博落回生物堿對黃胸寡毛跳甲成蟲的室內毒力測定△

張炯炯，呂先真，徐建泓，李躍軍

（1.浙江醫學高等?？茖W校，浙江 杭州 310053；2.浙江省磐安農業公司，浙江 磐安 322304）

博落回生物堿對黃胸寡毛跳甲成蟲的室內毒力測定△

張炯炯1*，呂先真2，徐建泓1，李躍軍1

（1.浙江醫學高等專科學校，浙江 杭州 310053；2.浙江省磐安農業公司，浙江 磐安 322304）

目的：測定博落回生物堿對黃胸寡毛跳甲成蟲的毒力作用，為利用藥用植物提取物防治發生在白術等道地藥材上的黃胸寡毛跳甲提供科學依據。方法：提取博落回果實中的生物堿，采用噴霧法將不同濃度的博落回生物堿溶液噴施于黃胸寡毛跳甲成蟲。結果：博落回生物堿溶液對黃胸寡毛跳甲成蟲48h的LD50為32.98mg·L－1，95%可信區間為19.75～86.50mg·L－1。結論：博落回生物堿對黃胸寡毛跳甲成蟲具有毒殺作用。

黃胸寡毛跳甲成蟲；博落回生物堿；毒力測定

黃胸寡毛跳甲Luperomorpha xanthodera（Fairmaire）是鞘翅目葉甲科的昆蟲，是玄參、白術等浙江道地藥材生產中常發性的害蟲。近年來，它的危害有日益嚴重的趨勢，造成道地藥材生產的重大損失。黃胸寡毛跳甲成蟲善于跳躍，有聚集活動的生活習性。通常，黃胸寡毛跳甲成蟲在4～6月份發生量迅速上升。幾十只成蟲集中在同一植株的幼葉、新枝梢上，啃食葉片的表皮組織，咬食嫩芽、心葉，出現葉片缺刻、發黃，使得植株生長不良。新枝梢被害后，植株枯萎死亡。另外，黃胸寡毛跳甲成蟲的蟲糞等排泄物污撒在葉片表面或嫩芽上，影響植株的光合作用。黃胸寡毛跳甲造成的蟲害，使得白術等浙江道地藥材的產量和質量嚴重下降。目前，這種害蟲的防治仍以化學農藥為主［1］。而黃胸寡毛跳甲對化學藥物的抗藥性有所增加。因此，篩選出高效、安全、符合中藥材GAP生產的植物源性生物藥劑，防治白術等浙江道地藥材生產中的蟲害——黃胸寡毛跳甲，是十分有意義的工作。

罌粟科植物博落回Macleaya cordata（Willd.）R.Br.為多年生草本，通常博落回以全草入藥，具有殺蟲的功用。已知藥用植物博落回殺蟲的主要成分是其植株中含有的生物堿。本文從博落回果實中提取以血根堿為主的生物堿，對生長在白術植株上的黃胸寡毛跳甲成蟲進行室內毒力測定，從而，為該蟲的生物防治提供科學依據。

1 材料與儀器

1.1 材料

博落回植株于2008年7月采自浙江磐安縣境內；供試蟲源黃胸寡毛跳甲成蟲于2009年7月采自磐安白術種植基地。以上兩實驗材料均由浙江省磐安農業公司提供。蟲源由浙江省磐安農業公司呂先真高級農藝師鑒定。標準品為99.9%血根堿鹽酸鹽（北京恒泰盛源國際貿易有限公司）。實驗用試劑均為國產分析純，重蒸餾水（自制）。

1.2 儀器

高效液相色譜儀HP-1100（美國Angilant公司），電子分析天平AE200（日本METTLER公司），DKS-2b型不銹鋼新型電熱恒溫水浴鍋，超聲波清洗機WF150E（寧波海曙五方超生設備有限公司），電子秤TD系列200／0.1g（浙江余姚金諾天平儀器有限公司），檢驗篩TSD，DGG-9240A型干燥箱，RE-52AA旋轉蒸發器，SHB-ⅢA循環水式多用真空泵，植物粉碎機，1793型200mL索氏提取器，L56-03喉頭噴霧器（上海嘉定區醫療設備廠）。

2 方法

2.1 博落回生物堿的提取與測定

干燥的博落回果實在粉碎機中粉碎，過0.8mmTSD檢驗篩，得博落回果實粉；稱取博落回果實粉20.00g為1份，采用滲漉法進行動態浸提［2］，得到博落回生物堿浸膏；用HPLC測定博落回生物堿的含量。

