兩株橡膠多主棒孢霉對(duì)12種殺菌劑原藥的敏感性

楊 葉, 王蘭英, 張 宇, 胡加來

(海南大學(xué)環(huán)境與植物保護(hù)學(xué)院,儋州 571737)

橡膠棒孢霉落葉病菌侵染巴西橡膠樹后,可造成葉片反復(fù)大量脫落,嫩梢和枝條回枯,甚至植株死亡,危害嚴(yán)重時(shí)橡膠樹的產(chǎn)量損失可達(dá)20%。該病1958年在印度橡膠苗圃首次發(fā)現(xiàn),至今,已在亞太和非洲主要天然橡膠生產(chǎn)國(guó)流行危害,并有不斷加重之勢(shì)[1-2]。我國(guó)于2006年和2007年分別在云南和海南首次在苗圃和幼齡樹上發(fā)現(xiàn)了橡膠樹棒孢霉落葉病,后來在成齡樹上也發(fā)現(xiàn)該病危害[3-4]。其病原菌為多主棒孢霉[Corynespora cassiicola(Berk&Curt.)Wei],除寄生于橡膠樹外,還寄生多種作物,寄主范圍廣泛。該病害在橡膠樹發(fā)病初期不易被發(fā)現(xiàn),待大量發(fā)病流行時(shí)進(jìn)行防治往往為時(shí)已晚。此外,我國(guó)橡膠種植區(qū)的氣候等條件適宜該病害的發(fā)生,存在暴發(fā)流行的可能性,因此該病對(duì)我國(guó)天然橡膠產(chǎn)業(yè)的發(fā)展存在很大的威脅。

為了有效控制橡膠棒孢霉落葉病的危害,國(guó)外開展了一系列藥劑篩選及防治的研究,推薦較好的藥劑有多菌靈、甲基硫菌靈和代森錳鋅等[1,5]。針對(duì)國(guó)內(nèi)發(fā)現(xiàn)的橡膠棒孢霉落葉病菌,陳照和謝昌平等人曾分別進(jìn)行了殺菌劑的室內(nèi)篩選研究[6-7],但供試藥劑均為商品制劑而非原藥,商品制劑因?yàn)閬碓床煌仍蛲嬖谝欢ǖ牟町?同時(shí)在后續(xù)研究如進(jìn)行藥劑混配及加工等方面需采用殺菌劑原藥展開試驗(yàn)。因此,作者參考現(xiàn)有的研究結(jié)果及各種文獻(xiàn)報(bào)道,并針對(duì)不同作用機(jī)理及不同作用方式的殺菌劑原藥,對(duì)分別來自海南和云南的兩株C.cassiicola進(jìn)行室內(nèi)毒力測(cè)定,使測(cè)定結(jié)果更具代表性,旨在為指導(dǎo)生產(chǎn)上合理選擇藥劑提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 供試菌株

橡膠樹棒孢霉落葉病菌[多主棒孢霉病菌Corynespora cassiico la(Berk&Curt.)Wei]A 14和CF23兩個(gè)菌株,分別分離自海南和云南,由中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院環(huán)境與植物保護(hù)研究所提供。

1.1.2 供試藥劑

97.2%百菌清(chlorothalonil)、94%嘧菌酯(azoxystrobin)、98%抑霉唑(imazalil)、96%戊唑醇(tebuconazole)和98%代森錳鋅(m ancozeb)為新沂市騰上工業(yè)助劑有限公司產(chǎn)品。97.5%腈菌唑(myclobutanil)、97.1%三唑酮(triadimefon)、95%溴菌腈(bromothalonil)、98%多菌靈(carbendazim)和96.2%甲基硫菌靈(thiophanate-methy l)為石家莊濟(jì)泰三沐農(nóng)藥化工有限公司產(chǎn)品。92%異菌脲(ip rodione)為安林生物化工有限公司產(chǎn)品。97%咪鮮胺(prochloraz)為鹽城市綠葉化工有限公司產(chǎn)品。99%水楊肟酸(SHAM)為美國(guó)Acros O rganics公司產(chǎn)品。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 藥液配制

