反相高效液相色譜-電噴霧質譜法測定滸苔中的葉黃素

程紅艷，陳軍輝,*，趙恒強，史 倩，王小如,2，臧家業

(1.國家海洋局第一海洋研究所海洋生態研究中心，山東 青島 266061；2.廈門大學化學化工學院，福建 廈門 361005)

反相高效液相色譜-電噴霧質譜法測定滸苔中的葉黃素

程紅艷1，陳軍輝1,*，趙恒強1，史 倩1，王小如1,2，臧家業1

(1.國家海洋局第一海洋研究所海洋生態研究中心，山東 青島 266061；2.廈門大學化學化工學院，福建 廈門 361005)

建立反相高效液相色譜-電噴霧電離質譜法(RP-HPLC-DAD-ESI-MS)定性、定量測定綠潮藻滸苔中葉黃素的新方法。滸苔樣品經超聲輔助提取后，采用RP-HPLC-DAD-ESI-MS聯用技術對其進行分離鑒定，HPLC采用Eclipse XDB-C18(150mm×4.6mm，5μm)色譜柱，以含0.2%乙酸的甲醇溶液-水為流動相，線性梯度洗脫，檢測波長450nm。在選定的最佳儀器條件下，葉黃素與滸苔中的其他化合物分離良好，葉黃素在0.10～20.0mg/L質量濃度范圍內具有良好的線性關系(R2=0.9994)，能對滸苔提取液中的葉黃素進行準確定量；采用電噴霧質譜聯用分析能快速獲得葉黃素的分子量信息，可為滸苔中葉黃素的快速鑒別提供依據。

滸苔；葉黃素；高效液相色譜-電噴霧質譜法

Abstract：A reversed-phase high performance liquid chromatography-diode array detector-electrospray ionization mass spectrometry (RP-HPLC-DAD-ESI-MS) method was established for qualitative identification and quantitative determination of lutein inEnteromorpha prolifera. Lutein was extracted fromEnteromorpha proliferathrough ultrasound-assisted extraction,and then analyzed by RP-HPLC-DAD-ESI-MS. HPLC was carried out at the conditions of Eclipse XDB-C18 (4.6 mm × 150 mm) column, MeOH-0.2% acetic acid-water (V/V) as the mobile phase with linear gradient elution and detection wavelength of 450 nm. Results indicated that the developed method could be used for the determination of lutein inEnteromorpha proliferawith a good resolution and linear relationship in the range from 0.10 to 20.0 mg/L (R2=0.9994). Molecular weight of lutein was rapidly evaluated by ESI-MS detection. Combined with literature information, lutein inEnteromorpha proliferacould be rapidly identified. This developed method is specific, simple, fast, sensitive and feasible for rapid identification and quantification of lutein, which can eliminate the interference of other pigments and derivatives fromEnteromorpha prolifera.

Key words：Enteromorpha prolifera；lutein；HPLC-ESI-MS

葉黃素是類胡蘿卜素的一種，廣泛存在于蔬菜、花卉、水果及某些藻類生物中，在植物光合作用中起到保護作用[1]。近些年研究表明，葉黃素具有多種重要的生理功能[2-3]，可治療白內障，調節人體免疫力，預防癌癥以及視黃斑退化，還具有明顯的防輻射、護膚、潤膚和抗衰老等作用，此外，葉黃素還是一個很好的天然著色劑，因而引起人們的重視。盡管大部分植物的葉片、花朵及果實中均含有葉黃素，但我國當前主要將萬壽菊、金盞菊作為葉黃素分離提取的資源[4]，來源有限，導致葉黃素的價格居高不下，開發新的資源尤為重要。

