高純度磷脂酰膽堿的制備及其脂肪酸分析

樓喬明，徐 杰，孫兆敏，薛長湖*

(中國海洋大學食品科學與工程學院，山東 青島 266003)

高純度磷脂酰膽堿的制備及其脂肪酸分析

樓喬明，徐 杰，孫兆敏，薛長湖*

(中國海洋大學食品科學與工程學院，山東 青島 266003)

利用不同溶劑對大豆濃縮磷脂中各成分溶解性的差異，建立一種溶劑法制備高純度大豆磷脂酰膽堿的新工藝。大豆濃縮磷脂通過丙酮脫油、乙醇提取、活性炭脫色、乙腈萃取，可制備純度高達95%以上的大豆磷脂酰膽堿。大豆磷脂酰膽堿的脂肪酸主要為多不飽和脂肪酸，其中亞油酸占總脂肪酸的70.71%、亞麻酸11.04%。

溶劑法；磷脂酰膽堿；脂肪酸

Abstract：Due to the difference in solubility of concentrated soybean phospholipids in different solvents, a solvent method to prepare phosphatidylcholine with high purity was established. Concentrated soybean phospholipids were subjected to oilremoval by acetone, isolation by ethanol, decoloration by active carbon, and extraction by acetonitrile. The purity of prepared phosphatidylcholine was up to 95%. Fatty acid compositions of soybean phosphatidylcholine were mainly composed of polyunsaturated fatty acids, and the contents of linoleic acid and linolenic acid were 70.71% and 11.04%, respectively.

Key words：solvent method；phosphatidylcholine；fatty acid

磷脂酰膽堿(phosphatidylcholine，PC)是一種天然的表面活性劑，廣泛地存在于動植物體內，具有重要的生理功能和乳化功能，在食品、保健品、醫藥等行業中具有重要的用途[1-2]。

磷脂酰膽堿為白色蠟狀固體，在低溫下可結晶，不溶于丙酮，但溶于乙醇及乙醚，用氯仿-甲醇混合溶劑能很容易地從組織細胞中將其提取出來。在實際應用中，主要從大豆和蛋黃中提取，從其中提取出高純度的磷脂酰膽堿一直是磷脂研究的重要課題。目前磷脂酰膽堿主要從大豆磷脂中提取，提取磷脂酰膽堿可根據不同的需要選擇合適的提取方法，如有機溶劑法分離技術[3-4]、無機鹽復合沉淀技術[5-6]、柱層析法[7-8]、超臨界萃取技術[9-10]和高效液相色譜法(HPLC)[11-12]等。本實驗采用溶劑法，通過不同溶劑對磷脂溶解性的差異，從而來制備高純度的磷脂酰膽堿。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

大豆濃縮磷脂 天津市博迪化工有限公司；磷脂酰膽堿標準品 美國Sigma公司；丙酮、乙醇、乙腈、活性炭 天津市科密歐化學試劑有限公司。以上試劑均為分析純。

1.2 儀器與設備

6980N型氣相色譜儀 美國Agilent公司；Laborota 4000 efficient旋轉蒸發器 德國海道爾夫公司；AB135-S型精密電子分析天平 瑞士梅特勒-托利多公司。

1.3 方法

1.3.1 工藝流程

1.3.2 磷脂酰膽堿純度測定

薄層層析法(TLC)：展開劑為氯仿-甲醇-水(70:25:3，V/V)，點樣量為10μL，Dittmer-Lester試劑顯色。

高效液相色譜法(HPLC)：Inertsil NH2(4.6mm×250mm，5μm)，柱溫25℃，流動相為乙腈-甲醇-水(65:25:10，V/V)，紫外檢測波長206nm。

1.3.3 脂肪酸分析

取一定量制備的大豆磷脂酰膽堿，加入2mol/L HCl-甲醇溶液1mL，60℃水浴15min(甲酯化)，冷卻后，加入1mL正己烷萃取，萃取液用無水硫酸鈉干燥，取1μL進樣。

安捷倫6980 N型氣相色譜儀，F I D檢測器，INNOWax石英毛細管柱(30m×0.32mm)，進樣口溫度230℃，檢測器溫度250℃，柱溫以3℃/min由170℃升到210℃，保持10min。

