秦優(yōu)11號(hào)制種去雜保純及純度鑒定技術(shù)

宋賢勇，王 文，孫統(tǒng)慶

（江蘇中江種業(yè)股份有限公司，江蘇南京 210036）

秦優(yōu)11號(hào)屬半冬性甘藍(lán)型三系雜交油菜品種，由咸陽(yáng)市農(nóng)業(yè)科學(xué)院和三原縣種子公司育成，不育系2168A為細(xì)胞質(zhì)雄性不育系，商品油菜籽含油量44.6%～45.3%，芥酸含量0.0%～0.1%，硫苷含量25.68～25.73μmol/g，為高含油率的“雙低”雜交油菜。2008年通過(guò)陜西省、江蘇省和國(guó)家農(nóng)作物品種審定委員會(huì)審定，適宜在長(zhǎng)江中下游地區(qū)和江蘇全省種植。但是，由于自身特性和許多不良因素的影響，對(duì)該品種純度產(chǎn)生一定的影響，因而制種過(guò)程中去雜保純以及種子成熟收獲后純度鑒定工作尤為重要，并且必須建立嚴(yán)格的質(zhì)量跟蹤檔案。現(xiàn)將秦優(yōu)11號(hào)去雜保純和純度鑒定技術(shù)措施介紹如下。

1 秦優(yōu)11號(hào)制種去雜保純技術(shù)

1.1 嚴(yán)把親本種子純度關(guān)

秦優(yōu)11號(hào)親本種子不育系為2168A，恢復(fù)系為5012C，由陜西省咸陽(yáng)市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所和三原縣種子公司提供，實(shí)行了嚴(yán)格的植物檢疫，2008年和2009年正季純度鑒定都在99%以上。

1.2 確保基地隔離安全

秦優(yōu)11號(hào)制種基地位于陜西省三原縣，四季分明，土層深厚，土壤肥沃，灌溉條件好，同時(shí)擁有天然的隔離屏障，是雜交油菜理想制種基地。為杜絕周邊其他十字花科作物（白菜、自生油菜等）的影響，要在秦優(yōu)11號(hào)親本抽薹前連根帶蔸徹底清除。

1.3 加強(qiáng)生育期去雜除劣工作

秦優(yōu)11號(hào)每年制種面積均達(dá)1 000畝，涉及農(nóng)戶多，去雜除劣工作貫穿于生育期的整個(gè)過(guò)程，公司專門安排技術(shù)員進(jìn)行指導(dǎo)監(jiān)督。苗期和蕾薹期根據(jù)親本生長(zhǎng)形態(tài)特征拔除母本行中的白菜型株，多頭株，葉色差異明顯株，長(zhǎng)相高大、株形松散、花蕾飽滿的植株，父本行中的變異株。在初花前5～7天，主花序花蕾明顯時(shí)進(jìn)行打頂保純工作，避免微量花粉對(duì)純度的影響。2008年和2009年制種基地都遭遇了“初春低溫”，造成不育系轉(zhuǎn)育嚴(yán)重，對(duì)花蕾飽滿、肥大的植株采取重打頂甚至二次打頂措施。花期著重去除母本行里的保持系株、微量花粉、優(yōu)勢(shì)株及其他雜株，拔除父本行里的異品株和變異株。成熟期全面清理前期遺留的各種雜株、異常蘿卜角果株及開反花的種間雜株。

1.4 抓好收獲管理工作

收獲時(shí)避免機(jī)械混雜，父本終花后及時(shí)砍去，清理出田，并檢查一二次。2008年正是由于宣傳不夠，管理不嚴(yán)，監(jiān)督不力，出現(xiàn)了少量恢復(fù)系混入雜交種的現(xiàn)象。當(dāng)母本田塊有80%左右的角果黃熟時(shí)進(jìn)行收獲，各田塊單獨(dú)堆放，分場(chǎng)脫粒，避免機(jī)械混雜。

2 秦優(yōu)11號(hào)純度鑒定技術(shù)

2.1 青海鑒定

5月10日左右，在制種基地按片區(qū)差異，采用5點(diǎn)取樣法選定取樣田塊，每塊田取5點(diǎn)，每點(diǎn)取5株，隨機(jī)分上中下部位采取黃熟角果，曬干，脫粒，混合均勻，在青海省農(nóng)業(yè)科學(xué)院試驗(yàn)地進(jìn)行種植鑒定。搶早播種，確保通過(guò)春化。每個(gè)樣品播1 000粒左右，不間苗，少施或不施基肥，不追氮肥，促使早開花，植株瘦弱有利于鑒定。在蕾期和花期根據(jù)秦優(yōu)11號(hào)品種特征特性進(jìn)行純度鑒定。

2.2 正季鑒定

正季鑒定在我公司六合基地于當(dāng)年9月份到來(lái)年4月進(jìn)行，每個(gè)樣品播1 000粒左右，不間苗，少施或不施基肥，不追氮肥。對(duì)入庫(kù)樣品同時(shí)進(jìn)行直播和移栽鑒定，同時(shí)不育系和恢復(fù)系各播一小區(qū)用于對(duì)比，在苗期至盛花期根據(jù)雜交種的特征和育性表現(xiàn)進(jìn)行純度鑒定。

2.3 SSR鑒定

本公司利用SSR分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)秦優(yōu)11號(hào)的雙親及F1進(jìn)行了引物篩選和純度檢測(cè)技術(shù)的研究，篩選出引物BN12和BN1表現(xiàn)為穩(wěn)定的共顯性 （見圖1），經(jīng)過(guò)兩年與田間種植鑒定結(jié)果的對(duì)比，誤差均在容許誤差范圍內(nèi)，這表明篩選的SSR標(biāo)記完全可以用于秦優(yōu)11號(hào)雜交種純度的快速、準(zhǔn)確鑒定。

圖1 引物BN12(A)和BN1(B)的篩選結(jié)果

2.4 三種鑒定方法比較分析

以本公司正季純度鑒定結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)參考值，分析發(fā)現(xiàn)青海鑒定結(jié)果及200株幼苗SSR分析結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)參考值之間的差值均在允許誤差范圍內(nèi) （見表1）。青海鑒定周期長(zhǎng)，費(fèi)用高，樣品質(zhì)量不能代表最終收購(gòu)樣品質(zhì)量；正季鑒定結(jié)果準(zhǔn)確，但結(jié)果滯后于銷售；而SSR技術(shù)穩(wěn)定可靠，對(duì)DNA質(zhì)量要求不高，時(shí)間短效率高，最大優(yōu)點(diǎn)在于可以將恢復(fù)系鑒定開來(lái)，避免了產(chǎn)量上的損失，具有很大的應(yīng)用潛力。

表1 秦優(yōu)11號(hào)純度青海、江蘇與SSR鑒定結(jié)果比較

秦優(yōu)11號(hào)純度的保證以田間控制為重中之重，嚴(yán)把親本關(guān)，安全隔離，嚴(yán)格去雜除劣，避免機(jī)械混雜，后期借助于異地鑒定、正季鑒定及SSR鑒定技術(shù)，做到心中有數(shù)，將優(yōu)質(zhì)種子投放到市場(chǎng)中去，增強(qiáng)企業(yè)的社會(huì)責(zé)任心。