海洋植物中葉綠素和輔助色素的含量高于陸生植物，而且海洋植物生長快、產量大，是天然葉黃素開發的良好原料[5]。近兩年青島附近海域爆發的滸苔綠潮，打撈出大量滸苔藻，為天然葉黃素的開發提供了豐富的資源。然而目前國內還沒有關于綠潮藻滸苔中葉黃素定性、定量測定的報道，也缺乏滸苔中葉黃素快速測定的有效方法。目前，對于葉黃素的分析和檢測國內外已有一些方法[6]，如分光光度法、薄層色譜法(TLC)、高效液相色譜法(HPLC)、質譜法(MS)等。其中HPLC法作為一種快速的分析方法，具有樣品處理簡單、分離效果好、選擇性強、檢測靈敏度高等優點[7-8]被應用于部分植物和食品的葉黃素的定量測定[9-10]。高效液相色譜-質譜(HPLC-MS)聯用技術是天然產物有效成分定性、定量分析強有力的工具[11-12]。至今，采用LCMS法測定葉黃素的報道還極少，僅Lakshminarayana等[13]利用液相色譜-大氣壓化學電離質譜法分析人體內黃斑葉黃素的代謝產物。但對于利用高效液相色譜-電噴霧電離質譜法(HPLC-ESI-MS)法分析測定滸苔中的葉黃素研究國內外文獻未見報道。本研究采用超聲波輔助提取法對滸苔中的葉黃素進行高效快速提取，通過對色譜條件的系統優化，建立滸苔中葉黃素HPLC-DAD定量測定方法，并建立HPLC-ESI-MS鑒別滸苔中葉黃素的方法。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

滸苔樣品為2008年7月份采自青島海域近岸，在－76℃的超低溫冰箱中冷凍保存。

甲醇、乙腈和丙酮(均為色譜純) 德國Merck公司；乙酸(優級純)；抗壞血酸(VC)及其他試劑均為國產分析純；蘆丁(純度98%，葉黃素標準品) 中國藥品生物制品檢定所；實驗中所用溶液均用超純水配制，HPLC用試劑均經過0.45μm微孔濾膜過濾及超聲脫氣處理。

1200高效液相色譜儀(配有二極管陣列檢測器(DAD)、自動進樣器、四元梯度泵)、G6320型電噴霧離子阱質譜儀、Eclipse XDB-C18色譜柱(150mm×4.6mm，5μm) 美國Agilent公司； KQ-400KDE 型高功率數控超聲波儀 昆山市超聲儀器有限公司；R201型旋轉蒸發儀 上海申生科技有限公司；FA1104型電子天平 上海精天電子儀器廠；Milli-Q(18.2MΩ)超純水處理系統 美國Millipore公司。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件

Eclipse XDB-C18(150mm×4.6mm，5μm)色譜柱；流動相：水(A)，含0.2%乙酸的甲醇溶液(B)，梯度洗脫程序為：0～8min，98% B；8～10min，98%～100%B；10～25min；100% B。柱溫25℃，流速0.8mL/min，DAD檢測器在450nm波長處檢測，進樣量為50μL。

1.2.2 質譜條件

HPLC-MS條件：電噴霧離子源(ESI)，正離子電離，參數設定方式：智能設定(Smart)，干燥氣溫度350℃，噴霧氣壓40psi，干燥氣(N2)流速10.0L/min，目標質荷比為m/z600，化合物穩定性100%，捕集效率100%，質量掃描范圍m/z100～1000。

HPLC-MS2條件：電噴霧離子源(ESI)，正離子電離，參數設定方式：智能設定(Smart)，干燥氣溫度350℃，噴霧氣壓40psi，干燥氣(N2)流速10.0L/min，目標質荷比為m/z600，化合物穩定性100%，捕集效率100%；檢測方式：手動多級質譜檢測(Manual MSn)，二級質譜母離子m/z589，二級質譜碰撞電壓1.00V，碰撞氣體為氦氣。

1.2.3 標準溶液的配制

準確稱取葉黃素標準品5.0mg，置于100mL容量瓶中，用丙酮定容至100mL得到質量濃度為50mg/L的葉黃素標準儲備液，取少量標準品儲備液稀釋至合適質量濃度，用于色譜條件的優化和標準曲線的繪制，標準品儲備液密封后置于冰箱中－4℃冷藏保存。

1.2.4 供試品溶液的制備

將滸苔冷凍干燥，存放于冰箱冷藏狀態下備用。平行精密稱取3份干滸苔樣品各0.05g，置于15mL玻璃離心管中，加入1mL的質量濃度不高于1.0g/L的VC溶液，避光浸潤5min后，加入5mL丙酮，采用避光冰浴超聲，超聲功率320W，提取時間8min，用0.45μm微孔濾膜過濾，置于棕色進樣瓶中，待測。

