HPLC測定三黃片中黃岑苷的含量

霍永昌，高衛(wèi)東

（佛山市藥品檢驗所，廣東 佛山 528000）

HPLC測定三黃片中黃岑苷的含量

霍永昌，高衛(wèi)東*

（佛山市藥品檢驗所，廣東 佛山 528000）

目的：建立高效液相色譜法測定三黃片中黃芩苷含量的方法。方法：采用Hypersil C18色譜柱，流動相為甲醇－0.2%磷酸溶液（45∶55），檢測波長為280nm，流速1.0mL·min－1。結(jié)果：該色譜條件下黃芩苷有良好的分離度，在0.1～1.2μg線性關(guān)系良好，r＝0.999 8，平均回收率為98.10%，RSD＝1.5%（n＝6）。結(jié)論：該方法快速簡便，準確可靠，靈敏度高，可用于三黃片的質(zhì)量控制。

高效液相色譜法；三黃片；黃芩苷

三黃片收載于《中國藥典》2005年版一部，由大黃、鹽酸小檗堿和黃芩浸膏組成，具有清熱解毒，瀉火通便的功效［1］。《中國藥典》中規(guī)定了大黃中的大黃素和大黃酚的含量測定，國家食品藥品監(jiān)督管理局藥品檢驗補充檢驗方法和檢驗項目批準件（2007002號）中補充了鹽酸小檗堿的含量測定，但卻沒有黃芩苷的含量控制。黃芩苷是三黃片中的一種主要有效成分，因此建立其含量測定方法很有必要。本文采用HPLC對三黃片中的黃芩苷進行了含量測定，該法相對簡單、準確、重現(xiàn)性好，可為《中國藥典》修訂本品種的質(zhì)量標準提供依據(jù)和參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

HP1100型系列高效液相色譜儀（美國）；AE－240電子分析天平（瑞士Mettler）；KQ-250B型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥

黃芩苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號0826-9502）；三黃片（南寧市冠峰制藥有限公司，批號20090601，20090902，20090906，規(guī)格為每片片芯重0.25g）；甲醇為色譜純（德國Merck），水為超純水（韓國Power Iplus超純水系統(tǒng)），其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Hypersil ODS2（4.6mm×200mm，5μm）；流動相：甲醇－0.2%磷酸溶液（45∶55）；檢測波長：280nm；流速：1.0mL·min－1；柱溫：30℃。進樣量：10μL。理論板數(shù)按黃芩苷峰計算應(yīng)不低于2 500。在此條件下，黃芩苷與相鄰峰可達基線分離，方中其他成分對測定無干擾，見圖1。

圖1 黃芩苷對照品及三黃片HPLC圖

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取在60℃減壓干燥4h的黃芩苷對照品約20mg，置于50mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度。再精密吸取0.5，1.0，2.0，4.0，6.0mL，置20mL量瓶中，配成各個濃度的黃芩苷對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取本品20片，除去包衣，精密稱定，研細（過三號篩），精密稱取約0.05g，置具塞三角瓶中，精密加入70%乙醇50mL，密塞，稱定重量，超聲提取30min，放冷，補足重量，過濾，取濾液適量即得。

2.4 陰性樣品的制備

按處方比例制備缺黃芩的三黃片，照2.3項下操作，制備陰性樣品溶液。

2.5 線性關(guān)系考察

分別精密量取各個黃芩苷對照品溶液10μL，依次進樣，測定峰面積。以測得的峰面積為縱坐標，對照品進樣量（μg）為橫坐標，繪制標準曲線，求得回歸方程Y＝3 866.2X－87.923，r＝0.999 8，黃芩苷進樣量在0.1～1.2μg內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.6 精密度試驗

精密吸取同一批供試品溶液，重復(fù)進樣6次，依法測定，黃芩苷峰面積的RSD＝0.6%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗

取同一對照品溶液10μL，按上述色譜條件分別在0，4，8，12，16，20h測定6次，，記錄峰面積積分值并計算出黃芩苷的RSD＝1.1%，結(jié)果顯示溶液20h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 重復(fù)性試驗

取同一批號的供試品6份，依法制成供試品溶液進行測定，RSD＝1.9%，結(jié)果表明重復(fù)性良好。

2.9 回收率試驗

取已知含量（14.26mg／0.293 4g）的同一批號供試品6份，分別精密加入濃度為2mg·mL－1的對照品溶液0.5mL，照2.3項下操作，制備樣品溶液。按色譜條件測定含量，計算回收率，結(jié)果見表1。

2.10 樣品含量測定

分別精密吸取20090601，20090902，200909063批供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀測定，結(jié)果分別為14.26，14.42，14.35mg／片（n＝3）。

表1 黃芩苷加樣回收率試驗

3 討論

參考《中國藥典》藥材黃芩中黃芩苷的含量測定方法中的色譜條件［2］，比較了不同型號的色譜柱，確定本試驗的色譜條件的流動相組成為甲醇－0.2%磷酸溶液（45∶55）。

黃芩苷是制劑中的有效活性成分之一，本文對其進行了含量測定，所建立的方法相對簡單、準確、重現(xiàn)性好，可以為《中國藥典》修訂本品種的質(zhì)量標準提供依據(jù)和參考。

［1］國家藥典委員會.中國藥典（一部）［S］.北京：化學工業(yè)出版社，2005：328.

［2］國家藥典委員會.中國藥典（一部）［S］.北京：化學工業(yè)出版社，2005：211-212.

Determ ination of Baicalin in Sanhuang Tablets by HPLC

Huo Yongchang，Gao Weidong
（Foshan Institute for Drug Control，F(xiàn)oshan Guangdong528000）

Objective：HPLC method was established for determination of baicalin in Sanhuang Tablets.Methods：Hypersil C18column was used with methanol and 0.2%phosphoric acid（45∶55）as the mobile phase.The flow rate was 1.0mL·min－1and the detector wavelength was 280nm.ResultsThe relationship between the concentration of baicalin and the peak area was linear at the range of0.1～1.2μg（r＝0.999 8），and the recovery was 98.10%，RSD was1.5%（n＝6）.ConclusionThe method was rapid，sensitive and accurate，and could be used for quality control of Sanhuang Tablets.

HPLC；Sanhuang Tablets；Baicalin

*高衛(wèi)東，Tel：（0757）83338463，E-mail：weidonggw＠163.com

2010-01-18）