六種中藥水提物體外抗氧化活性研究

顧瑋蕾,王春麗

(華東理工大學藥學院,上海 200237)

六種中藥水提物體外抗氧化活性研究

顧瑋蕾,王春麗＊

(華東理工大學藥學院,上海 200237)

從羥自由基清除率、還原力、抑制脂質過氧化能力和清除DPPH自由基等四個方面研究了旱蓮草、積雪草、萊菔子、馬齒莧、女貞子、枇杷核等六味中藥水提物的體外抗氧化作用。結果顯示,在羥自由基清除率方面,從強到弱清除能力依次是馬齒莧、積雪草、旱蓮草、枇杷核、女貞子和萊菔子。在還原力方面,六味中藥從強至弱順序依次是積雪草、馬齒莧、旱蓮草、枇杷核、女貞子和萊菔子。在抑制脂質過氧化方面,抗氧化能力從強到弱依次是馬齒莧、女貞子、萊菔子、枇杷核、積雪草和旱蓮草。在DPPH自由基方面,其清除能力從大到小依次是積雪草、馬齒莧、枇杷核、旱蓮草、女貞子和萊菔子。結論表明,六味中藥的水提物均具有一定的體外抗氧化活性。

羥自由基,還原力,脂質過氧化,中藥,DPPH

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

旱蓮草、積雪草、萊菔子、馬齒莧、女貞子、枇杷核 購于中藥店;抗壞血酸、七水合硫酸亞鐵、水楊酸、30%過氧化氫、三氯乙酸、氯化高鐵、鐵氰化鉀、硫代巴比妥酸、正丁醇等 國藥集團化學試劑有限公司,均為分析純。

DF-101S集熱式恒溫加熱磁力攪拌器、SHB-III型循環水真空泵 鞏義市英峪予華儀器廠;JA31002電子天平 上海天平儀器廠;AL204電子天平 梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司;UV1900紫外分光光度計 亞研電子;SORVALL LEGEND RT離心機 美國賽默飛世爾科技公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 中藥提取物的制備 分別取 5.00g萊菔子、枇杷核、女貞子、旱蓮草、積雪草和馬齒莧,分別加入100mL的去離子水,加熱回流提取 1.5h,真空抽濾,置 4℃冰箱保存備用。

1.2.2 抗氧化作用評價

1.2.2.1 DPPH法[5]DPPH是一種商業化廣泛應用,可用來檢測抗氧化活性的人工合成有機自由基。2mL DPPH乙醇溶液 (6×10-5mol/L),加入 2mL樣品溶液,混勻,室溫靜置30min,于517nm處測吸光度值。DPPH·清除率按下式計算：

式中：A0是不加樣品而加入去離子水的空白對照吸光度值;A1是加入樣品的吸光度值。

1.2.2.2 羥自由基的清除能力[6]清除羥自由基的能力是體外常用的評估抗氧化方法之一。本實驗采用了水楊酸捕獲法,利用 Fenton體系產生羥自由基,加入水楊酸來捕獲,能在 510nm產生強吸收的有色物質,通過測定其吸光度來判定。

取 2mmol/L的硫酸亞鐵溶液 1mL,6mmol/L過氧化氫 1mL,6mmol/L水楊酸 1mL,加入樣品 1mL,靜置 30min,以蒸餾水為參比,在 510nm處測定吸光度,計算羥自由基的清除率。

式中：A0為以溶劑代替藥液的試劑空白管的吸光度;Ax為加了藥液的吸光度;Ay為不加顯色劑的藥液的本底光密度,是為了減去藥液本身顏色對于實驗的影響。

1.2.2.3 還原力測定[7]還原能力的強弱,可以反映藥物的潛在抗氧化性能,是體外抗氧化的一個重要指標。本實驗用的是鐵氰化鉀法,取 2mL的樣品,加入 2mL的磷酸緩沖液(pH為 6.6)和 1%鐵氰化鉀溶液 2mL,混勻,在 50℃下保溫 20min,加入 10%的三氯乙酸溶液 2mL,振蕩混勻后取 2mL的混合液,加入2mL去離子水和 0.1%的三氯化鐵溶液 0.4mL,靜置10min,用去離子水為空白,在 700nm下進行比色,吸光度的值越大,說明還原力越強。