2 結果與分析

2.1 色譜條件的優化

2.1.1 色譜柱的選擇

據文獻[9-10]報道，反相HPLC技術較常用于葉黃素的分析測定，而甲醇-水-丙酮以及甲醇-丙酮混合液多作為分離葉黃素的流動相；考慮到葉黃素是一種極性較小、易于被反相柱保留的化合物，而滸苔粗提物所含的化合物又較為復雜，實驗以不同比例的水-甲醇混合液為流動相，對4根不同特點的反相C18柱進行比較優化，結果發現，不同特點的色譜柱對滸苔中葉黃素分離結果差異較大，4根色譜柱當中Agilent公司的Eclipse XDB-C18所獲得的分離結果最為理想(各峰分離度高，峰型對稱)，這就說明在滸苔中葉黃素的HPLC分析中，選擇合適的色譜柱是非常關鍵的。

2.1.2 流動相的選擇

在選定色譜柱之后，對以水-甲醇以及甲醇-水-丙酮為流動相進行比較，結果表明以水-甲醇為流動相時分離效果較好；在流動相中添加一定量的酸或緩沖鹽可以改善分離效果以及色譜峰形。在本研究中分別將少量的磷酸、乙酸、乙酸氨、磷酸鹽加入流動相中，結果表明在流動相中添加0.2%的乙酸就能獲得理想的分離結果，并且使用乙酸配制流動相簡單方便、不損壞柱子和儀器硬件，乙酸具有揮發性與質譜檢測器兼容，利于液相色譜-質譜聯用分析葉黃素方法的開發。

2.1.3 測定波長的選擇

圖1 葉黃素的DAD掃描光譜圖Fig.1 DAD scan spectrum of lutein

葉黃素在可見光區有較強的特征吸收峰，為了使葉黃素能獲得較高的靈敏度，本研究通過DAD全波段掃描(300～800nm)，考察不同檢測波長對葉黃素測定靈敏度的影響(葉黃素的掃描光譜圖見圖1)，結果表明450nm為檢測波長時，葉黃素檢測的靈敏度較高，并且能排除其他化合物的干擾，因此選擇450nm作為滸苔中葉黃素測定的最佳檢測波長，與文獻[10]報道結果一致。

2.2 超聲波輔助提取條件的優化

2.2.1 超聲功率對葉黃素提取效果的影響

常溫條件下，稱取滸苔干樣品0.05g，置于15mL玻璃離心管中，加入1mL的超純水，避光浸潤5min后，加入5mL丙酮，超聲波提取3min，進行測定，根據葉黃素峰面積考察超聲功率對滸苔中葉黃素提取效果的影響。

圖2 超聲功率對葉黃素提取效率的影響Fig.2 Effect of ultrasonic power on extraction efficiency of lutein fromEnteromorpha prolifera

從圖2可以看出，超聲功率對葉黃素的提取效果的影響不大。隨著功率的增加，葉黃素色譜峰峰面積逐漸升高，當超聲波功率為320W時，葉黃素的峰面積升至最高，而后略有下降。超聲波功率小，葉黃素提取不完全，功率太大可能造成葉黃素分解，含量下降。由此可知，采用超聲波提取滸苔葉黃素，最適頻率應選擇在320W左右。

2.2.2 超聲時間對葉黃素提取效果的影響

常溫條件下，稱取滸苔干樣品0.05g，置于15mL玻璃離心管中，加入1mL的超純水，避光浸潤5min后，加入5mL丙酮，超聲功率為320W，進行不同時間超聲提取，進行測定，根據葉黃素峰面積考察超聲時間對滸苔中葉黃素提取效果的影響。

圖3 超聲時間對葉黃素提取效率的影響Fig.3 Effect of ultrasonic time on extraction efficiency of lutein fromEnteromorpha prolifera

從圖3可以看出，超聲時間對葉黃素的提取效果影響較大。隨著提取時間的逐漸增大，滸苔葉黃素的提取量也逐漸增大。提取時間為8min時，葉黃素的峰面積最高；8min之后隨著提取時間的延長，葉黃素的提取量反而逐漸下降。由此可知，采用超聲波提取滸苔葉黃素，最適提取時間在8min左右。

2.2.3 超聲方式對葉黃素提取效果的影響

常溫條件下，稱取滸苔干樣品0.05g，置于15mL玻璃離心管中，加入1mL的超純水，避光浸潤5min后，加入5mL丙酮，超聲功率為320W，超聲提取8min，進行測定，根據葉黃素峰面積考察超聲方式對滸苔中葉黃素提取效果的影響。

表1 不同超聲方式葉黃素提取效率結果(n=3)Table 1 Extraction efficiency of lutein using different ultrasonic modes (n=3)

從表1可以看出，避光超聲對滸苔中葉黃素提取優于不避光超聲提取。冰浴超聲提取可以提高葉黃素的提取效果。由此可知，采用避光冰浴超聲提取滸苔葉黃素是最佳的超聲提取方式。

