提取；測(cè)定

Abstract:Proanthocyanidins in vegetables of the market was extracted through two different methods and determinated to determine the rule of content of proanthocyanidins in market vegetables,and to compare the two extraction methods for its effect.Proanthocyanidins was determinated by ultraviolet spectrophotometry after it was extracted by 75%ethanol at room temperature and 70 degrees of temperature in water-bath for 30min,the extration parameters was that 1∶9.14 of the rate of vegetables to 75%ethanol.The linear region was 3.1 μg/mL-31 μg/mL,the regression equation was A=0.00341+0.0081C,regression coefficient was 0.99866.The average recovery ratio(n=3)was between 94.6%and 101.2%,RSD=0.24%.Thus the method was applied to determine proanthocyanidins and obtained a good result.The rule of the content of proanthocyanidins was“color is light,the lower levels,the darker purple,content is higher”.And it was proved that heating could make extraction more fully.

Key words：proanthocyanidins；extraction；determination

原花青素（proanthocyanidins簡(jiǎn)稱PC）是植物中廣泛存在的一大類多酚類化合物的總稱，這類化合物的基本組成單元是兒茶素基和表兒茶素基[1]。原花青素具有清除自由基、抗氧化、保護(hù)心血管及美容、抗衰老等作用[2]，是一種最有效的天然抗氧化劑，據(jù)權(quán)威部門研究證實(shí)，原花青素是目前科學(xué)界發(fā)現(xiàn)的防治疾病，維護(hù)人類健康最直接、最有效、最安全的天然水溶性自由基清除劑，其清除自由基的能力是VC的20倍，VE的50倍[3]，且吸收迅速完全，口服20 min即可達(dá)到最高血液濃度，代謝半衰期達(dá)7 h之久，尤其是其體內(nèi)活性，更是其它抗氧化劑無法比擬的，它還能防治80多種因?yàn)樽杂苫鸬募膊4]。原花青素在營養(yǎng)保健、化妝品、食品、醫(yī)藥等領(lǐng)域中應(yīng)用越來越廣泛，具有較高的商品價(jià)值和較為廣闊的市場(chǎng)前景。市場(chǎng)所銷售的大多數(shù)蔬菜中含有豐富的原花青素，可采用紫外分光光度法、薄層層析法、HPLC法、HPLC-MS等方法測(cè)定[1]。

通過2種不同的方法對(duì)市售各種蔬菜中的原花青素進(jìn)行提取,并采用紫外分光光度法測(cè)定提取液中原花青素的含量,確定了各種蔬菜中原花青素含量高低的規(guī)律，并比較了兩種提取方法的提取效果，為人們選擇抗氧化型的蔬菜提供了理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料、儀器與試劑

1.1.1 試驗(yàn)材料

各種市售新鮮蔬菜：紫芯蘿卜、番茄、茄子、胡蘿卜、紫皮土豆、紫洋蔥、南瓜、紫甘藍(lán)、紅辣椒。

1.1.2 儀器與試劑

1.1.2.1 儀器

AL-204梅特勒分析天平：鄭州南北儀器設(shè)備有限公司；Donlim東菱XB-9186豆?jié){機(jī)：廣東新寶電器股份有限公司；HH.SY21-Ni電熱恒溫水浴鍋：北京長(zhǎng)源實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠；LXJ-Ⅱ型離心沉淀機(jī)：漣水電訊電機(jī)廠；UV-9100型紫外分光光度計(jì)：北京第二光學(xué)儀器廠。

1.1.2.2 試劑

原花青素標(biāo)準(zhǔn)品；無水乙醇；蒸餾水。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

準(zhǔn)確稱取干燥的原花青素標(biāo)準(zhǔn)品0.0031 g，用無水乙醇溶解后，準(zhǔn)確定容至10 mL，搖勻，制得濃度為0.31 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液。分別精密移取上述標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液 0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL 至 10 mL 比色管中，用75%的乙醇溶液準(zhǔn)確定容至刻度，得到濃度分別為 0、3.1、6.2、12.4、18.6、24.8、31 μg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。

1.2.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的確定

以75%的乙醇溶液為空白，用上述標(biāo)準(zhǔn)系列溶液中濃度為12.4 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在波長(zhǎng)250 nm~310 nm之間測(cè)定其吸光度值，繪制吸收曲線，求其最大吸收波長(zhǎng)λmax，作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

1.2.3 樣品的預(yù)處理

將市售的9種新鮮蔬菜清洗干凈后，分別用榨汁機(jī)榨汁（在榨汁過程中不加入任何溶液）成勻漿后，分別準(zhǔn)確稱取10.0 g于9個(gè)燒杯中，再分別量取75%的乙醇溶液91.4 mL[5]倒入其中，于室溫下攪拌提取30 min。另取9個(gè)燒杯以同樣的方法量取樣品和提取液后于70℃恒溫水浴中攪拌提取30 min。最后，將各燒杯中提取后的溶液在離心沉淀機(jī)上以1000 r/min-3000 r/min遞增的速度離心5 min，各取其上清液，在紫外分光光度計(jì)上測(cè)定其吸光度值。

