《中藥制劑分析》氣相色譜法含量測定的實驗教學改進※

王術玲 曾元兒 張 迪 謝佳穎 廣州中醫藥大學中藥學院（510006）

《中藥制劑分析》氣相色譜法含量測定的實驗教學改進※

王術玲 曾元兒 張 迪 謝佳穎 廣州中醫藥大學中藥學院（510006）

目的 建立適合教學用的氣相色譜法測定中藥制劑中有效組分含量的學生實驗。方法 采用SE-30彈性交聯石英毛細管柱，FID檢測器，以水楊酸甲酯為內標物，測定十滴水中樟腦的含量。結果 氣化室溫度為230℃；柱溫為120℃保持5min，以10℃/min升至160℃，保持2min；檢測室溫度為250℃。結論 本文建立的方法經濟、簡便、準確，可作為實驗教學用。

中藥制劑分析；氣相色譜；實驗教學；十滴水；樟腦

有部分中藥以揮發性物質為主要藥效成分，如冰片、薄荷等，對于含有揮發油及其他揮發性有效組分的中藥制劑，往往需采用氣相色譜法測定其含量。因此中藥制劑分析的實驗教學中一般都會開設氣相色譜法測定某制劑中某成分的含量，但由于氣相色譜法穩定性和重復性較差，學生實驗用的氣相色譜儀器精確度不高，加之所用色譜柱一般是低極性的（如SE-30），對成分的選擇性差，分離度不好，因此選擇合適的中藥制劑才能保證好的教學效果。本教學小組多年來一直致力于此方面的教學改革[1]，先后嘗試過牛黃解毒片中冰片的測定、六味地黃丸中丹皮酚的測定，效果均不理想。經過多次預試驗，本文認為開設十滴水中樟腦的含量測定較為適宜。因為2010版《中國藥典》收載十滴水中樟腦的含量測定使用PEG-20M毛細管柱[2]，而我院現有學生實驗用毛細管柱為SE-30，使用藥典條件不能很好地實現成分分離，因此需要通過實驗重新建立新的色譜條件。

1 儀器與材料

氣相色譜儀GC9800（上海科創），N2000色譜工作站（浙大智達），FID檢測器。樟腦對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：747-200005）；桉油精對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：0788-9202）；十滴水樣品（廣西廣明制藥，批號100101、100302、100501）；其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱：SE-30石英毛細管柱（30m×0.53mm，0.5μm）；氣化室溫度：230℃；FID檢測器溫度：250℃；載氣：N2（流量為0.05MPa）；進樣量：1μl；定量方法：內標法。實驗中考察了兩種內標物：內標物為水楊酸甲酯時，柱溫為120℃保持5min，以10℃/min升至160℃，保持2min；內標物為環己酮時，柱溫為80℃保持3min，以5℃/min升至90℃，再以20℃/min升至150℃，保持5min[4]。

在上述兩種色譜條件下，十滴水樣品中樟腦、桉油精及內標物的色譜峰與樣品中其他成分色譜峰均達到基線分離，見圖1、圖2。由圖可知，水楊酸甲酯的保留時間在樟腦和桉油精之后，與樟腦保留時間相近；環己酮的保留時間在樟腦和桉油精之前，與樟腦相離較遠。因此，本文選擇水楊酸甲酯為內標物。

圖1 水楊酸甲酯為內標的氣相色譜圖

圖2 環己酮為內標的氣相色譜圖

2.2 溶液配制

2.2.1 內標溶液 取水楊酸甲酯適量，精密稱定，加70%乙醇制成每1ml含40mg的溶液，作為內標溶液。

2.2.2 對照品溶液 取樟腦對照品約250mg，精密稱定，置10ml量瓶中，加70%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 供試品溶液 取十滴水10支混勻，精密量取1ml，置10ml量瓶中，精密加入內標溶液1ml，加70%乙醇至刻度，搖勻，即得。

2.3 線性范圍 精密移取對照品溶液0.2ml、0.5ml、1ml、2ml、3ml置10ml量瓶中，各瓶精密加入1ml內標溶液，用70%乙醇稀釋至刻度，搖勻。分別吸取1μl，注入氣相色譜儀。以樟腦與內標物的峰面積之比為縱坐標Y，樟腦濃度為橫坐標X，得Y = 0.5212X + 0.0245，r＞0.999，線性范圍0.5019 mg/ml～7.5285mg/ml。