2.3 滸苔提取液中葉黃素的穩定性考察

2.3.1 提取溶劑對葉黃素穩定性的影響

據文獻[4]報道，由于葉黃素是一種抗氧化劑，在溶液中不穩定，且在不同溶液中的穩定性不同；本研究取3份0.05g的干滸苔，其中兩份用1mL超純水避光浸潤后，再分別用15mL的甲醇、丙酮超聲提??；另外一份用1mL VC溶液避光浸潤后，用15mL的丙酮超聲提取，按1.2.4節方法將其制成供試品溶液，按1.2.1節色譜條件，在0、2、4、8、12、24h分別進樣測定，測得葉黃素的峰面積。根據葉黃素峰面積與其0h的面積相對值考察其穩定性。

圖4 提取溶劑對葉黃素穩定性的影響Fig.4 Effect of different solvents on the stability of lutein

從圖4可以看出，不同的提取溶劑對葉黃素的穩定性影響顯著。在10h內，丙酮提取液中的葉黃素穩定性在90%以上，高于甲醇提取液中的葉黃素。超過10h后，甲醇和丙酮提取液中的葉黃素的穩定性都在90%以下，但甲醇的葉黃素提取液的穩定性稍好。而丙酮+VC作為提取溶劑得到的葉黃素在24h內其穩定性都達到90%以上?？梢?，VC可以作為葉黃素的穩定劑。所以，本實驗選擇丙酮+VC作為最佳的提取溶劑。

2.3.2 VC溶液的質量濃度對葉黃素穩定性的影響

圖5 VC質量濃度對葉黃素穩定性的影響Fig. 5 Effect of ascorbic acid concentration on the stability of lutein

由文獻[14-15]可知，VC對葉黃素的存放有一定保護作用。配制從0.1～2.5g/L不同的9個質量濃度的VC溶液，按1.2.4處理方法將其制成供試品溶液，按1.2.1節色譜條件，在0、24h分別進樣測定，測得葉黃素的峰面積。根據葉黃素峰面積的相對值考察其穩定性。

從圖5可知，VC溶液質量濃度小于1.0g/L，葉黃素在24h內的穩定性在95%以上，質量濃度高于1.0g/L，葉黃素穩定性下降?？梢姡琕C作為抗氧劑對葉黃素的穩定性有一定保護作用，但是其質量濃度不宜高于1.0g/L。

2.4 樣品測定

2.4.1 滸苔中葉黃素的色譜測定

圖6 葉黃素標準品(A)及滸苔提取液(B)高效液相色譜圖Fig.6 HPLC chromatograms of lutein standard and the extract fromEnteromorpha prolifera

根據標準品的保留時間對滸苔中葉黃素的色譜峰初步定性，將樣品測定色譜圖與標準品色譜圖進行比較，以確定葉黃素相應峰位。按1.2.1節色譜條件測定對照品溶液和供試品溶液，色譜圖如圖6所示，在選定色譜條件下葉黃素色譜峰對稱性好，與其他組分達到基線分離，可準確測定其峰面積，以峰面積進行定量分析。

2.4.2 滸苔中葉黃素的質譜鑒別

對葉黃素標準品和滸苔提取液進行HPLC-MS檢測，通過比較樣品與標準品的色譜圖(圖6)和質譜圖(圖7)可以看出，滸苔提取液在同樣的條件下該保留時間處的質譜碎片及其特征離子豐度(圖7B)與標準品(圖7A)一致，從而進一步證明該滸苔中含有葉黃素。葉黃素的分子量為568，電噴霧一級質譜分析特征離子為m/z589、306，其中m/z589峰為基峰，根據質量數確定m/z589離子為[M+Na－2H]+離子峰，而葉黃素分子離子峰m/z568[M]+信號十分微弱，沒有看到準分子離子峰m/z569[M+H]+，說明采用電噴霧質譜分析葉黃素不易產生分子離子峰和準分子離子峰，易產生[M+Na－2H]+離子峰，另外，初步確定m/z306峰為[M+Na－2H]+離子峰的碎片峰。

圖7 葉黃素標準品(A)和滸苔中葉黃素(B)HPLC-MS質譜圖Fig.7 HPLC-MS spectra of lutein standard and lutein in the extract fromEnteromorpha prolifera