1.2.4 標(biāo)準(zhǔn)系列與樣品的測(cè)定

以75%的乙醇溶液為空白，在1.2.2所得的最大吸收波長(zhǎng)處測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)系列溶液與1.2.3所得樣品的吸光度值，繪制吸光度-濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出回歸方程，并依據(jù)回歸方程計(jì)算各樣品中原花青素含量。

2 結(jié)果與討論

2.1 吸收曲線和最大吸收波長(zhǎng)（λmax）

以75%的乙醇溶液為空白，在250 nm~310 nm范圍內(nèi)測(cè)定濃度為12.4 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度值，繪制吸收曲線，結(jié)果見圖1。

由圖1可知，原花青素在286 nm處有最大吸收，與文獻(xiàn)[6]相符，故選定286 nm作為測(cè)定波長(zhǎng)。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線和回歸方程

繪制標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的吸光度-濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖2所示。

結(jié)果表明，所測(cè)原花青素在3.1 μg/mL~31 μg/mL濃度范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，符合比爾定律，其回歸方程為 A=0.00341+0.0081C，R=0.99866。

2.3 方法的精密度

按照70℃恒溫水浴加熱進(jìn)行樣品提取處理，用紫外分光光度計(jì)測(cè)定其吸光度值，此法平行做5次，5次測(cè)定的RSD=0.24%，說明本方法的精密度良好。

2.4 樣品的加標(biāo)回收率

在待測(cè)樣中分別加入 6.2、12.4、18.6 μg原花青素標(biāo)準(zhǔn)溶液（31 μg/mL），測(cè)定其含量并計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

表1 樣品加標(biāo)回收率（n=3）Table 1 Results of recovery test(n=3)

由表1可見，平均回收率在94.6%～101.2%之間，符合分析方法要求。

2.5 測(cè)定結(jié)果

在上述同樣條件下測(cè)定兩種不同提取方法下9種蔬菜中原花青素的含量，測(cè)定結(jié)果如表2所示。

表2 不同提取方法下9種蔬菜中原花青素含量Table 2 The contents of proanthocyanidins in vegetables under two different extraction conditions

從表2中可以看出，9種蔬菜相比較而言，顏色較淺的南瓜、番茄、胡蘿卜，其原花青素含量較低，而顏色較為深紫的紫心蘿卜、紫甘藍(lán)、紅辣椒中原花青素含量相對(duì)較高，原花青素含量基本按照顏色越淺，含量越低，顏色越深紫，含量越高的規(guī)律變化，這也與文獻(xiàn)[7]所述的“顏色越深的蔬菜抗氧化性越強(qiáng)”相符。

另外，由表2中數(shù)據(jù)可見，同一蔬菜中70℃恒溫水浴提取所得的原花青素含量明顯高于室溫下提取所得的原花青素含量，由此可得，70℃恒溫水浴提取原花青素效果較好，說明適當(dāng)?shù)募訜崮苁乖ㄇ嗨氐奶崛「浞帧?/p>

3 結(jié)論

通過2種不同的方法對(duì)各種蔬菜中的原花青素進(jìn)行提取,并采用紫外分光光度法測(cè)定提取液中原花青素的含量,確定了各種蔬菜中原花青素含量高低的規(guī)律，并比較了2種提取方法的提取效果，為人們合理選擇抗氧化型的蔬菜提供了理論依據(jù)。

[1]董瑞霞,李立祥,邢志強(qiáng),等.茶籽殼原花青素提取參數(shù)優(yōu)化[J].食品與發(fā)酵工業(yè)，2007，33(12)：240

[2]許麗梅,杜永峰,姚秉化.分光光度法測(cè)定葡萄籽中原花青素的含量[J].食品科技,2008(5)：216-219

[3]劉春輝,周亞平,祝軍，等.蘋果果肉中原花青素超聲波的輔助浸提[J].食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào),2008,27(1)：80-83

[4]董瑞霞,李立祥,張桂敏,等.茶籽殼中原花青素提取工藝參數(shù)的研究[J].安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2008,35(2)：243-245

[5]徐懷德,閆寧環(huán),陳偉,等.黑莓原花青素超聲波輔助提取優(yōu)化及抗氧化性研究[J].農(nóng)業(yè)工程學(xué)報(bào),2008,24(2)：264-269

[6]肖付才,李華,王華.葡萄籽原花青素的提取和檢測(cè)方法[J].食品研究與開發(fā),2007,28(6)：165-169

[7]劉仕蕓.馬鈴薯花青素候選轉(zhuǎn)錄激活基因的克隆與分析[D].華南熱帶農(nóng)業(yè)大學(xué),2007：2-3

Extraction and Determination of Proanthocyanidins in Vegetables of the Market

YANG Xiao-hui,WANG Ling,MA Yan
（College of Public Health，Ningxia Medical University，Yinchuan 750004，Ningxia,China）

2010-06-22

寧醫(yī)面上項(xiàng)目（XM200629）

楊曉輝（1979—），女（漢），講師，碩士，主要從事分析化學(xué)和衛(wèi)生檢驗(yàn)。