2.4 校正因子測定 精密吸取2.3項下的第三份對照品溶液（含樟腦2.5095mg/ml、水楊酸甲酯4.0916mg/ml）1μl，注入氣相色譜儀，按上述色譜條件測定，連續測定5次，計算樟腦的校正因子f，結果為：f = 0.5987， RSD=1.8%。

2.5 重復性試驗 取同一批樣品（廣西廣明制藥，批號100101）5份，按2.2.3項方法制備供試品溶液，進樣1μl，測得樟腦含量為27.74mg/ml，RSD=1.8%（n=5）。結果表明重復性良好。

2.6 穩定性試驗 取重復性試驗項下的同一份供試品溶液，于制備后的0，2，4，6，8h分別進樣1μl，計算樟腦與內標物的峰面積之比，RSD=1.2%。表明待測成分在8小時內穩定。

2.7 回收率實驗 精密量取5份己知含量的同一批樣品（廣西廣明制藥，批號100101）0.5ml，分別置10ml量瓶中，精密加入對照品溶液0.5ml，精密加入內標溶液1ml，用70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，按樣品測定方法測定。結果回收率為96.7%，RSD=2.0%。

2.8 樣品測定 取3批樣品，按2.2.3項方法制備供試品溶液分別吸取1μl，注入氣相色譜儀，按上述色譜條件測定樟腦的含量，結果見表1。

表1 十滴水中樟腦的含量 （n=2，mg/ml）

3 討論

我院《中藥制劑分析》開設了6個實驗，4個驗證性實驗，1個綜合性實驗，1個設計性實驗[4]。設計性實驗要求學生掌握含量測定的方法學考察，實驗成本較高，尤其是加樣回收率試驗需要大量對照品。本著不影響教學效果同時降低學生實驗成本的原則，我們選擇氣相色譜法測定十滴水中樟腦的含量做為設計性實驗[5]。十滴水一盒1.5元，共10支，可供20組學生用，并且其中的樟腦含量大，易于檢測，樟腦對照品比較便宜。我們用文中所述方法檢測市面買來的分析純的樟腦化學合成品（250g，30元），以面積歸一化法計算，純度達到98%以上，且在本文所建線性范圍內進樣，未見到雜峰，因此可考慮做為實驗教學用對照品，特別是用做回收率試驗可解決實驗成本問題。

文中所述色譜條件采用了程序升溫，可以同時檢測到桉油精和樟腦兩個成分的色譜峰。我們也做過試驗，在正文所述儀器條件下設置柱溫為130℃或140℃，樟腦和水楊酸甲酯均達到基線分離，保留時間均在10min左右，相差約1min，完全滿足含量測定要求。因此在教學過程中可根據實際需要，靈活設置柱溫，可采用恒溫（130℃或140℃），也可采用正文所述的程序升溫。

[1] 王術玲,曾元兒.中藥制劑分析教學中開展討論課初探[J].藥學教育,2007, 23(5):45-47.

[2] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典·2010年版.一部[S].北京:中國醫藥科技出版社,2010:421-422.

[3] 盧華,張國宏,蔣受軍,等.氣相色譜法測定十滴水中樟腦和桉油精含量的研究[J].中成藥,2008,30(7):997-999.

[4] 崔永霞,謝彩俠,白雁.“中藥制劑分析"實驗教學模式的改革[J].實驗室研究與探索,2009,28(10):106-107,135.

[5] 王翰華,夏苗芬,姚彤煒,等.高職基于工作過程導向的中藥制劑分析課程設計[J].中國高等醫學教育,2010,(3):118-119.

Reform of Experimental Teaching on Gas Chromatography Determination in the Course of Analysis of Chinese Medicinal Preparations

Wang Shuling，Zhang Di, Xie Jiaying （School of Pharmaceutical Sciences，Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou 510006，China）

Object To establish a method to determine effective components in chinese medicinal preparations by gas chromatography for experimental teaching. Methods SE-30 capillary collumn and flame ionization detector were used to determine camphor in shidi water with methyl salicylate as the internal standard substance. Results The temperature of injector and detector was 230℃ and 250℃ respectively. The initial temperature of the column was set at 120℃, held for 5 min, then raised to 160℃ at 10℃/min, and held at 160℃for 2 min. Conclusion This method is economical, convinient and precise and can be used for experimental teaching.

Analysis of Chinese Medicinal Preparations；Gas chromatography；Experimental Teaching；Shidi Water；Camphor

10.3969/j.issn.1672-2779.2010.23.034

1672-2779（2010）-23-0043-02

廣州中醫藥大學成人教育基金 [No：JJYJ0915]

2010-09-10）