圖8 葉黃素標準品(A)和滸苔中葉黃素(B)HPLC-MS2質譜圖Fig.8 HPLC-MS-MS spectra of lutein standard and lutein in the extract fromEnteromorpha prolifera

為了進一步驗證m/z306離子峰的來源，并探明葉黃素的電噴霧質譜分析裂解規律，以m/z589([M+Na－2H]+)離子峰為母離子，對葉黃素標準溶液和滸苔提取液中的葉黃素峰進行了二級質譜分析，樣品和標準品的二級質譜見圖8。樣品在該保留時間處的二級質譜特征離子(圖8B)與標準品(圖8A)一致，確定m/z306([M+Na－C20H28O－H]+)峰為m/z589([M+Na－2H]+)離子峰的碎片峰，更進一步證明滸苔中含有葉黃素。根據葉黃素電噴霧一級和二級質譜特征，推斷葉黃素電噴霧質譜分析可能的質譜裂解方式見圖9。

圖9 葉黃素裂解規律圖Fig.9 Fragmentation pathways of lutein

2.5 方法學考察

2.5.1 標準曲線的繪制及檢出限

本研究采用外標法對滸苔中葉黃素進行定量，用峰面積對質量做工作曲線，由試樣峰面積求出其實際含量。取葉黃素標準液(質量濃度為50.00mg/L)再用色譜純丙酮分別稀釋成0.1、0.4、1.0、2.0、5.0、20.0mg/L，按1.2.1節色譜條件，以測定的峰面積為縱坐標，標準品的質量(ng)為橫坐標繪制標準曲線，得葉黃素的標準曲線方程為：y=0.7281x－7.0804，R2=0.9994。

說明本方法測定葉黃素在0.10～20.0mg/L范圍內線性關系良好。將標準溶液逐級稀釋進樣，測其峰高響應值及基線噪音強度，以RSN=3計算檢出限。葉黃素的檢出限為0.03mg/L。

2.5.2 精密度

取一份供試品溶液，重復測定5次(進樣量為10μL)，記錄各次的峰面積和保留時間，葉黃峰面積的RSD值為1.13%，保留時間的RSD值為0.38%，表明儀器的精密度良好。

2.5.3 重復性

精密稱取同一樣品5份，按1.2.4節方法將其制成供試品溶液，分別進樣測定，測得葉黃素的峰面積和保留時間，計算其相對標準偏差，葉黃素峰面積的RSD值為3.41%，保留時間的RSD值0.41%，表明該方法重復性良好。

2.5.4 穩定性

取一份供試品溶液，分別在0、0.5、1、1.5、2、2.5、3、8、16、24h進樣測定，測得葉黃素的峰面積和保留時間，計算其相對標準偏差，葉黃素峰面積的RSD值為4.91%，保留時間的RSD值0.32%，顯示供試品溶液至少在24h穩定。

2.5.5 加標回收率

表2 滸苔葉黃素加樣回收率實驗結果(n=3)Table 2 Recovery experiments for lutein fromEnteromorpha prolifera(n=3)

精密稱取已知葉黃素含量的滸苔樣品6份，加入一定量的葉黃素標準品溶液，然后按1.2.4節供試品溶液的制備方法處理，用1.2.1節色譜條件測定加樣回收率。由表2可以看出，方法回收率較高，葉黃素的回收率均在97%以上，進一步說明本方法可用于滸苔樣品中葉黃素含量的測定。

2.6 滸苔樣品中葉黃素的含量測定

取5個不同采集地點的滸苔樣品，每個樣品取質量相等的3份，按1.2.4節方法將其制備成供試品溶液，按1.2.1節色譜條件測定供試品溶液，將測得的峰面積代入標準曲線方程，計算滸苔中葉黃素的含量，5個不同采集地點滸苔樣品中葉黃素的測定結果見表3。

表3 滸苔樣品中葉黃素的含量(n=3)Table 3 Lutein contents in differentEnteromorpha proliferasamples(n=3)

3 結 論

本研究建立反相高效液相色譜-電噴霧電離質譜法定性、定量測定綠潮藻滸苔中葉黃素的新方法。利用質量濃度不高于1.0g/L的VC溶液浸潤滸苔樣品，解決了葉黃素提取液不穩定的難題。經超聲波提取優化選定提取滸苔中的葉黃素最佳條件，該方法簡便易操作、提取效率高；所建立的HPLC-DAD測定滸苔中葉黃素的方法，在選定的色譜條件下，葉黃素分離度高，方法重復性好、回收率高，可作為滸苔中葉黃素含量快速測定的方法；采用HPLC-ESI-MS和HPLC-ESI-MS2可實現滸苔中葉黃素的快速鑒別，并由此推斷出葉黃素的可能質譜裂解規律，該質譜分析方法專屬性強，適用于天然產物中葉黃素快速鑒別。

[1] 王仁雷, 劉友良, 華春. 植物葉黃素循環的組成、功能和調節[J]. 亞熱帶植物學報, 2000, 29(4):59-66.