1.2.2.4 脂質過氧化的測定[8]丙二醛是脂質過氧化的終產物之一,能夠和硫代巴比妥酸反應產生紅色的絡合物,通過加入藥液是否能夠降低丙二醛的產生,能夠一定程度上反映抗脂質過氧化能力的強弱。

取 0.5mL的雞蛋黃勻漿(10%,v/v),加入 0.1mL的樣品和 0.4mL的去離子水,再加入 0.07mol/L的硫酸亞鐵溶液孵化 30min。隨后加入 20%三氯乙酸溶液 1.5mL和 0.8%硫代巴比妥酸溶液(溶于適量氫氧化鈉)1.5mL,振蕩均勻,95℃水浴保持 60min。冷卻后,每個試管中加入 5mL正丁醇,充分萃取,在3000r/min離心 10min,傾出上層紅色有機層,在波長532nm處測定吸光度值。抗氧化指數按下式進行計算：

式中：Ac是不加樣品而加入去離子水的空白對照吸光度值;As是加入樣品的吸光度值。

2 結果與討論

2.1 抗氧化實驗結果

2.1.1 DPPH法 六種樣品 (0.5mg/mL)對于羥自由基的清除能力如圖 1所示,此六種中藥水提液對DPPH均有不同程度的清除能力。清除率從強到弱依次是積雪草、馬齒莧、枇杷核、旱蓮草、女貞子和萊菔子,清除率 (n=3,means±SD)依次為 87.11%± 0.64%、78.00%±0.10%、77.42%±0.66%、70.04%± 0.29%、68.06%±0.55%和 48.21%±0.36%。

圖 1 六種中藥水提液對DPPH自由基的清除能力

2.1.2 羥自由基清除能力 六種樣品 (5mg/mL)對于羥自由基的清除能力如圖 2所示,此六種中藥水提液均對羥自由基具有不同程度的清除能力。清除作用從強到弱依次是馬齒莧、積雪草、旱蓮草、枇杷核、女貞子和萊菔子,清除率 (n=3,means±SD)分別為 41.26% ±0.33%、29.71% ±0.49%、27.80% ± 0.24%、16.81% ±0.59%、13.56% ±1.07%以及10.60%±1.29%。

圖 2 六種中藥水提液羥自由基清除率的比較

2.1.3 還原力測定 中藥樣品濃度均為 5mg/mL,其還原力比較如圖 3所示。還原能力從大到小依次是積雪草、馬齒莧、旱蓮草、枇杷核、女貞子和萊菔子,對應的吸光度值 (n=3,means±SD)分別是 1.046± 0.009947、0.9704±0.01214、0.7958±0.01203、0.7668 ±0.01640、0.6704±0.01074和 0.6584±0.002987。

圖3 六種中藥水提物還原力的比較

2.1.4 脂質過氧化 六種中藥水提液(50mg/mL)對于脂質過氧化的抑制能力如圖 4所示。在相同濃度下,抗氧化指數(n=3,means±SD)在 10%以上的有馬齒莧 (20.24% ±2.44%)、女貞子 (18.54% ± 3.63%)、萊菔子 (13.11%±4.30%);枇杷核、積雪草和旱蓮草的抗脂質過氧化作用微弱。

圖 4 六種中藥水提液的脂質過氧化抑制能力

2.2 討論

從羥自由基清除率、還原力、抑制脂質過氧化和清除DPPH自由基四個體外抗氧化實驗可以看出,六種中藥水提物均表現出了不同程度的抗氧化能力,并以馬齒莧、積雪草綜合作用較好,可能與其清熱功效相關。

