胰腺內分泌腫瘤ghrelin和受體GHS-R 1A的表達及患者血漿ghrelin、 瘦素水平

吳海燕 黎明 劉丹 肖雨 朱麗明 劉貝 向紅丁 陳杰 徐濤 魯重美 陳原稼

·論著·

胰腺內分泌腫瘤ghrelin和受體GHS-R 1A的表達及患者血漿ghrelin、 瘦素水平

吳海燕 黎明 劉丹 肖雨 朱麗明 劉貝 向紅丁 陳杰 徐濤 魯重美 陳原稼

目的檢測胰腺內分泌腫瘤患者血漿及腫瘤組織ghrelin水平、血漿瘦素水平，探討它們之間的關系及臨床意義。方法采用ELISA法檢測11例胰腺內分泌腫瘤患者的術前血漿ghrelin及瘦素水平，以28例正常志愿者作為對照。免疫組織化學染色法檢測11個腫瘤和27個對照組織ghrelin及其受體GHS-R 1A的表達。 并與臨床病理資料進行相關分析。結果胰腺內分泌腫瘤患者血漿ghrelin水平為(16.0±5.0) pg/ml，顯著低于對照組的(21.0±2.0)pg/ml (P=0.047)；瘦素水平為(0.34±0.03 )ng/ml，與對照組的(0.38±0.04) ng/ml無顯著差異。腫瘤患者的血漿ghrelin與瘦素水平呈正相關(P=0.015),但與各項臨床病理指標均不相關；對照組的血漿瘦素水平與體重指數呈正相關(P=0.002),而腫瘤患者兩者不相關。腫瘤組織ghrelin的表達率明顯低于對照組織(64%對100%,P=0.004)，而GHS-R 1A的表達率與對照組無顯著差異。腫瘤組織ghrelin和GHS-R 1A的表達與各項臨床病理指標均不相關。結論胰腺內分泌腫瘤表達ghrelin及GHS-R 1A，患者血漿ghrelin及瘦素水平發生變化。

內分泌腺腫瘤； Ghrelin； 瘦素； 受體GHS-R 1A； 體重指數

Ghrelin是1999年發現的有著極廣泛生物學作用的胃腸肽類激素，它能促腫瘤細胞生長，促進食欲，和肥胖密切相關[1]。 2003年Corbetta等[2]首次報道了一例以分泌ghrelin為主的胰腺內分泌腫瘤——ghrelinoma，以后，文獻陸續報道了ghrelinoma和高ghrelin血癥的神經內分泌腫瘤[2-4]，其共同的臨床特點是患者預后極差[2-4]。 瘦素是與ghrelin作用相反的激素[5]。 本研究檢測胰腺內分泌腫瘤ghrelin及其受體GHS-R 1A的表達和患者血漿ghrelin和瘦素的水平，探討這些激素彼此之間的關系。

材料與方法

一、標本來源

選取2004年1月至2008年3月北京協和醫院確診的11例胰腺內分泌腫瘤患者的術前血漿標本，以28例正常志愿者(與腫瘤患者年齡、性別和體重相匹配)作為對照。8例患者經手術切除，共獲得11份腫瘤標本。同時以24例正常胰腺組織、1例瘤旁十二指腸組織和2例瘤旁肝臟組織作為對照。胰腺內分泌腫瘤的診斷參考House等[6]及朱預等[7]的標準。

二、ghrelin及其受體GHS-R 1A檢測

采用免疫組織化學法檢測。兔抗人ghrelin抗體和兔抗人GHS-R 1A抗體購自美國Phoenix公司。試劑盒(PV-6001)購自北京中杉金橋生物試劑有限公司。結果判斷：細胞核有棕黃著色者為陽性細胞。陽性細胞占總細胞數>25%為表達陽性。

三、血漿ghrelin及瘦素水平測定

每個Sep-Pak C18純化柱依次用5 ml甲醇、5 ml去離子水活化。每份待測血漿加入1/10體積的1mol/L HCl混勻，過Sep-Pak C18純化柱。用5 ml去離子水沖洗純化柱，用2 ml 90%甲醇洗脫樣本分裝2個EP管，經4℃干燥離心為干粉,-20℃保存。應用ghrelin酶免試劑盒(S-1222，Bachem公司) 檢測血漿ghrelin水平。按黎明等[8]方法檢測血漿瘦素水平。