2.1.1 色譜條件 Agilent ZoRBAX SB-C18色譜柱，檢測波長：270nm，流動相：乙腈-0.1%磷酸溶液（45∶55），流速：1.0mL·min－1，柱溫：25℃，進樣量：10μL。

2.1.2 標準品的制備 精密稱取血根堿標準品5.7mg置50mL容量瓶中，超聲溶解后，作為儲備液備用。

2.1.3 線性關系考察 分別精密吸取血根堿標準品儲備液1，2，5，10，25mL置25mL容量瓶中，用0.1%磷酸溶液定容，形成4.56，9.12，22.8，45.6，114μg·mL－1的標準品溶液。各取10μL分別注入液相色譜儀，測得峰面積。以峰面積值為縱坐標，血根堿濃度為橫坐標進行回歸處理，得回歸方程Y＝46.415X，r＝0.999 8，表明血根堿在4.56～114μg·mL－1與峰面積線性關系良好。

2.1.4 樣品含量的測定 精密稱取干燥恒重的樣品浸膏50mg于50mL容量瓶中，用0.1%磷酸溶液定容，超聲振蕩5min，0.45μm超濾，取續濾液，按

2.1.3 操作。

2.2 博落回生物堿對黃胸寡毛跳甲成蟲的室內毒力試驗

應用噴霧法測定博落回生物堿溶液對黃胸寡毛跳甲成蟲的觸殺毒力，實驗地點在浙江醫學高等?？茖W校藥學系天然藥物實驗室進行。在預試驗的基礎上，采用改進寇氏法［3］確定實驗組數和各組的劑量。每次實驗分成6組，每組10只。其中，5組為施藥組，1組為空白對照組，將黃胸寡毛跳甲成蟲置于250mL錐形瓶中，用雙層紗布封口。黃胸寡毛跳甲成蟲善跳躍，在250mL錐形瓶內快速上行的活動力特強。將250mL錐形瓶紗布封口端放在實驗桌上，底部向上，這樣，蟲子都集中在瓶的底部。五官科用的L56-03喉頭噴霧器的噴頭裝在9cm長的管的頂端，噴頭的角度可以根據需要進行調節。施藥時，將喉頭噴霧器噴頭伸入錐形瓶內，每噴一下的藥量是0.025mL，每次的受藥量分4次進行連續噴霧。這樣，可均勻地將藥液噴施于每只蟲體。在溫度（28±2）℃、相對濕度（75±5）%的條件下觀察96h。統計24，48，72h蟲口的死亡數量，計算其死亡率。每組試驗重復3次，若對照組的死亡率大于20%，該組試驗重做。

3 結果與分析

3.1 博落回生物堿含量測定的結果

HPLC測得博落回果實中以血根堿為代表的生物堿含量是2.80%，HPLC圖譜見圖1～2。稱取博落回果實浸膏0.485 4g，加85%乙醇200mL，配制成每升含有0.068mg的博落回生物堿溶液，備用。

圖1 血根堿標準品HPLC圖

圖2 博落回果實HPLC圖

3.2 博落回生物堿溶液對黃胸寡毛跳甲成蟲的室內毒力試驗結果

試驗過程中，我們觀察、記錄了對黃胸寡毛跳甲成蟲施藥12，24，48，72h的不同情況。施藥12h，黃胸寡毛跳甲成蟲的活動能力明顯減弱；24h，高濃度組蟲的死亡率不斷上升，低濃度組蟲緩慢爬行，活動能力低下。以后，隨著施藥時間的延長，各組死亡率不斷上升。48h毒力試驗結果見表1。

表1 博落回生物堿溶液對黃胸寡毛跳甲成蟲室內48h毒力試驗

應用計算機軟件SPSS 11.5進行博落回生物堿對黃胸寡毛跳甲成蟲室內毒力試驗48h結果的統計學分析，結果LD50＝32.98mg·L－1，95%可信區間為19.75～86.50mg·L－1，x2＝4.575，r＝3，P＝0.206（＞0.05）、Probit（p）為－2.716 24＋1.789 02X。從以上統計結果可以看出，博落回生物堿對黃胸寡毛跳甲成蟲具有一定的毒殺作用。