藥液配制的原則為:對(duì)病菌的抑制率要求在10%到90%之間,其中內(nèi)吸性殺菌劑在0.1～100 μg/m L之間設(shè)7個(gè)供試濃度,保護(hù)性殺菌劑在10～640μg/m L之間設(shè)7個(gè)供試濃度。先用少量有機(jī)溶劑分別溶解各原藥,再加入微量的表面活性劑,充分振蕩搖勻后加水定容并稀釋至各供試濃度備用。

1.2.2 生長(zhǎng)速率法

采用生長(zhǎng)速率法進(jìn)行殺菌劑毒力測(cè)定。將定量的藥液加入已融化的定量培養(yǎng)基中,充分搖勻并分裝到培養(yǎng)皿(d=9 cm)中制成含藥PDA平板。在培養(yǎng)7 d供試菌的菌落邊緣打取菌塊(d=6 mm),接種于含藥的PDA平板,設(shè)滅菌水為對(duì)照,置于25℃恒溫培養(yǎng)箱中連續(xù)培養(yǎng)5 d后,采用十字交叉法測(cè)量菌落直徑。每個(gè)濃度設(shè)3個(gè)重復(fù),試驗(yàn)重復(fù)2次,以2次試驗(yàn)數(shù)據(jù)的平均值計(jì)算抑制率,求回歸方程y=b x+a、EC50和 EC90。

考慮到在離體條件下嘧菌酯的抑菌作用會(huì)受到旁路氧化作用的影響,使其毒力降低,而在嘧菌酯處理中加入旁路氧化酶抑制劑水楊肟酸(SHAM)后,對(duì)病菌的活性往往具有協(xié)同增效作用[8-9],因此本試驗(yàn)除了測(cè)定嘧菌酯對(duì)菌株的毒力外,還測(cè)定了嘧菌酯加100μg/m L的水楊肟酸(SHAM)的毒力。

2 結(jié)果與分析

2.1 兩個(gè)供試菌株對(duì)殺菌劑的敏感性比較

供試殺菌劑中,嘧菌酯、戊唑醇、抑霉唑、異菌脲、溴菌腈和百菌清6種藥劑均表現(xiàn)為:A 14菌株的EC50高于CF23菌株的EC50,即CF23菌株對(duì)這6種殺菌劑較A14菌株敏感,如抑霉唑?qū)14菌株的EC50為4.73μg/m L,對(duì)CF23菌株的EC50為1.08μg/m L。而2個(gè)菌株對(duì)腈菌唑、咪鮮胺、甲基硫菌靈和多菌靈4種藥劑的敏感性則極為相似;只有三唑酮和代森錳鋅2種殺菌劑是CF23菌株的EC50高于A14菌株的EC50(見表1)。總之,C.cassiicola對(duì)多數(shù)殺菌劑都比較敏感,兩個(gè)菌株對(duì)殺菌劑的反應(yīng)趨勢(shì)比較一致,但敏感性存在差異。

2.2 12種殺菌劑的毒力比較

試驗(yàn)結(jié)果表明,絕大多數(shù)供試殺菌劑對(duì)C.cassiico la的菌絲生長(zhǎng)表現(xiàn)出較好的抑制作用。按照EC50的大小可將12種殺菌劑分為3類:(1)EC50＜5μg/m L:咪鮮胺、多菌靈、甲基硫菌靈、抑霉唑;(2)EC50=5～50 μg/m L:異菌脲、戊唑醇 、腈菌唑、溴菌腈和代森錳鋅;(3)EC50＞100μg/m L:百菌清、三唑酮和嘧菌酯。若兩種殺菌劑的EC50相差不大,再根據(jù) EC90比較毒力大小,結(jié)果為:多菌靈＞咪鮮胺,甲基硫菌靈＞抑霉唑,戊唑醇＞腈菌唑、異菌脲等。對(duì)供試藥劑綜合考慮的結(jié)果,以多菌靈毒力最高。

單獨(dú)應(yīng)用嘧菌酯時(shí)其毒力在12種藥劑中是最低的,對(duì)A 14和CF23菌株的EC50分別為347.17μg/m L和252.02μg/m L。加入水楊肟酸(SHAM)后的EC50均小于5μg/m L,分別為4.67μg/mL和3.89μg/m L,2個(gè)菌株對(duì)嘧菌酯的敏感性分別提高了74.34倍和64.79倍,增效作用明顯。