四、統計學分析

結 果

一、一般臨床資料和腫瘤病理特征

11例胰腺內分泌腫瘤患者中,男4例,女7例,年齡33～66歲,中位年齡45歲,體重指數(body mass index, BMI)15.8～25.9 kg/m2,平均(21.2±1.1)kg/m2。4例為胃泌素瘤,3例胰高糖素瘤,4例無功能胰腺內分泌腫瘤。3例腫瘤位于胰頭部,5例位于胰體尾部,1例位于十二指腸,2例胰腺具體部位不詳；7例腫瘤最大徑≥2 cm,1例<2 cm,3例不詳；2例良性，9例惡性；10例腫瘤散發,1例為MEN-1相關性胰腺內分泌腫瘤。所有腫瘤均為高分化腫瘤。

二、術前血漿ghrelin、瘦素水平及其與BMI的關系

腫瘤患者的術前空腹血漿ghrelin水平為(16.0±5.0)pg/ml，顯著低于對照組的(21.0±2.0)pg/ml(P=0.047)；其中惡性腫瘤為(19.0±6.0)pg/ml，良性腫瘤為(5.5±2.0)pg/ml，良惡性腫瘤間無顯著差異。腫瘤組、對照組的血漿ghrelin水平與BMI均不相關(r=0.275,P=0.509；r=0.234,P=0.231)。

腫瘤患者血漿瘦素水平為(0.34±0.03)ng/ml，與對照組的(0.38±0.04)ng/ml無顯著差異。腫瘤組血漿瘦素水平與BMI無關(P=0.224)，而對照組的瘦素水平隨BMI增大而升高，呈正相關(P=0.002)。

三、血漿ghrelin水平與瘦素及臨床病理特征的關系

腫瘤患者術前血漿ghrelin水平與瘦素水平呈正相關(r=0.738,P=0.015);而對照組血漿ghrelin水平與瘦素水平不相關(r=0.159,P=0.419)。

腫瘤患者血漿ghrelin水平與患者性別、 腫瘤原發部位、腫瘤大小均不相關(P值分別為0.833、1.0和0.571)。

四、腫瘤組織ghrelin、GHS-R 1A的表達及其與臨床病理特征的關系

11個腫瘤中7個(64%)ghrelin表達陽性；27個對照組織均表達ghrelin(100%),相差顯著(P=0.004)。11個腫瘤組織中9個(82%)GHS-R 1A表達陽性,27個對照組織中25個(93%)GHS-R 1A陽性，兩者無顯著差異(圖1、2)。腫瘤組織ghrelin和GHS-R 1A表達與患者的性別、年齡、腫瘤的大小、良惡性、原發腫瘤部位、散發與否均無顯著相關。

圖1無功能胰腺內分泌腫瘤及瘤旁胰腺組織的ghrelin(a、b)和GHS-R 1A(c、d)的表達(免疫組化 ×200)

圖2胃泌素瘤及瘤旁十二指腸組織的ghrelin(a、b)和GHS-R 1A(c、d)的表達(免疫組化 ×200)

討 論

文獻報道[4，9]，胰腺神經內分泌腫瘤患者的血漿ghrelin水平與正常對照組無顯著差別。本研究結果顯示，腫瘤患者的血漿ghrelin水平顯著低于正常對照，其原因可能除了檢測例數均較少外,我們測定的是有生物活性的ghrelin水平,即酰基化的ghrelin,而非血漿ghrelin的總體水平。本組腫瘤組織ghrelin及GHS-R 1A的陽性表達率分別為64%和82%，與文獻報道接近[9]，但仍明顯低于正常胰腺組織。

在正常人群中,血漿瘦素的水平和BMI呈顯著正相關,這是因為瘦素主要是由脂肪組織合成分泌[10]。 本試驗結果也符合此規律。但腫瘤患者血漿瘦素的水平和BMI不相關,而與ghrelin水平呈正相關,表明胰腺內分泌腫瘤患者存在著多種激素水平的紊亂。

本組未納入胰島素瘤資料，這是因為絕大部分(>90%)胰島素瘤為良性,而其他胰腺內分泌腫瘤60%以上為惡性。此外，胰島素瘤患者多數伴高胰島素血癥,多數患者肥胖,他們血漿中和肥胖密切相關的激素ghrelin和瘦素很可能不同于其他胰腺內分泌腫瘤，故我們將另文報道。

[1] Kojima M,Hosoda H,Date Y,et al.Ghrelin is a growth-hormone-releasing acylated peptide from stomach. Nature，1999，402:656-660.