從羥自由基和脂質過氧化兩個方法來看,馬齒莧水提物抗氧化活性最強。余慶皋等[11]對馬齒莧的根、莖、葉分別水提,進行羥自由基實驗,也顯示了良好的作用,與本研究結果相一致。

在還原力和DPPH法方面,抗氧化能力最強的均是積雪草水提液,且積雪草還原力的吸光度超過 1,而DPPH清除率超過 80%。目前尚無積雪草抗氧化作用的相關報道,關于其抗氧化機制有待進一步研究。

3 結論

本實驗利用四種體外評價方法,初步研究了旱蓮草、積雪草、萊菔子、馬齒莧、女貞子、枇杷核等這六味中藥水提物的抗氧化活性,為其抗氧化機制的深入研究奠定基礎,為其在抗氧化領域開發利用提供參考。

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Study on antioxidant activities of six Chinese traditional herbs in vitro

GUW ei-lei,WANG Chun-li＊
(School of Pharmacy,East China University of Science and Technology,Shanghai 200237,China)

The antioxidant ac tivities of extrac ts w ith de ionized wa te r of He rba Ec lip tae,He rba Cente llae,rad ish seed,He rba Portulacae,Ligus trum Luc idum and the loqua t core we re s tud ied.Extrac ts we re m easured by hyd roxyl rad ica ls scaveng ing ac tivity assay,reduc ing p owe r assay,lip id p e roxida tion assay and DPPH assay.O n the hyd roxyl rad ica ls scaveng ing ac tivity assay,He rba Portulacae,He rba Cente llae,He rba Ec lip tae,loqua t core, Ligus trum Luc idum,and rad ish seed we re showed antioxidant ac tivity from high to low.O n the reduc ing p owe r, He rba Cente llae,He rba Portulacae,He rba Ec lip tae,loqua t core,Ligus trum Luc idum,and rad ish seed we re showed antioxidant ac tivity from high to low.O n the l ip id p e roxida tion assay,He rba Portulacae,Ligus trum Luc idum,rad ish seed,loqua t core,He rba Cente llae and He rba Ec l ip tae we re showed antioxidant ac tivity from high to low.O n the DPPH assay,He rba Cente llae,He rba Portulacae,loqua t core,He rba Ec lip tae,Ligus trum Luc idum and rad ish seed we re showed antioxidant ac tivity from high to low.The results showed tha t a ll of the s ix he rbs had the antioxidant ac tivities in d iffe rent leve l.

hyd roxyl rad ica ls;reduc ing cap ac ity;l ip id p e roxida tion;Chinese trad itiona l he rbs;DPPH

TS201.2

A

1002-0306(2010)03-0190-03

目前,抗氧化劑已廣泛應用于食品工業、醫藥行業和化妝品行業。中藥日益成為天然抗氧化劑的主要來源之一[1-2]。本研究所選旱蓮草、積雪草、萊菔子、馬齒莧、女貞子、枇杷核等臨床常用的中藥,分別具有理氣、化痰、清熱、補益等方面的功效。萊菔子主要用于食積氣滯癥和痰盛氣喘癥[3];枇杷核主治咳嗽兼胸脅刺痛等癥[4];女貞子主治眩暈耳鳴、腰膝酸軟等;旱蓮草可用于牙齒松動、須發早白等癥;積雪草主治濕熱黃疸、癰瘡腫毒、中暑腹瀉等[3];馬齒莧用于熱毒血痢等[3]。在上述六味藥中,萊菔子和馬齒莧是藥食兩用之品,旱蓮草、積雪草和女貞子是可以用于保健品的中藥。本文研究六味中藥的體外抗氧化活性,為其進一步開發利用提供參考。

2009-04-30 ＊通訊聯系人

顧瑋蕾(1985-),女,碩士研究生,主要從事中藥、食品抗氧化作用的研究。