4 討論

跳甲是鞘翅目Coleoptera跳甲屬Altica Goeffroy葉甲科Chrysomelidae跳甲亞科Aliticinae的昆蟲［4］。目前，全世界已知300余種，我國有28種。跳甲作為世界性的害蟲，已經引起人們極大的關注。已有的報道表明，現在研究的重點是危害十字花科蔬菜的跳甲。對發生在白術等道地中藥材上的黃胸寡毛跳甲應用藥用植物提取物進行生物防治的研究還在起步階段。

藥用植物提取物對害蟲的作用方式有多種，常見的有胃毒、觸殺、熏蒸等。本實驗使用噴霧法測定了博落回生物堿對黃胸寡毛跳甲的觸殺毒力。當然，觸殺毒力測定的方法和儀器較多，除了噴霧法以外，常用的還有點滴法、浸漬法等。本次實驗使用了五官科用的L56-03喉頭噴霧器，可以將藥液均勻地噴施于蟲體。

利用藥用植物提取物防治道地藥材生產中的蟲害，既可以解決農藥污染問題，又能夠保證藥材的產量和質量，這是我們努力的方向。我們的工作只是開了一個頭，進一步的研究將在以后的文章中再作報道。

［1］呂先真，鄭永利.“浙八味”中藥材病蟲原色圖譜［M］.杭州：浙江科學技術出版社，2006：59.

［2］張炯炯，李功華，李躍軍，等.博落回植株地上部分各器官生物堿含量的研究［J］.中華中醫藥學刊，2009，（7）：1428.

［3］王心如.毒理學實驗方法與技術［M］.北京：人民衛生出版社，2007：34-36.

［4］翟宗昭，薛懷君，王書永，等.跳甲屬同域分布種及其寄主關系探討［J］.動物分類學報，2007，32（1）：137-142.

信息天地

《中國藥用植物種子原色圖鑒》

《中國藥用植物種子原色圖鑒》由南京農業大學郭巧生教授主編，該書利用現代生物實體攝影技術制作的藥用植物種子原色圖譜再配以簡要的文字，直觀、形象地介紹了106科434種常用藥用植物的種子實物的外部形態和內部結構形態及習性，填補了我國藥用植物種子原色圖鑒方面研究的空白。

全書有插圖572幅，其中果實和種子外形群體圖436幅，個體和解剖圖136幅。所用藥用植物種子（含果實，下同）皆在成熟后采收，并選擇有代表性的完整種子標本，對其主要形狀特征進行實體原色拍攝，根據鑒定研究等工作的實際需要，對部分種子進行相關縱、橫切面剖視圖像攝影，制作成直觀、原色彩色圖，每一種藥用植物的彩色照片都附有簡要文字說明。

該書是我國藥用植物種子學研究方面的一本專著，對于從事藥用植物教學、科研及生產管理人員來說又是一本實用工具書，也可作為在藥用植物研究方面進行國際交流或合作的重要資料。

Indoor Toxicity Test onLuperomorpha Xanthodera（Fairm aire）Imago byMacleaya CordataA lkaloids

Zhang Jiongjiong1，LüXianzhen2，Xu Jianhong1，Li Yuejun1
（1.Zhejiang Medical College，Hangzhou Zhejiang310053，China；2.The Agricultural Company of Panan County of Zhejiang Province，Pan′an Zhejiang322300，China）

Objective：To provide scientific basis for utilizing extracts of medicinal plants to killLuperomorpha xanthodera（Fairmaire）onAtractylodes macrocephalaKoidz.plants by determining the toxic effect onLuperomorpha xanthodera（Fairmaire）bymacleaya cordataplant.Methods：To use literature method to extractalkaloids from fruits ofmacleaya cordata，and then spray different contents of the extract alkaloids onLuperomorpha xanthodera（Fairmaire）.ResultsWithin 48 hours，the effect of LD50onLuperomorpha xanthodera（Fairmaire）by macleaya cordata alkaloids is 32.98mg·L－1，and 95%of the confidential interval shows19.75～86.50 mg·L－1.ConclusionMacleaya cordataalkaloid can effectively wipe outLuperomorpha xanthodera（fairmaire）.

Luperomorpha xanthodera（Fairmaire）imago；Macleaya cordataalkaloids；Toxicity determination

浙江省科技廳2009年科技計劃項目（2009 C 32091），浙江省中醫藥管理局2008年科技計劃項目（2008 CB 024）

*張炯炯，E-mail：zjionghz＠163.com

2010-03-12）