2 結果與分析

2.1 磷脂酰膽堿的純度分析

圖1 磷脂酰膽堿的TLC色譜圖Fig.1 TLC chromatogram of phosphatidylcholine

圖2 溶劑法制備的大豆磷脂酰膽堿的HPLC色譜圖Fig.2 HPLC chromatogram of phosphatidylcholine prepared by solvent method

大豆濃縮磷脂的主要成分為磷脂，同時含有一定量的大豆油和水。本工藝用丙酮將濃縮磷脂中的大豆油、殘留水分及其他微量雜質除去，得到粉末狀磷脂。根據磷脂酰肌醇不溶于乙醇而磷脂酰膽堿溶于乙醇的性質，通過乙醇浸提達到磷脂酰膽堿與磷脂酰肌醇分離的目的。再利用乙腈在低濃度下對磷脂酰膽堿具有非常高的選擇性，可將磷脂酰膽堿與磷脂酰乙醇胺分離，從而制備高純度的磷脂酰膽堿[13]。

從圖1可以看出，溶劑法制備的大豆磷脂酰膽堿和標準品有相同的Rf值，并且是單一的藍色點；從圖2可以看出，溶劑法制備的大豆磷脂酰膽堿在色譜圖上只有一個主峰，通過面積歸一法計算，純度達到95%以上。乙腈雖然對磷脂溶解性不好，但在低濃度下卻對磷脂酰膽堿具有非常高的選擇性，其制備大豆磷脂時幾乎可以達到純的磷脂酰膽堿，而無磷脂酰乙醇胺[14]。因此用乙腈來制備高純度的磷脂酰膽堿是可行的。

2.2 大豆磷脂酰膽堿的脂肪酸分析

表1 大豆濃縮磷脂和大豆磷脂酰膽堿的脂肪酸組成Table 1 Fatty acid compositions of concentrated soybean phospholipids and phosphatidylcholine

圖3 大豆濃縮磷脂氣相色譜圖Fig.3 GC chromatogram of concentrated soybean phospholipids

圖4 溶劑法制備的大豆磷脂酰膽堿氣相色譜圖Fig.4 GC chromatogram of phosphatidylcholine prepared by solvent method

用氣相色譜法對原料大豆濃縮磷脂和制備的大豆磷脂酰膽堿進行脂肪酸分析，結果列于表1。從表1和圖3、4可以看出，大豆磷脂酰膽堿主要由棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞油酸、亞麻酸這5種脂肪酸組成，其中主要為亞油酸(70.71%)，其次為亞麻酸(11.04%)和棕櫚酸(10.09%)。與大豆濃縮磷脂的脂肪酸組成比較，大豆磷脂酰膽堿中棕櫚酸、硬脂酸和油酸的含量相對較少；而多不飽和脂肪酸的含量相對較多，其中亞油酸比大豆濃縮磷脂高21%，亞麻酸高27%。亞油酸和亞麻酸是人體不能自行合成的必需脂肪酸，有助于生長、發育，具有軟化心腦血管、促進血液循環、降脂降壓、促進新陳代謝、調節內分泌和減緩衰老等生理活性[15-16]。

3 結 論

3.1 本實驗所確立的溶劑法制備高純度大豆磷脂酰膽堿工藝，通過丙酮脫油、乙醇提取、活性炭脫色、乙腈萃取就可制備純度達到95%以上的高純度大豆磷脂酰膽堿；此法簡單易行，適用于中小規模尤其是實驗室對高純度大豆磷脂酰膽堿的制備。

3.2 大豆磷脂酰膽堿含有大量的多不飽和脂肪酸，其亞油酸可達總脂肪酸的70.71%。

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Preparation and Fatty Acid Analysis of Phosphatidylcholine with High Purity

LOU Qiao-ming，XU Jie，SUN Zhao-min，XUE Chang-hu*
(College of Food Science and Engineering, Ocean University of China, Qingdao 266003, China)

TS214.9；Q545

A

1002-6630(2010)18-0224-03

2009-12-18

“十一五”國家科技支撐計劃項目(2008BAD94B04)

樓喬明(1981—)，男，博士研究生，研究方向為海洋活性物質。E-mail：louqm2005@163.com

*通信作者：薛長湖(1964—)，男，教授，博士，研究方向為水產利用化學。E-mail：xuechanghu110@126.com