表1 12種殺菌劑對(duì)C.cassiicola的毒力測(cè)定

2.3 不同種類殺菌劑的毒力比較

供試藥劑對(duì)橡膠棒孢霉落葉病菌的抑制活性,以苯并咪唑類殺菌劑的活性最高,包括多菌靈和甲基硫菌靈。其次是甾醇生物合成抑制劑,包括咪唑類的咪鮮胺和抑霉唑;三唑類的戊唑醇、腈菌唑及三唑酮。甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑嘧菌酯加入SHAM后,抑制作用僅次于苯并咪唑類殺菌劑和咪唑類殺菌劑。一般來講,保護(hù)性殺菌劑(如代森錳鋅、百菌清)在抑菌作用方面明顯不如內(nèi)吸性殺菌劑。其中二甲酰亞胺類殺菌劑異菌脲雖然是保護(hù)性殺菌劑,對(duì)C.cassiicola卻有很好的抑制作用。

3 討論

選用來自海南和云南的兩株橡膠棒孢霉落葉病菌作為供試菌株進(jìn)行殺菌劑的敏感性測(cè)定,發(fā)現(xiàn)不同來源菌株對(duì)藥劑的反應(yīng)存在一定差異。研究表明:國(guó)內(nèi)發(fā)現(xiàn)的橡膠棒孢霉落葉病菌目前對(duì)多數(shù)殺菌劑表現(xiàn)敏感,該研究結(jié)果有利于今后制定有效措施以防治我國(guó)出現(xiàn)的橡膠棒孢霉落葉病。

一般來說,不同種類殺菌劑因?yàn)樽饔脵C(jī)理及作用方式不同,其殺菌譜與毒力存在較大差異。其中,甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑具有高效、廣譜及作用機(jī)理新穎的特點(diǎn),是細(xì)胞色素bc1中Q0位點(diǎn)抑制劑,可影響正常的電子傳遞,阻止ATP合成。但一些病原菌正常的電子傳遞途徑受阻后,通過旁路氧化途徑電子可以繞過細(xì)胞色素bc1復(fù)合物,還可以產(chǎn)生ATP,從而降低了甲氧丙烯酸酯類殺菌劑的抑菌活性[10-12]。而黃酮類物質(zhì)能抑制旁路氧化酶AOX以阻礙旁路氧化途徑,該物質(zhì)普遍存在于植物體內(nèi),因此甲氧丙烯酸酯類殺菌劑在活體植物上施藥往往具有廣譜高效,但在離體測(cè)定時(shí),某些病菌受到旁路氧化作用的影響,表現(xiàn)出毒力降低的現(xiàn)象。本試驗(yàn)結(jié)果也支持上述觀點(diǎn),在嘧菌酯處理中加入SHAM后,對(duì)2個(gè)菌株的抑菌活性分別提高了74.34倍和64.79倍,表現(xiàn)出較強(qiáng)的抑菌作用。表明該殺菌劑也是防治橡膠棒孢霉落葉病的理想藥劑之一。

毒力回歸方程中斜率的高低說明病菌對(duì)殺菌劑敏感性分布的不同,在EC50相似情況下,若斜率不同,抑制率會(huì)出現(xiàn)在高或低劑量時(shí)相差甚大的現(xiàn)象。如咪鮮胺的EC90比多菌靈的高出很多,原因就是其斜率比多菌靈的小。因此,藥劑的效果應(yīng)綜合多方面因素來評(píng)價(jià)。本研究表明苯并咪唑類殺菌劑對(duì)該病菌具有很好的抑菌效果,但該類殺菌劑產(chǎn)生抗藥性的風(fēng)險(xiǎn)很高,因此在后續(xù)研究中,最好考慮與咪唑類、甲氧基丙烯酸酯類或者保護(hù)性殺菌劑的混配,即要兼顧高低劑量的抑制作用,又采用不同作用機(jī)理的殺菌劑混用以降低抗藥性風(fēng)險(xiǎn)。

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