[2] ISLAM S. Sweetpotao (Ipomoea batatasL.) leaf:Its potential effect on human health and nutrition[J]. Journal of Food Science, 2006, 71(2):13-21.

[3] del CAMPO J A, MORENO J, RODRIGUEZ H, et al. Carotenoid content of chlorophycean microalgae:factor determining lutein accumulation inMuriellopsissp. (Chlorophyta)[J]. Journal of Biotechnology,2000, 76:51-59.

[4] 李大婧, 劉春泉. 萬壽菊葉黃素的提取及分析方法的研究進展[J]. 食品科學, 2005, 26(9):582-585.

[5] 諶素華, 王維民, 蔡清. 綠藻石莼葉綠素提取工藝的研究[J]. 食品科技, 2008(2):172-175.

[6] 王琦, 許洪高, 高彥祥. 葉黃素分析方法研究進展[J]. 中國食品添加劑, 2007(6):100-104.

[7] 王克勤, 羅軍武, 陳靜萍, 等. 芹菜提取物中芹菜素HPLC和HPLC定量分析研究[J]. 食品科學, 2008, 29(4):291-295.

[8] 劉宏程, 萬至飛, 黎其萬, 等. 基質量固相分散-HPLC測定松花蛋中的蘇丹紅[J]. 食品科學, 2008, 29(3):400-402.

[9] 趙志紅, 張逢秋, 朱慧. 反相高相液相色譜法測定食品中的葉黃素[J]. 食品科技, 2009, 34(1):261-263.

[10] 石晉, 欒雨時, 王靜云, 等. HPLC法測定甘薯葉片中的葉黃素[J]. 植物研究, 2008, 28(6):767-769.

[11] 陳軍輝, 李文龍, 王小如, 等. 高效液相色譜-電噴霧飛行時間質譜分析娑羅子中皂苷成分[J]. 分析化學, 2008, 36(3):285-291.

[12] 李文龍, 陳軍輝, 王小如, 等. 加速溶劑萃取-高效液相色譜-電噴霧飛行時間質譜聯用分析蓮子心中生物堿[J]. 分析化學, 2008, 36(1):79-82.

[13] LAKSHMINARAYANA R, ARUNA G, SANGEETHA R K, et al.Possible degradation of luteinin vitroandin vivo:isolation and structural elucidation of lutein metabolites by HPLC and LC-MS[J].Free Radical Biology and Medicine, 2008, 45:982-993.

[14] 稱志行, 王建平, 黃創興. 葉黃素提取和穩定性研究[J]. 食品科學,2005, 26(9):264-287.

[15] 杜桂彩, 郭群群, 滕大衛, 等. 高純度葉黃素的制備及其穩定性研究[J]. 精細化工, 2004, 21(6):447-449.

Determination of Lutein inEnteromorpha proliferaby Reversed-phase High Performance Liquid Chromatography-Diode Array Detector-Electrospray Ionization Mass Spectrometry

CHENG Hong-yan1，CHEN Jun-hui1,*，ZHAO Heng-qiang1，SHI Qian1，WANG Xiao-ru1,2，ZANG Jia-ye1
(1. Research Center for Marine Ecology, The First Institute of Oceanography, State Oceanic Administration People’ s Republic of China,Qingdao 266061, China；2. College of Chemistry and Chemical Engineering, Xiamen University, Xiamen 361005, China)

TS207.3

A

1002-6630(2010)18-0206-06

2009-12-09

國家自然科學基金項目(20905017)；科技部海洋公益性行業科研專項(200705011；200805039)；國家海洋局第一海洋研究所基本科研業務專項(GY-022008T32；2010G25)；國家海洋局青年基金資助項目(2010140)

程紅艷(1983—)，女，碩士研究生，主要從事海洋天然產物研究。E-mail：chenghongyan710@163.com

*通信作者：陳軍輝(1978—)，男，助理研究員，博士，主要從事海洋天然產物研究。E-mail：jhchen@fio.org.cn