[2] Corbetta S,Peracchi M,Cappiello V,et al.Circulating ghrelin levels in patients with pancreatic and gastrointestinal neuroendocrine tumors:identification of one pancreatic ghrelinoma.J Clin Endocrinol Metab，2003，88:3117-3120.

[3] Tsolakis AV,Portela-Gomes GM,Stridsberg M,et al.Malignant gastric ghrelinoma with hyperghrelinemia.J Clin Endocrinol Metab，2004，89:3739-3744.

[4] Walter T,Chardon L,Hervieu V,et al.Major hyperghrelinemia in advanced well-differentiated neuroendocrine carcinomas:report of three cases.Eur J Endocrinol，2009，161：639-645.

[5] Tolle V,Kadem M,Bluet-Pajot MT,et al.Balance in ghrelin and leptin plasma levels in anorexia nervosa patients and constitutionally thin women.J Clin Endocrinol Metab，2003，88：109-116.

[6] House MG,Schulick RD.Endocrine tumors of the pancreas.Curr Opin Oncol,2006，18：23-29.

[7] 朱預,趙玉沛.胰腺內分泌腫瘤的診治.中華肝膽外科雜志，2003,9:452-453.

[8] 黎明,陰津華,張葵,等.高靈敏酶聯免疫分析法測定人脂肪細胞瘦素分泌.中華醫學雜志，2008，88：3293-3297.

[9] Ekeblad S,Lejonklou MH,Grimfjard P,et al.Co-expression of ghrelin and its receptor in pancreatic endocrine tumours.Clin Endocrinol，2007， 66：115-122.

[10] Peltz G,Sanderson M,Perez A,et al.Serum leptin concentration, adiposity, and body fat distribution in Mexican-Americans.Arch Med Res，2007，38：563-570.

2010-05-05)

(本文編輯：呂芳萍)

ExpressionofghrelinanditsreceptorGHS-R1Ainpancreaticendocrinetumorsandtheplasmalevelsofghrelinandleptin

WUHai-yan,LIMing,LIUDan,XIAOYu,ZHULi-ming,LIUBei,XIANGHong-ding,CHENJie,XUTao,LUChong-mei,CHENYuan-Jia.

DepartmentofGastroenterology,PekingUnionHospital,PekingUnionMedicalCollege,ChineseAcademyofMedicalSciences,Beijing100730,China

CHENYuan-jia,Email:yuanjchen@gmail.com；LUChong-mei,Email:pekingunion@yahoo.cn

ObjectiveTo study the plasma and intratumoral levels of ghrelin, leptin and their relationship and clinical significance in patients with pancreatic endocrine tumor.MethodsPreoperative plasma levels of ghrelin and leptin were detected by ELISA in 11 patients with pancreatic endocrine tumors and 28 normal controls. Expressions of ghrelin and its receptor GHS-R 1A were tested in 11 tumors and 27 paired control tissues by immunohistochemistry staining, and they were correlated with the clinicopathological characteristics.ResultsThe plasma levels of ghrelin was (16.0±5.0)pg/ml, which was significantly lower than that in normal controls [(21.0±2.0)pg/ml,P=0.047]. The plasma levels of leptin was (0.34±0.03)ng/ml, which was not significantly different with that in normal controls [0.38±0.04)ng/ml]. There was positive association between plasma levels of leptin and ghrelin (P=0.015), but was not associated with clinicopathological parameters. The plasma levels of leptin in control group was positively associated with BMI (P=0.002), but they were not associated in patients with tumor. The expression rate of ghrelin in tumor tissue was significantly lower than that in control group (64%vs100%,P=0.004). But the expression rate of GHS-R 1A was not significantly different between the two groups. The expression of ghrelin and GHS-R 1A in tumor was not significantly associated with clinicopathological parameters.ConclusionsThe ghrelin and its receptor GHS-R 1A were extensively expressed in pancreatic endocrine tumors, and the serum levels of ghrelin and leptin was changed.

Endocrine gland neoplasms; Ghrelin; Leptin; Receptor GHS-R 1A; Body mass index

10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2010.06.001

100730 北京,中國醫學科學院 北京協和醫學院 北京協和醫院消化內科(吳海燕、劉丹、朱麗明、劉貝、魯重美、陳原稼)，內分泌科 衛生部重點實驗室(黎明、向紅丁)，病理科(肖雨、陳杰);中國醫學科學院 北京協和醫學院 基礎醫學研究院 統計學教研室(徐濤)

陳原稼，Email:yuanjchen@gmail.com；魯重美，Email:pekingunion@yahoo.cn